两种猪伪狂犬gE抗体ELISA检测试剂盒效果评价_陈滢锴.pdf

-39-两种猪伪狂犬 gE 抗体 ELISA 检测 试剂盒效果评价 陈滢锴1 张红云1,2 彭小玉1 陈海兰1 王金子2,3 齐豫川4（1.广西大学，广西 南宁 530005；2.广西璞缔恩葳生物技术有限公司，广西 南宁 530007；3.广西民族大学海洋与生物技术学院，广西 南宁 530006；4.中国科技开发院广西分院，广西 南宁 530022）【摘 要】目的：为了评估 A、B 两种猪伪狂犬 gE 抗体 ELISA 检测试剂盒的检测效果，为猪伪狂犬 gE 抗体 ELISA 检测试剂盒提供选择依据。方法：试验将 12 份待检血清样品进行检测并计算 A、B 试剂盒的符合率和阳性率；通过对 3 份留样血清样品进行梯度稀释、设置平行实验进行检测，评估两种试剂盒的重复性、灵敏度和稳定性。结果：用两种试剂盒检测，样品的阳性率均为 33.3%，符合率为 100%；通过稀释留样血清样品的检测和平行试验发现：用 A 试剂盒检测两份样品，检出显示阳性的最低稀释度分别为 164 和 116；用 B 试剂盒检测 2 份样品，检出显阳性的最低稀释度分别为 132 和 18。结论：两种试剂盒重复性好，均适用于临床样品的 PRV gE 抗体检测，但 A 试剂盒灵敏度高于 B 试剂盒，而 B 试剂盒稳定性更高且价格更低。说明生产实践中应对 A、B 试剂盒的重复性、灵敏度、稳定性和价格因素进行综合考量，合理选择性价比更高试剂盒。【关键词】猪伪狂犬病；gE 抗体；ELISA 检测；灵敏度比较【中图分类号】S828 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1151(2022)12-0039-04 Effect Evaluation of Two ELISA Kits for Detecting gE Antibody in Swine Pseudorabies Abstract:Objective:To evaluate the detection effect of ELISA kit for gE antibody of swine pseudorabies A and B,and to provide a basis for selection of ELISA kit for gE antibody of swine pseudorabies.Methods:12 serum samples were tested and the coincidence rate and positive rate of kit A and B were calculated;the repeatability,sensitivity and stability of the two kits were evaluated by gradient dilution of 3 retention serum samples and parallel test.Results:The positive rate of samples was 33.3%and the coincidence rate was 100%when tested with two kinds of kits;through the detection of diluted serum samples and parallel test,it was found that the lowest dilution of positive results were 164 and 116 respectively when two samples were detected with kit A;two samples were tested with kit B,and the minimum dilution of positive reaction was 132 and 18,respectively.Conclusion:The two kits have good repeatability and are suitable for the detection of PRV gE antibody in clinical samples.However,the sensitivity of kit A is higher than that of kit B,while kit B has higher stability and lower price.It indicates that the repeatability,sensitivity,stability and price factors of A and B reagent kits should be comprehensively considered in production practice,and a more cost-effective kit should be reasonably selected.Key words:swine pseudorabies;gE antibody;ELISA test;sensitivity comparison 引言 伪狂犬病（pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）感染猪、牛、羊等多种家畜和野生动物引起的一种高度接触性传染病。猪是该病毒的主要天然宿主、贮存者和传播者1,2。猪被感染的典型临床特征是妊娠阶段的母猪出现流产，哺乳仔猪出现高热、神经症状，仔猪流产率高、死亡率高3，育成阶段的猪表现为体表皮肤瘙痒，出现疹块危及到猪群的健康成长。伪狂犬病在全球养猪业普遍存在4，我国自 1947 年首次报道该病以来，已有 20 多个省总第 24 卷 280 期 大 众 科 技 Vol.24 No.12 2022 年 12 月 Popular Science&Technology December 2022 【收稿日期】2022-09-23【基金项目】南宁市优秀青年科技创新创业人才培育项目（RC20190102）。【作者简介】陈滢锴（1998），男，四川宜宾人，广西大学在读硕士研究生，研究方向为动物疾病快速检测。【通信作者】王金子（1982），男，黑龙江齐齐哈尔人，广西民族大学海洋与生物技术学院副教授，博士，硕士生导师，研究方向为微生物资源利用；齐豫川（1991），男，河南郑州人，中国科技开发院广西分院工程师，硕士，研究方向为分子生物学。-40-（自治区、市）流行过该病，并在许多猪场呈暴发性流行5，伪狂犬病是现代养猪业要面对的主要病原之一，对生猪养殖业造成的经济损失十分严重6。近年来，更有报道认为 PRV可引起人眼内炎和脑炎7-9。这些发现表明 PRV 感染是一个潜在的公共卫生风险，不仅限于养猪业。因此，研究猪伪狂犬gE抗体ELISA检测试剂盒的效果对猪伪狂犬病的检测与净化刻不容缓。陈伟杰、董雅琴等研究者曾对市场上的一些 PR gE抗体检测试剂盒进行了比较分析，给出了一定的建议。其中，陈伟杰等10侧重于对不同试剂盒之间检测结果的一致性进行评价，董雅琴等11侧重于比较分析各试剂盒敏感性、特异性以及试验结果的重复性与准确性。杨涛1、陆江12等均对进口试剂盒进行比较研究。段群棚13、宋诗川5等均采用进口试剂盒进行检测。目前没有研究对市场上广泛使用的外国和国产品牌的检测灵敏度、稳定性、符合率及价格等方面进行系统地比较分析，忽略了国产试剂盒的重要性。本研究从试剂盒的检测灵敏度、稳定性、符合率及价格等方面进行比较分析，为养猪生产实践中选择更合理 PRV gE 抗体 ELISA 检测试剂盒提供依据。1 材料 1.1 血清样品血清样品 南宁市某规模养殖场送检的12份临床背景清楚的待检血清样品和实验室留样保存的 3 份血清样品。1.2 试剂试剂 A 厂家生产的 PRV gE 抗体试剂盒（批号为 AT 069，阻断 ELISA），简称 A 试剂盒；B 厂家生产的 PRV gE 抗体试剂盒（批号为 EP 0621017，阻断 ELISA），简称 B 试剂盒。1.3 主要仪器主要仪器 恒温培养箱（型号为 DHP-9162），购自上海齐欣科学仪器有限公司；酶标仪（型号为 F50），购自帝肯（上海）贸易有限公司。2 方法 2.1 试验设计试验设计 2.1.1 待检血清样品的检测待检血清样品的检测 将 12 份待检血清按顺序编号，按照试剂盒说明书要求分别用 A、B 两种试剂盒进行检测，计算其符合率（指 A、B 试剂盒检测同一样品同时定性为阳性或阴性数量之和除以检测总数）和阳性率。2.1.2 留样血清样品的检测留样血清样品的检测 3 份留样血清样品经梯度稀释后用 A、B 试剂盒检测，共设置平行实验 3 次，对两种试剂盒的重复性和灵敏度进行评估；对 3 份样品不同稀释度的 3 个结果（OD 值）计算变异系数（CV=平均值/标准差），再计算每个样品的平均变异系数，以衡量两种试剂盒的稳定性。2.2 结果判定结果判定 计算公式：S/N 值样品 OD 值/阴性对照 OD 值 A 试剂盒判定标准：S/N 值0.6 为阳性，S/N 值0.7 为阴性，S/N 值在 0.60.7 判为可疑。B 试剂盒判定标准：S/N 值0.6 为阳性，S/N 值0.6 为阴性。3 结果与分析 3.1 待检血清样品的检测结果待检血清样品的检测结果 用 A、B 试剂盒对 12 份待检血清样品的 gE 抗体进行检测，结果显示样品 3、样品 6、样品 7、样品 8 四份样品均为阳性，其余样品均为阴性，阳性率均为 33.3%（见表 1）；12 份样品中同时为阳性的样品有 4 份，同时为阴性的样品有8 份，无可疑项，故两种试剂盒的符合率为 100%（见表 2）。表表 1 A、B 试剂盒对待检血清样品的检测结果试剂盒对待检血清样品的检测结果 编号 A 试剂盒 B 试剂盒 S/N 值 判定 S/N 值 判定 1 0.140 阴性 0.90 阴性 2 0.915 阴性 0.87 阴性 3 0.063 阳性 0.05 阳性 4 0.998 阴性 0.96 阴性 5 0.989 阴性 0.90 阴性 6 0.065 阳性 0.09 阳性 7 0.069 阳性 0.07 阳性 8 0.067 阳性 0.04 阳性 9 0.967 阴性 0.91 阴性 10 0.935 阴性 0.91 阴性 11 1.009 阴性 1.10 阴性 12 0.988 阴性 0.98 阴性 阳性率 33.3%33.3%表表 2 A、B 试剂盒对待检血清样品的检测结果的符合率试剂盒对待检血清样品的检测结果的符合率 A 试剂盒 B 试剂盒 阳性样品数 可疑样品数 阴性样品数 合计 阳性样品数 4 0 0 4 可疑样品数 0 0 0 0 阴性样品数 0 0 8 8 合计 4 0 8 12 3.2 留样血清样品的检测结果留样血清样品的检测结果 用 A、B 试剂盒检测三份留样血清样品，结果均显示样品 1、样品 3 为阳性，样品 2 为阴性（见表 3 至表 4）。用 A试剂盒检测样品 1 和样品 3，检出显示阳性的最低稀释度分别为 164 和 116；用 B 试剂盒检测样品 1 和样品 3，检出显阳性的最低稀释度分别为 132 和 18；（见图 1 和图 3）故判断 A 试剂盒检测灵敏度更高，A、B 试剂盒均能有效检出样品 2 为阴性（见图 2）。A、B 试剂盒各稀释度的平均变异系数都小于 10%，说明其重复性良好，B 试剂盒各稀释度平均变异系数均小于 A 试剂盒，说明其重复性最好，稳定性最高（见图 4）。-41-表表 3 A 试剂盒对留样血清样品的检测结果（试剂盒对留样血清样品的检测结果（n=3）稀释度 样品 1 样品 2 样品 3 S/N 值 判定 S/N 值 判定 S/N 值 判定 12 0.0600.000 阳性 1.0000.043 阴性 0.1370.025 阳性 14 0.0730.005 阳性 1.0270.046