黑龙江八一农垦大学学报第35卷收稿日期：2021-11-08基金项目：黑龙江八一农垦大学三横三纵科研团队支持计划（TDJH201804）。作者简介：赵飞宇（1996-），男，黑龙江八一农垦大学动物科技学院2019级硕士研究生。通信作者：孙东波，男，教授，博士研究生导师，E-mail：sunvet@126.com猫传染性腹膜炎病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备赵飞宇，杨丹，赵鹏宇，李梓健，李璐，孙东波（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆163319）摘要：为制备猫传染性腹膜炎病毒N蛋白特异性多克隆抗体，研究根据HLJ/HRB/2016/11毒株N基因序列设计引物，通过PCR进行基因扩增，并将目的基因在BamHⅠ、HindⅢ酶切位点克隆至pET32a（+）原核表达载体上，将其转化到BL21（DE3）感受态细胞，经终浓度为1mmol·L-1的IPTG在16℃诱导16h后，SDS-PAGE检测表达产物，结果显示，在约69kda处出现目的条带，且该蛋白主要以可溶形式表达。将重组N蛋白经Ni柱纯化后，按每只BALB/c小鼠免疫50μg，三免后7d采血分离血清，经间接ELSA检测结果显示，获得的N蛋白可被特异性识别且效价可达到1∶12800。研究制备的猫传染性腹膜炎病毒N蛋白及其多克隆抗体为后续猫传染性腹膜炎的疫苗提供基础。关键词：猫传染性腹膜炎病毒；衣壳蛋白；原核表达；多克隆抗体中图分类号：S852.4文献标识码：A文章编号：1002-2090（2023）01-0046-07ProkaryoticExpressionofFelineInfectiousPeritonitisVirusNProteinandPreparationofPolyclonalAntibodyZhaoFeiyu，YangDan，ZhaoPengyu，LiZijian，LiLu，SunDongbo（CollegeofAnimalScienceandTechnology，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity，Daqing163319）Abstract：InordertopreparepolyclonalantibodiesspecificforNproteinoffelineinfectiousperitonitisvirus，primersweredesignedbasedontheNgenesequenceofHLJ/HRB/2016/11strain，andthegenewasamplifiedbyPCR.ThetargetgenewasclonedintopET32a（+）prokaryoticexpressionvectorattheBamHⅠandHindⅢrestrictionsites.TheproteinwastransformedintoBL21（DE3）competentcellsandinducedbyIPTGwithafinalconcentrationof1mmol·L-1for16hat16℃.SDS-PAGEdetectedtheexpressionproduct.Theresultsshowedthatthetargetbandappearedatabout69kda，andtheproteinwasmainlyexpressedinsolubleform.TherecombinantNproteinwaspurifiedbyNicolumnandimmunizedBALB/Cmiceattherateof50μg/mouse.Bloodsample...
