配方评估法与BCOP法对护肤品刺激性评价的对比研究_唐文迪.pdf

广 东 化 工 2023 年 第 4 期 84 第 50 卷 总第 486 期 配方评估法与配方评估法与 BCOP 法对法对 护肤品刺激性评价的对比研究护肤品刺激性评价的对比研究 唐文迪1，佘振南2，何仟莹1，张浩1*(1广州流行美时尚商业股份有限公司，广东 广州 510000；2昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明 650500)摘 要分别使用配方评估法与牛角膜浑浊渗透性方法(BCOP 法)进行刺激性评价，并比较二者结果的差异性。选取 6 款市售滞留型护肤产品，使用配方评估法对各产品的配方进行分析，按基配成分、功效成分、防腐成分进行区分，并对结合其功效宣称对其刺激性进行评估；使用 BCOP 法通过产品对牛角膜浊度与渗透性的影响变化，来判断产品的刺激性，并对二者的评估结果进行关联性分析。结果表明，在两种方法的刺激性评估中，样品 F 均出现刺激性，样品 A 仅在配方评估法中呈现刺激性，二者具有一定地关联度。关键词配方评估；BCOP；护肤品；刺激性 中图分类号TQ 文献标识码A 文章编号1007-1865(2023)04-0084-03 Comparative Study of Formula Evaluation Method and BCOP Method on the Irritation Evaluation of Skin Care Products Tang Wendi1,She Zhennan2,He Qianying1,Zhang Hao1*(1.BINF Co.,Ltd.,Guangzhou 510000；2.School of Pharmaceutical Science&Yunnan Provincial Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products,Kunming Medical University,Kunming 650500,China)Abstract:Formula evaluation method and Bovine corneal opacity and permeability(BCOP method)were used to evaluate the irritation,and the differences between the two results were compared.Six retention skin care products on the market were selected,and the formula of each product was analyzed by formula evaluation method,which was distinguished by basic ingredients,functional ingredients and anti-corrosion ingredients,and its irritation was evaluated in combination with its efficacy claim;BCOP method was used to judge the irritation of the product through the influence of the product on bovine corneal turbidity and permeability,and the correlation analysis was carried out on the evaluation results of the two.The results showed that in the irritation evaluation of the two methods,sample f showed irritation,and sample a only showed irritation in the formula evaluation method,and the two had a certain degree of correlation.Keywords:formula evaluation；BCOP；skin care products；irritation 据统计，2020 年护肤品市场规模约 2600 亿销售额，在未来 5 年内的预期增速约为 10%1。护肤品的主要消费群体为女性、儿童，使用方式为直接涂抹于面部和身体皮肤，因而消费者对所使用护肤品的安全性非常关注2。自 2020 年我国颁布化妆品监督管理条例以来3，各系列规章、标准已开始逐步完善，而 2021 年化妆品安全评估技术导则(2021 年版)开始施行4，为进一步提升化妆品的质量安全提供了重要保障。对护肤品成品的安全评价分为化妆品安全评估与实验评估两方面，刺激性是安全评价中的重要环节。化妆品安全评估从产品基本情况、原料组成、配方分析等环节进行5，其中以配方评估使用较多6，实验评估分为体外实验评估、动物实验评估、人体实验评估7。随着欧盟“3R”原则的普及，动物替代实验方法逐渐兴起8，而牛角膜浑浊渗透性测试(Bovine corneal opacity and permeability,BCOP)是法规认可的刺激测试的替代方法之一9。BCOP 属于器官类模型实验，是经济合作与发展组织(OECD)认可的眼刺激试验的替代方法之一，其原理为牛角膜可在离体 24 h 内维持正常生理和生化功能，将预处理好的牛角膜通过夹持器固定，模拟牛眼的状态，并通过浊度仪和酶标仪分别测量样品对牛角膜作用后的浊度值和渗透率变化，计算受试物的体外刺激评分(IVIS)以评价测试产品的刺激性10。配方评估法对配方成分的历史风险数据、预估使用量及数量可在定性层面对产品的刺激性进行评估，评估的准确度与获得的数据量及评估者的经验成正相关，当成分数量过于庞大、或成分不明确时容易造成评估偏差。BCOP 法可从定量层面对产品的刺激性进行评估，其测试结果可直观地反应不同产品的刺激性，但无法明确配方成分的具体导致刺激性的成分或原因。本文通过对随机选择的市售产品样品分别使用配方评估法与 BCOP 法进行刺激性评价，以初步考察两种评估方法对同一产品刺激性评价的异同，并讨论两种评估方法的关联性。1 仪器与材料仪器与材料 1.1 实验材料 牛眼组织，测试当天上午取自广州地区屠宰场，并置于冰冷 HBSS 溶液中于 2 h 内运往实验室。1.2 试剂与仪器 无酚红 MEM 培养基粉末，Hanks 平衡盐、杜氏磷酸盐缓冲盐水，荧光素钠，生物级，购于 Sigma-Aldrich 公司；含酚红 MEM 培养基液体，生物级，购于 Biosharp 公司；新生牛血清，青霉素-链霉素溶液 100X，生物级，购于湖南鑫泉科技有限公司；无水乙醇，分析纯，购于西陇化工股份有限公司；二次水，实验室自制。OPMASTER牛角膜浊度仪，上海梅理实验科技有限公司；全波长酶标仪，赛默飞世尔科技；ZXSD-A1090 生化培养箱，上海智城分析仪器制造有限公司；SQP 万分之一电子秤，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；恒温水浴锅，宁波群安实验仪器有限公司；1000 L 移液枪，赛多利斯；镊子、手术刀、手术剪，市售；烧杯、培养皿等，蜀牛玻璃仪器有限公司。1.3 溶液配制方法 无酚红 MEM 培养基：取 1 瓶无酚红 MEM 粉剂(1 L 装)溶于 1 L 二次水，并加入 1%新生牛血清、1%青霉素-链霉素溶液，混合均匀备用。HBSS 溶液：取 1 瓶 Hanks 平衡盐粉剂(1 L 装)溶于 1 L 二收稿日期 2022-08-17 基金项目 云南省基础研究计划项目(202201AT070134)作者简介 唐文迪(1993-)，男，广西桂林人，硕士研究生，主要从事化妆品功效与安全评价工作。*为通讯作者：张浩(1986-)，男，云南昆明人，硕士研究生，高级工程师，主要从事化妆品配方研究及化妆品功效活性成分研究及 化妆品功效评价研究。2023 年 第 4 期 广 东 化 工 第 50 卷 总第 486 期 85 次水，混合均匀备用。0.4%荧光素钠溶液：称取 200 mg 荧光素钠粉末，溶于50 mL DPBS 溶液备用。1.4 测试样品 所有测试样品均为市售产品，详细信息见表 1。表表 1 测试样品信息测试样品信息 Tab.1 Test sample information 产品序号 类型 功效宣称 A 精华液 保湿、美白 B 精华液 保湿、修复 C 面膜 保湿、舒缓 D 面膜 保湿、修复、舒缓 E 喷雾 保湿 F 导出液 去角质 2 实验方法实验方法 2.1 配方分析法 将 6 款市售产品的配方按基配成分、功效成分、防腐成分进行区分，护肤品的防腐剂使用量为范围变化较小的恒定值，因此可以通过配方位置的排列顺序对各成分使用量进行估算，并对结合其功效宣称对产品的刺激性进行综合评估。2.2 BCOP 实验 2.2.1 牛角膜预处理 将无酚红 MEM 培养基、牛角膜夹持器于 37 环境下预热。选择无损伤的牛角膜沿巩膜边缘 23 mm 处剪下，将牛角膜固定在预热的牛角膜夹持器上，前后室注满预热的无酚红MEM 培养基，于 32 培养箱中孵育 1 h。2.2.2 牛角膜基础浊度值测试 将孵育结束的牛角膜从培养箱中取出，更管前后室无酚红MEM 培养基，并用 OPMASTER 牛角膜浊度仪测定所有牛角膜基础浊度值，并将牛角膜按浊度值分为阴性组(二次水)、阳性组(无水乙醇)、样品组，每组平行使用 3 个牛角膜。2.2.3 样品作用后牛角膜浊度值测定 移除角膜夹持器前室培养基，加入测试样品 0.75 mL，将夹持器竖直放置于 32 培养箱中暴露 10 min。暴露结束后，将前室中的测试样品用含酚红 MEM 培养基清洗至样品无残留，再用无酚红 MEM 培养基注入前室，于 32 培养箱中孵育 120 min 后再次用 OPMASTER 牛角膜浊度仪测定所有牛角膜的浊度值。2.2.4 牛角膜渗透性测试 移除前室培养基并加入 1.00 mL 荧光素钠溶液，将夹持器竖直放回培养箱中孵育 90 min。孵育完成后，收集后室中的培养基并转移 360 L/孔到 96 孔板中，在 490 nm 下测定其 OD值。2.2.5 牛角膜浊度与渗透性计算及评价方法 使用 OPMASTER 软件进行各样品 IVIS 评分计算，并根据 OECD 指南和联合国全球化学品统一分类和标识制度(UN GHS)9，对实验结果进行分类。表表 2 预测模型预测模型 Tab.2 Prediction model IVIS GHS 分类 眼刺激/腐蚀性分级 3 不分类 无刺激性 3，55 无法预测 无法预测 55 分类 1 腐蚀或严重刺激性 3 结果与讨论结果与讨论 3.1 配方评估法分析结果 如表 3 所示，样品 A 熊果苷含量较高，加之一定量的软化角质成分，综合评估认为该配方可能出现一定刺激性；样品F 羟基乙酸含量较高，防腐剂组成复杂，综合评估认为该配方较大概率出现一定刺激性；其他成分均无明显的刺激性评估反馈。表表 3 各产品配方分析及刺激性评估各产品配方分析及刺激性评估 Tab.3 Formula analysis and irritation evaluation of each product 序号 基配成分 功效成分 防腐成分 潜在刺激性判断 A 水，聚乙二醇-8，丁二醇，甘油，羟乙基哌嗪乙烷磺酸，EDTA 二钠，氯化钠，聚山梨醇酯-20，柠檬酸钠-熊果苷，乙酰酪 氨酸，酵母菌溶胞 物等 65 个功效成分 1,2-己二醇，对羟基苯乙酮，辛酰羟肟酸，乙基己基甘油，1,2-戊二醇，辛甘醇 熊果苷含量较高，并含有软化角质成分，或具有一定刺激性 B 水，甘油，丁二醇，羟乙基脲，双-PEG-18 甲基醚二甲基硅烷，角鲨烷，双丙甘醇，丙烯酸(酯)类共聚物钠，磷脂，卵磷脂，EDTA