七叶皂苷对大鼠三叉神经痛的改善作用_王蕊.pdf

口腔颌面外科杂志2023年2月 第33卷第1期Journal of Oral and Maxillofacial Surgery Vol33 No1 February,2023七叶皂苷对大鼠三叉神经痛的改善作用王蕊1，胡婷婷1，程慧欣1，王元银1，宋阳2（1.安徽医科大学口腔医学院，安徽医科大学附属口腔医院，安徽省口腔疾病研究中心实验室，安徽合肥230032；2.安徽医科大学第一附属医院疼痛科，安徽合肥230022）摘要目的：研究七叶皂苷（escin）对大鼠三叉神经痛（trigeminal neuralgia，TN）的治疗作用，并探讨其潜在的作用机制。方法：通过对大鼠行眶下神经慢性缩窄性损伤（chronic constriction injury of the infraorbital nerve，CCI-ION）的方式来构建大鼠TN模型。将大鼠随机分为假手术组（sham组）、CCI-ION组、CCI-ION+卡马西平（carbamazepine，CBZ；42 mg/kg）组和escin低、中、高剂量（6、12、24 mg/kg）组。手术当天开始灌胃给药,连续治疗14 d，sham组和CCI-ION组给予等剂量0.9%氯化钠溶液；使用Von Frey纤维细丝检测大鼠术侧口面部机械痛阈；实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测三叉神经节（trigeminal ganglion，TG）中肿瘤坏死因子-（tumor necrosis factor-，TNF-）、白细胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、Toll样受体-4（Toll like receptor-4，TLR-4）和核因子-B（nuclear factor kappa-B，NF-B）mRNA的表达变化；苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色观察TG的病理变化。结果：行为学结果显示，与sham组相比，CCI-ION组大鼠的机械疼痛阈值显著下降（P0.01）；与CCI-ION组相比，各给药组大鼠机械疼痛阈值在给药第3天后逐渐提高，至第14天时，所有给药组机械疼痛阈值均显著增高（P0.01）。RT-qPCR结果显示，与sham组相比，CCI-ION组TNF-、IL-1、TLR-4及NF-B mRNA的表达显著增加（P0.01）；与CCI-ION组相比，各给药组TNF-、IL-1、TLR-4及NF-B mRNA的表达显著降低（P0.05）。组织病理学结果显示，与sham组相比，CCI-ION组观察到TG出现明显的炎性细胞浸润、施万细胞数增多及脱髓鞘的变化；与CCI-ION组相比，各给药组光学显微镜下可见TG炎症情况有不同程度的减轻。结论：Escin对CCI-ION诱导的TN有一定的改善作用，其机制可能与促炎细胞因子释放的下调有关，并可能通过TLR4/NF-B信号通路发挥作用。关键词三叉神经痛；七叶皂苷；Toll样受体4；核因子-B中图分类号 R745.11；R732文献标志码 ADOI:10.3969/j.issn.1005-4979.2023.01.002Ameliorative effect of escin on pain with trigeminal neuralgia in ratsWANG Rui1,HU Tingting1,CHENG Huixin1,WANG Yuanyin1,SONG Yang2（1.School and Hospital of Stomatology,Anhui Medical University,Key Lab of Oral Diseases Researchof Anhui Province,Hefei 230032,Anhui Province;2.Department of Pain Control,the First AffiliatedHospital of Anhui Medical University，Hefei 230022,Anhui Province,China）Abstract Objective:To investigate the effect of escin on trigeminal neuralgia(TN)and its potential mechanism.Methods:Chronic constriction injury of the infraorbital nerve(CCI-ION)was used to establish TN model in rats.Rats weredivided into six groups:Sham group,CCI-ION group,CCI-ION+carbamazepine(CBZ,42 mg/kg)group,low-dose escin(6mg/kg)group,medium-dose escin(12 mg/kg)group and high-dose escin(24 mg/kg)group.Intragastric administration wasstarted from the day of surgery for consecutive 14 days,and sham group and CCI-ION group were given equal dose ofsaline.Von Frey test was used to detect the facial mechanical allodynia of rats.The mRNA of tumor necrosis factor-(TNF-),interleukin-1(IL-1),Toll like receptor-4(TLR-4)and nuclear factor kappa-B(NF-B)in trigeminal ganglion(TG)was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-qPCR).Hematoxylin and eosin(HE)stain-接受日期：2022-01-18修回日期：2022-06-15基金项目：安徽省重点研究和开发计划项目（201904a07020062）作者简介：王蕊，硕士研究生.E-mail:通信作者：王元银，教授.E-mail:8口腔颌面外科杂志2023年2月 第33卷第1期Journal of Oral and Maxillofacial Surgery Vol33 No1 February,2023三叉神经痛（TN）是一种慢性神经性疼痛疾病，发作时疼痛剧烈，严重影响生活质量。TN的病因尚未完全阐明，目前广泛认为该病与三叉神经根进入区的神经血管受压有关，可导致该处神经纤维发生脱髓鞘，使轴突过度兴奋，并能够产生表现为自发性疼痛的异位冲动1。抗癫痫药物卡马西平（CBZ）和奥卡西平是治疗TN的一线药物，但是常因药物的副作用而无法长期使用这2种药物2。因此，新型抗TN药物的开发和应用越来越受到人们的关注。Toll样受体-4（TLR-4）和核因子-B（NF-B）作用范围较广，可参与炎症、肿瘤、免疫及细胞生长等生物学过程3。研究显示，TLR-4和NF-B在TN的神经免疫应答及疼痛反应中起重要作用4-5。TLR-4/NF-B信号通路可能是神经病理性疼痛的一条潜在镇痛途径。七叶皂苷（escin）是从七叶树的成熟种子中提取得到的三萜皂苷混合物。实验研究表明，escin具有明显的抗感染、抗炎、抗水肿、抗肿瘤和神经保护等作用6-7。闫芳等8通过紫杉醇诱导外周神经病变，发现escin是治疗外周神经病理性疼痛的潜在有效药物。本研究通过动物实验，探讨escin对慢性神经损伤诱导的大鼠TN是否能起镇痛作用。1材料和方法1.1材料1.1.1动物由安徽医科大学实验动物中心供给的成年雄性SD大鼠，体质量为180200 g。常规分笼饲养，饲料、饮水供应充足，室温控制在25 左右，一天中交替光照的时间为12 h，黑暗时间12 h，空气湿度约为50%55%。动物实验经安徽医科大学实验动物伦理委员会批准（LLSC20190123）。1.1.2试剂和仪器七叶皂苷钠（山东绿叶制药有限公司，中国）；CBZ（北京诺华制药有限公司，中国）；组织RNA提取试剂盒（上海奕杉生物科技有限公司，中国）；PrimeScript RT reagent Kit试剂盒和TB Green Premix Ex Taq试剂盒（TaKaRa公司，日本）；PCR引物（生工生物工程股份有限公司，中国）；苏木精染液和伊红染液（Servicebio科技有限公司，中国）；Von Frey细丝（Danmic公司，美国）；高速低温组织研磨仪（Servicebio科技有限公司，中国）；荧光定量PCR仪（Thermo Scientific公司，美国）。1.2方法1.2.1建立大鼠疼痛模型通过对大鼠单侧眶下神经行慢性缩窄性损伤构建大鼠TN模型。应用10%水合氯醛对待手术的大鼠行腹腔注射（按3.5 mL/kg的剂量给予）。麻醉起效后将大鼠置于手术操作台上，暴露出左侧面部待手术区。对术区皮肤进行消毒，在大鼠左侧触须垫区距鼻翼下缘旁约8 mm处做一56 mm的切口，无菌钝性分离并显露出一部分眶下神经，并用5-0号线在该部分神经上结扎2道线，控制结扎力度以神经出现轻度变形为宜，2道结扎线之间相距约2 mm。最后使用3-0号线缝合皮肤。假手术组（sham组）大鼠使用同样的操作手法，但该组眶下神经分离暴露后无须对其进行结扎。1.2.2动物分组和处理将大鼠随机分为6组，分别为sham组、CCI-ION组、CCI-ION+CBZ组（42 mg/kg）、CCI-ION+escin-L组（6 mg/kg）、CCI-ION+escin-M组（12 mg/kg）和CCI-ION+escin-H组（24 mg/kg），每组各6只。手术当天开始灌胃给药，连续给药14 d。ing was used to observe the pathological changes of TG.Results:Behavioral results showed that compared with the shamgroup,mechanical pain threshold of rats in CCI-ION group decreased significantly(P0.01);compared with the CCI-IONgroup,the mechanical pain threshold of rats in each drug administration group began to increase gradually since the 3rdday of drug administration,and significantly increased in all drug administration groups on the 14th day after gavage(P0.01).RT-qPCR results showed that compared with the sham group,mRNA expression of TNF-,IL-1,TLR-4 and NF-B significantly increased in CCI-ION group(P0.01);compared with the CCI-ION group,mRNA expression of TNF-,IL-1,TLR-4 and NF-B in all treatment groups significantly decreased(P0.05).Histopathological resul