咪达唑仑调控miＲ-214/MAPK/EＲK-CＲEB通路对缺氧复氧诱导的大鼠海马神经元细胞增殖及凋亡的影响舒蕤赵立芳彭井印张如意(滨州医学院附属医院麻醉科，山东滨州256603)〔摘要〕目的探讨咪达唑仑对缺氧复氧诱导的大鼠海马神经元细胞增殖、凋亡的影响及其对miＲ-214/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(EＲK)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CＲEB)通路的调控作用。方法采用缺氧复氧诱导大鼠海马神经元细胞建立细胞损伤模型(缺氧复氧组)，加入不同剂量的咪达唑仑处理细胞(3、6、12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧组);实验分组:NC组(未经处理的大鼠海马神经元细胞)、12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧+anti-miＲ-con组(anti-miＲ-con转染入大鼠海马神经元细胞后加入12μmol/ml咪达唑仑处理24h后进行缺氧复氧处理)、12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧+anti-miＲ-214组(anti-miＲ-214转染入大鼠海马神经元细胞后加入12μmol/ml咪达唑仑处理24h后进行缺氧复氧处理)、PD98059+12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧+anti-miＲ-214组(anti-miＲ-214转染入大鼠海马神经元细胞后加入12μmol/ml咪达唑仑与50μmol/L抑制剂PD98059处理24h后进行缺氧复氧处理);采用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用实时荧光定量(qＲT)-聚合酶链反应(PCＲ)检测miＲ-214的表达量;采用Western印迹检测MAPK、p-EＲK、p-CＲEB、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果与NC组比较，缺氧复氧组细胞活力明显降低，Bcl-2蛋白水平与miＲ-214的表达水平明显降低，凋亡率与Bax、MAPK、p-EＲK、p-CＲEB蛋白水平升高(P＜0.05);与缺氧复氧组比较，咪达唑仑不同剂量组细胞活力明显升高，Bcl-2蛋白水平与miＲ-214的表达水平明显升高，凋亡率与Bax、MAPK、p-EＲK、p-CＲEB蛋白水平明显降低(P＜0.05);与12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧+anti-miＲ-con组比较，12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧+anti-miＲ-214组细胞活力与Bcl-2蛋白水平明显降低，凋亡率与Bax、MAPK、p-EＲK、p-CＲEB蛋白水平明显升高(P＜0.05);与12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧+anti-miＲ-214组比较，PD98059+12μmol/ml咪达唑仑+缺氧复氧+anti-miＲ-214组细胞活力与Bcl-2蛋白水平明显升高，凋亡率与MAPK、p-EＲK、p-CＲEB、Bax蛋白水平明显降低(P＜0.05)。结论咪达唑仑可通过上调miＲ-214的表达而抑制MAPK/EＲK-CＲEB通路的活化从而促进缺氧复氧诱导的大鼠海马神经元细胞增殖及抑制细胞凋亡。〔关键词〕咪达唑仑;m...
