母婴分离产后抑郁大鼠脑内5...变化及参芪解郁方的干预作用_姜圣楠.pdf

中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 836 母婴分离产后抑郁大鼠脑内5-羟色胺及其代谢产物的变化及参芪解郁方的干预作用姜圣楠1,2，曲淼2，王丹2，李净娅3，杨歆科2，田雷瑜4，唐启盛2（1北京中医药大学，北京 100029；2北京中医药大学第三附属医院，北京 100029；3浙江省中医院，杭州 310006；4北京中医药大学中医学院医学实验教学中心，北京 100029）摘要：目的：观察母婴分离产后抑郁大鼠前额叶皮质和海马5-羟色胺（5-HT）及其代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）的含量，探讨不同剂量参芪解郁方的干预作用。方法：60只SD孕鼠，随机分为正常组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组和西药组，采用母婴分离法制备产后抑郁大鼠，灌胃两周后检测各组大鼠前额叶皮质、海马5-HT及其代谢产物5-HIAA含量。结果：模型组强迫游泳不动时间较正常组显著增加（P0.01），蔗糖水消耗量、旷场实验水平得分和垂直得分均较正常组显著降低（P0.01）。中药高、中、低剂量组和西药组强迫游泳不动时间较模型组显著降低（P0.01）；中药高、中、低剂量组和西药组蔗糖水消耗量、旷场实验水平得分较模型组均显著升高（P0.01，P0.05）；中药高、中剂量组和西药组旷场实验垂直得分较模型组均显著升高（P0.01）。模型组前额叶皮质、海马5-HT及其代谢产物5-HIAA含量较正常组均显著降低（P0.01）。中药高、中、低剂量组和西药组前额叶皮质、海马5-HT及其代谢产物5-HIAA含量较模型组均升高（P0.01，P0.05）。结论：参芪解郁方通过调节产后抑郁大鼠单胺类神经递质及其代谢产物水平发挥抗抑郁作用。关键词：母婴分离；产后抑郁；神经递质；5-羟色胺；5-羟吲哚乙酸；参芪解郁方；机制基金资助：国家自然科学基金项目（No.81804024），中医药传承与创新“百千万”人才工程（岐黄工程）岐黄学者（No.国中医药人教发201812号）Changes of 5-hydroxytryptamine and metabolites in the brain of maternal and infant separation postpartum depressed rats and the intervention effects of Shenqi Jieyu FormulaJIANG Sheng-nan1,2,QU Miao2,WANG Dan2,LI Jing-ya3,YANG Xin-ke2,TIAN Lei-yu4,TANG Qi-sheng2(1Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China;2Beijing University of Chinese Medicine Third Affiliated Hospital,Beijing 100029,China;3Zhejiang Provincial Hospital of Chinese Medicine,Hangzhou 310006,China;4Medical Experimental Teaching Center of School of Traditional Chinese Medicine,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China)Abstract:Objective:To observe the contents of 5-hydroxytryptamine(5-HT)and its metabolite 5-hydroxyindolenacetic acid(5-HIAA)in prefrontal cortex and hippocampus of postpartum depression rats separated from mother and infant,and to explore the intervention effect of different doses of Shenqi Jieyu Formula.Methods:Sixty SD pregnant rats were randomly divided into normal group,model group,high dose group,medium dose group,low dose group and western medicine group.Postpartum depression rats were prepared by mother-infant separation method.After intragastric administration,the behavior of rats was evaluated and the contents of 5-HT and its metabolite 5-HIAA in prefrontal cortex and hippocampus of each group were detected.Results:The forced swim immobility time in the model group was significantly increased compared with that in the normal group(P0.01),and the sucrose water consumption,the open field test level score,and the vertical score were all significantly decreased compared with the normal group(P0.01).The immobility time of forced swimming in the Chinese medicine high-,medium-,研究报告通信作者：曲淼，北京市朝阳区安外小关街51号北京中医药大学第三附属医院，邮编：100029，电话：010-52075438E-mail：ivy_内文2.indd 8362023/2/28 10:36:26中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 837 产后抑郁症（postpartum depression，PPD）是指产后4周内出现的抑郁情绪，严重影响产妇的身心健康和生活质量。目前认为抑郁症发病与患者体内5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）及其代谢产物水平失调有关1-2，PPD作为抑郁症的亚型之一，其发病机制与5-HT及其代谢产物的水平失调也关系 密切3。本课题组前期已通过激素模拟妊娠状态（hormone-simulated pregnancy，HSP）后突然停撤法制备PPD大鼠，表明PPD大鼠脑内5-HT及其代谢产物失衡，参芪解郁方可调节PPD脑内5-HT及其代谢产物的异常4-5。本研究在此基础上采用贴合人类PPD发病过程的母婴分离方法构建PPD大鼠，进一步观察不同剂量参芪解郁方对于PPD 5-HT及其代谢产物的影响。材料1.动物 SPF级SD孕鼠60只，孕16 d，体质量（20010）g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2012-0001。本研究获得北京中医药大学实验动物伦理委员会批准（批准号：BUCM-4-201612501-4022）。实验过程中动物自由摄食和饮水（蔗糖水消耗实验除外），室内安静，光照周期为12 h（7：0019：00），室温2022，相对湿度为60%70%。2.药物及制备 参芪解郁方由党参、黄芪、郁金等组成，参芪解郁方中药配方颗粒购于北京中医药大学第三附属医院，按 60 kg成人用量（20 mg/d）7倍计算每100克大鼠用量（0.25 mg/d），按照灌胃高、中、低剂量煎药浓缩，浓度分别为2.5、1.25、0.625 g生药/mL，溶于双蒸水，于4 冰箱贮存备用，临用前加热。盐酸氟西汀胶囊（规格：20 mg/粒，批号：2090A），购于礼来苏州制药有限公司，按浓度为0.25 mg/mL临用时溶于双蒸水中。3.试剂 5-HT（批号：028K5152）、5-羟吲哚乙酸（5-hydroxyindoleacetic acid，5-HIAA）（批号：1413645）、3,4-二羟基苄胺（3,4-dihydroxybenaylamine，DHBA）（批号：850217）均购自Sigma。4.仪器 SW-CJ-ID型单人单面洁净工作台（苏州苏洁净化设备有限公司）；5600A型高效液相色谱仪（美国ESA公司）；5600A型8通道库仑电化学检测器（荷兰ANTEC公司），电极：ESA Model 6210 fourchannel cell，控制软件：ESA Software Version3.1；2K15型超速低温离心机（德国Sigma）；QL-902型涡旋振荡仪（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；Centrifuge 5415D型离心机（Eppendorf）。方法1.分组 孕16 d SD大鼠，单笼饲养，购入后适应性喂养3 d，3 d后进行旷场实验，根据评分结果筛选60只合格孕鼠，并随机分为正常组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组和西药组，每组10只。2.造模 孕鼠分娩后以小鼠出生作为第0天（P0），除正常组外，其余组分别于P1P21进行母婴分离，每天4 h（9：00 13：0 0），分离时将幼鼠移至另一笼中，保持幼鼠温 度（301）左右，母婴分离结束后将幼鼠送回对应母鼠笼中。所有幼鼠于P22断乳。3.药物干预 造模结束后对大鼠进行药物干预，药物灌胃体积为1 mL/100 g体质量。中药高、中、低剂量组分别予高、中、低剂量自拟参芪解郁方。西药组予盐酸氟西汀胶囊水溶液。正常组、模型组予等容双蒸水。每周灌胃体积按动物体质量调整，灌胃2周，灌胃结束后进行行为学测试，并处死取材。4.行为学测试4.1 强迫游泳实验（forced swimming test，FST）第1天，将各组大鼠在安静状态下置于直径25 cm、高度60 cm、水深35 cm的圆柱形缸内进行预游泳，时间15 min，水温2425。结束后，用毛巾擦干，将大鼠置于28 的环境中30 min后放回鼠笼。第2天同一时间（24 h后）进行强迫游泳正式实验，在同一时间、同样条件下让待测大鼠游泳5 min，并记录5 min内大鼠呈现不动状态的时间，以秒（s）为单位。4.2 蔗糖水消耗实验 灌胃结束后，第1天进行蔗糖水消耗实验。实验前大鼠禁水24 h，24 h后给予各组大鼠1%蔗糖水，并计算1 h内每只大鼠自由饮用1%蔗糖水的消耗量。蔗糖水 消耗量（g）=测定前瓶重（g）测定后瓶重（g）。and low-dose groups and the western medicine group was significantly decreased compared with that in the model group(P0.01);sucrose water consumption and open field test level scores in the high-,medium-,and low-dose Chinese medicine groups and the western medicine group were increased compared with those in the model group(P0.01,P0.05).The vertical scores in the o