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梅毒螺旋体重组酶介导扩增检测方法的建立_刘建礼.pdfVIP免费

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中国国境卫生检疫杂志2023年2月第46卷第1期ChineseFrontierHealthQuarantineFeb.2023,Vol46,No.1梅毒(Syphilis)是一种广泛流行的性传播疾病,属于我国法定报告的乙类传染病,也是海关出入境检疫的监测传染病之一。据世界卫生组织发布的全球流行报告,2016年全球新增梅毒患者超过630万[1],主要集中在南亚、东南亚和次撒哈拉非洲。我国2021年报告梅毒病例48万例,发病率约33/10万,居全国甲乙类传染病报告发病数的第3位[2]。梅毒螺旋体(Treponemapallidum,TP)是梅毒的病原体,因其透明不易着色,又称苍白螺旋体。实验室检测是梅毒临床诊断的主要依据,主要检测方法是暗视野显微镜检查和血清学试验,其中血清学检测应用最为广泛[3]。核酸检测技术具有极高的敏感性和特异性,在各类病原体的临床检测中展现出良好的应用前景,重组酶介导的等温扩增(Recombi-nase-aidamplification,RAA)技术是近年发展起来的一种核酸检测方法,可以在常温条件下对目的基因进行等温扩增,具有简便、快速、灵敏的特点[4]。本研究探索建立基于RAA技术的梅毒螺旋体核酸检测方法。1材料与方法1.1材料HIV、HBV、HCV阳性血液及正常血液样本为本实验室保存的出入境体检人群的血液样本。RAA基础荧光反应液、B6100混匀器和1620型Developmentofrecombinase-aidamplificationassayfordetectionofTreponemapallidumLIUJianli,JIAOYanli,XIAOLiliGeneralAdministrationofCustoms(Beijing)InternationalTravelHealthCareCenter,Beijing100013,ChinaAbstract:ObjectiveToestablisharecombinase-aidamplification(RAA)assayforthedetectionofTreponemapal-lidum.MethodsTheprimersandprobeweredesignedbasedontheconservedsequencepolyAgeneofTreponemapallidum.RAAassaywasconstructedbyprimercombinationoptimization.Thesensitivityandrepeatabilityofthees-tablishedassaywereevaluatedbytestingstandardplasmid.Thespecificitywastestedforcommonblood-transmittedpathogenssuchasHIV,HBV,HCVandnormalbloodsamples.ResultsThelowdetectionlimitoftheestablishedRAAassaywas10copies/reaction,atwhichthemethodstillhadgoodrepeatability.Thedetectiontimeofthemethodwaslessthan20minutes,andaconfirmedamplificationsignalcouldbedetectedin2-3minutes.Nocross-reactionwasobservedwithHIV,HBV,HCVandnormalblood.ConclusionTheestablishedTreponemapalli...

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