蕨麻多糖对-(60)Coγ射线辐射损伤小鼠的治疗作用_吴代燕.pdf

第 41 卷 第 1 期2023 年 2 月辐射研究与辐射工艺学报 J.Radiat.Res.Radiat.PVol.41,No.1February 2023蕨 麻多糖对60Co 射 线 辐 射 损 伤 小 鼠 的治疗作用吴代燕 冯洋洋 张琳梓 刘前虔 李杭雨 央尖珍玛 封海波（西南民族大学畜牧兽医学院 成都 610041）摘要 选取48只小白鼠，随机分为8组，每组6只，1组为对照组，2、3、4组为给药组，5组为照射组，6、7、8组为照射给药组，14组不照射，58组用5 Gy 60Co 射线照射，照后3060 min，1、5组和24、68组分别灌胃5 d蒸馏水和蕨麻多糖，第6天处死小鼠，采集血液、肝脏、脾脏和股骨进行检测。结果显示，蕨麻多糖可以使辐射小鼠红细胞和白细胞数量、血红蛋白含量升高、红细胞比积增大，使脾脏指数、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物岐化酶（SOD）的活性、淋巴细胞亚群比例上升，促进丙二醛（MDA）含量降低，一定程度提升辐射小鼠的DNA系数。蕨麻多糖对辐射损伤小鼠的造血系统、抗氧化系统和骨髓细胞DNA损伤具有较好的治疗效果。关键词 60Co 射线，蕨麻多糖，造血系统，抗氧化功能中图分类号 R818.74，R811.5，R967，S859.3DOI:10.11889/j.1000-3436.2022-0080Therapeutic effect of Potentilla anserina L polysaccharide on mice injured by 60Co ray irradiationWU Daiyan FENG Yangyang ZHANG Linzi LIU Qianqian LI Hangyu YANG Jianzhenma FENG Haibo(College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Southwest Minzu University,Chengdu 610041,China)ABSTRACT Forty-eight mice were randomly divided into eight groups of six mice each.Group 1 was the control group,groups 2,3,and 4 were the Potentilla anserina L drug groups,group 5 was the irradiation group,and groups 6,7,and 8 were the irradiated Potentilla anserina L drug groups.The control group was administered distilled water by gavage for 5 d without irradiation;the irradiation groups were irradiated with 5 Gy 60Co rays.In the drug groups,the mice were gavaged with distilled water and Potentilla anserina L polysaccharide within 3060 min after irradiation for 5 d and euthanized on the sixth day.The effects of different doses of Potentilla anserina L polysaccharide on the blood routine,organ index,DNA content in bone marrow,superoxide dismutase(SOD)activity,total antioxidant capacity(T-AOC),lymphocyte subpopulation ratio,and malondialdehyde(MDA)content in the mouse livers were determined.The results showed that Potentilla anserina L polysaccharide increased the erythrocyte and leukocyte counts,hemoglobin content,and erythrocyte-specific volume as well as the spleen index,liver T-AOC,SOD activity,and lymphocyte count and decreased the MDA content.The DNA coefficient of irradiated mice was improved to some extent.Potentilla anserina L polysaccharide exert good therapeutic effect on 基金资助：国家自然科学基金面上项目（31872511）、四川省应用基础研究计划项目（2021YJ0289）、引进人才科研启动金资助项目（RQD2021075）资助第一作者：吴代燕，女，1995年5月出生，西南民族大学2020级兽医硕士研究生通信作者：封海波，博士，副教授，E-mail:收稿日期：初稿 2022-08-16；修回 2022-10-27Supported by National Natural Science Foundation of China General Program(31872511),Sichuan Province Applied Basic Research Program(2021YJ0289),and Introduced Talents Research Start-up Fund(RQD2021075)First author:WU Daiyan(female)was born in May 1995.2020 class of veterinary master student at Southwest Minzu UniversityCorresponding author:FENG Haibo,doctoral degree,associate professor,master supervisor,E-mail:Received 16 August 2022;accepted 27 October 2022吴代燕等：蕨麻多糖对60Co 射线辐射损伤小鼠的治疗作用0103042the hematopoietic and antioxidant systems and can mitigate the DNA damage of bone marrow cells in radiation-injured mice.KEYWORDS 60Co ray,Potentilla anserina L polysaccharide,Hematopoietic system,Antioxidant systemCLC R818.74,R811.5,R967,S859.3随着科技的发展进步，放射性物质在工农业等领域应用广泛，电离辐射严重危害人体健康，大剂量电离辐射会导致骨髓造血功能障碍，DNA发生改变1，直接或间接对身体产生影响2。传统防辐射药物用量和副作用大，因此，天然低毒甚至无毒防辐射药物的研究热度与日俱增。目前，天然产物和药用植物的研究是制药领域中最重要的课题之一3，很多药用植物具有抗炎、止咳、抗真菌、抗癌、抗寒和抗氧化活性4。蕨麻（Potentilla anserina L）是一种藏药，又名人参果，是鹅绒委陵菜的膨大块根，广泛分布在中国西部地区，尤其是青藏高原。千百年来，它被当做功能性食品和民间食用药物5，富含黄酮、香豆素、生物碱、鞣质、多糖、三萜和皂苷等6，其提取物具有提高机体免疫力、抗氧化、补血等活性，有良好的开发潜力和较高的经济价值。植物多糖具有免疫调节7、抗氧化、抗缺氧8等功能，还有抗高血脂和保肝9-10等多种 药 理 作 用。蕨 麻 多 糖（Potentilla anserina L polysaccharide，PAP）是蕨麻的主要活性成分之一，具有调节免疫、抗氧化、抗衰老等功能11。研究表明，蕨麻多糖免疫调节作用较强，可以促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖12，拮抗和修复环磷酰胺导致的胸腺和脾的损伤13，对肝损伤模型有较好的保护作用14-15，使D-Gla N急性肝损伤小鼠肝组织中丙二醛（MDA）含量降低，提升超氧化物歧化酶（SOD）的活性。蕨麻多糖可能是通过清除自由基、保护细胞膜以及抗脂质过氧化16对小鼠肝起到保护作用的。本研究旨在探究不同剂量的蕨麻多糖对5 Gy 60Co 射线辐射损伤小鼠的造血系统、抗氧化系统和骨髓细胞DNA的治疗作用，为开发利用藏药蕨麻及其提取物和天然防辐射药物具有重大意义，为促进畜牧业发展提供参考价值。1 材料与方法1.1 材料与试剂蕨麻干燥根，购自四川省成都市药材市场；SOD试剂盒、T-AOC试剂盒、MDA试剂盒、总蛋白定量试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；CD3-FITC、CD8-PE、CD4-PE，购自赛默飞世尔科技公司；兽用血细胞分析溶血剂，购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。1.2 仪器与设备SB-5200DT超声波清洗机，购自宁波新芝生物科技股份有限公司；UV-5100紫外可见分光光度计，购自上海元析仪器有限公司；FA1604N电子天平，购自上海菁海仪器有限公司；RE-5203旋转蒸发器，购自上海亚荣生化仪器厂；SHB-S循环水式多用真空泵，购自郑州长城科工贸有限公司；XTP-500A高速多功能粉碎机，购自浙江省永康市红太阳机电有限公司。1.3 蕨麻多糖的提取蕨麻多糖提取方法参照文献 17、18：蕨麻干燥块茎粉碎药材预处理脱脂水浸取浓缩醇沉脱蛋白离心洗涤烘干蕨麻多糖，采用苯酚-硫酸法测得蕨麻多糖含量为87.5%。1.4 试验动物及分组48只SPF级雌性昆明小白鼠，68周龄，体重2530 g，来源：成都达硕实验动物有限公司，实验环境温度为（222），相对湿度为（5010）%，随机分为8组，每组6只，1组为对照组（0 Gy），2、3、4组为蕨麻多糖给药组（0 Gy蕨麻多糖给药组），5组为照射组，6、7、8组为照射蕨麻多糖给药组。饲养 1 周后，照射组和照射给药组小鼠使用5 Gy的60Co 射线照射，剂量率为0.8 Gy/min，单次全身均匀照射，照射后3060 min内给每只小鼠进行灌胃，照射当天为第0天。具体方案见表1，所有动物实验均经西南民族大学动物护理与使用委员会批准，并按照国家和国际动物福利标准进行。60Co放射源由四川农业科学院生物技术与核技术研究所提供。辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 2023,41:01030401030431.5 检测指标在实验的第6天给小鼠称量体重，眼睑采血后颈椎脱臼处死小鼠，并采取肝脏、脾脏和两侧的股骨。1.5.1 脏器指数对脾脏、肝脏进行称重，用公式（1）计算出脏器指数。肝脏保存在70 待测。脏器指数=肝（脾）脏重量（mg）/小鼠重量（g）(1)1.5.2 总蛋白含量测定使用双缩脲反应方法测定小鼠肝脏组织总蛋白含量。制备质量分数为10%的组织匀浆液：称取待测肝组织的重量，按重量与体积的比值1 9加入生理盐水，然后3 000 r/min离心10 min，取组织匀浆上清液待测。按照顺序加入标准蛋白液、组织匀浆上清液以及双缩脲试剂，用涡旋仪混匀，37 水浴10 min，流水冷却后，波长540 nm，光径1 cm比色杯，蒸馏水调零，测各管吸光值。1.5.3 超氧化物歧化酶活性测定把质量分数为10%的肝组织匀浆上清液稀释成1%，按照次序把试剂及样