经方中的北柴胡与南柴胡精准化应用探究_佘玉萍.pdf

年 月第 卷第 期.，.，收稿日期 基金项目 北京市科学技术委员会基金项目（）；内蒙古自治区兴安盟科技计划项目（兴财科 号）通信作者张媛，教授，硕士生导师，研究方向为中药药效物质基础及质量标准精准化，：；魏胜利，教授，博士生导师，研究方向为中药材定向培育及质量精准化，：作者简介 佘玉萍，硕士研究生，：经方中的北柴胡与南柴胡精准化应用探究佘玉萍，张沛沛，胡静燕，郭永华，曹前，尹香，胡秀华，赵婷，刘凤波，张媛，魏胜利，（北京中医药大学，北京；中药材规范化生产教育部工程研究中心，北京）摘要以实现经方功效的精准及稳定为目的，对中药柴胡的基原规格进行对比研究，揭示北柴胡（）与南柴胡（）在经方中精准化应用的规律。考证伤寒杂病论中以柴胡为君药方剂的功效主治，并利用 联用技术以及诱导的小鼠肝损伤模型和油酸钠诱导的 高脂血症细胞模型，探究柴胡在各方中发挥功效的差异，以及北柴胡与南柴胡水煎液的化学成分、保肝及降脂药效的差异。结果发现伤寒杂病论中以柴胡为君药的 个方剂在中医临床主要用于治疗消化、代谢、免疫、循环等系统的疾病，其中柴胡则主发挥保肝、利胆、降脂等功效，且在各方中发挥的功效各有侧重；化学成分分析结果表明北柴胡与南柴胡水煎液共有 个差异成分，鉴定了其中 个成分的化学结构，分别为 个皂苷类和 个黄酮类化合物；保肝药效实验结果显示北柴胡的水煎液可以明显降低肝损伤模型小鼠血清中谷草转氨酶（）的活性，且与南柴胡水煎液组相比具有极显著性差异（.）；降脂药效实验证明，北柴胡与南柴胡在降低 细胞中总胆固醇（）和甘油三酯（）含量上均具有极显著性差异（.），与北柴胡水煎液组相比，南柴胡水煎液组降脂效果更好。结果表明北柴胡与南柴胡水煎液的化学成分及保肝、降脂药效均存在差异，提示在中医临床处方中柴胡基原的精准化是必要的。研究为中医临床精准用药及基于用途的中药质量精准评价提供科学依据。关键词 柴胡；基原；经方；精准用药 ，（，；，），（）（）.（）.，.，.，.，.年 月第 卷第 期.，.，（）（.）.（）（）（.），.，.；：.柴胡为传统的大宗中药，始载于神农本草经，药用历史悠久，疗效显著。中国药典年版将伞形科植物柴胡 和狭叶柴胡 的根均作为正品的柴胡的来源，商品名分别为“北柴胡”和“南柴胡”。但是，历代医书中并未对处方中的柴胡基原规格加以明确的指定。同时，现代研究亦表明，二者在性状、化学成分、药理作用上均具有显著差异。李廷利等发现柴胡挥发油对发热家兔具有解热作用，且南柴胡的解热作用优于北柴胡，挥发油含量是北柴胡的 倍。而北柴胡粗皂 苷 提 取 液 的 保 肝 作 用 强 于 南 柴 胡，孙 蓉等研究发现北柴胡的总皂苷含量高于南柴胡，说明不同基原柴胡因化学成分的不同而在药效上呈现出差异。近年，国家大力推行古代经典名方的再次开发，国家药品监督管理局于 年公布了古代经典名方目录（第一批），其中明确经典名方中的药味来源对其发挥精准疗效具有重要意义。另外，许多临床医生在实践过程中提出“辨证施治准确，处方恰当，而出现临床性效疑窦”的问题，究其原因，可能在药材品种、入药部位、性效理论上古今有别。比如，在伤寒杂病论中大柴胡汤的君药柴胡，何种基原才能使其复方发挥最佳功效？基于上述问题，本研究采用 联用技术及 诱导的小鼠肝损伤模型和 高脂血症细胞模型探究北柴胡与南柴胡水煎液在化学成分、保肝及降脂药效的差别，为柴胡在经典方剂中的精准化应用提供参考。材料.仪器 超高效液相色谱仪、质谱仪购自美国 公司，离心机购自德国希格玛实验室离心机公司，气浴锅购自上海智诚分析仪器制造有限公司，高压灭菌锅购自上海施都凯仪器设备有限公司，细胞培养箱购自上海三腾仪器有限公司，酶标仪购自瑞士 公司。.药材药材分别来源于北柴胡和南柴胡的主产地如山西、陕西、甘肃、河北等省。经北京中医药大学张媛教授鉴定，所收样品分别为柴胡 和狭叶柴胡 的根。其中北柴胡样品 批，南柴胡样品 批，具体样品信息见表。表 柴胡药材样品信息 采集地点基原吉林省洮南市永茂乡 山西省临汾市襄汾县 山西省临汾市洪洞县 山西省运城市新绛县 河南省三门峡市渑池县 陕西省宝鸡市陈仓区 陕西省渭南市澄城县 甘肃省天水市武山县 甘肃省定西市漳县 甘肃省定西市陇西县 甘肃省定西市渭源县 黑龙江省大庆市林甸县 黑龙江省大庆市 黑龙江省双鸭山市饶河县 吉林省长春市农安县 注：所有药材均为三年生，月采收。佘玉萍等：经方中的北柴胡与南柴胡精准化应用探究.试剂（批号，福晨（天津）化学试剂有限公司），乙醇（批号，天津市致远化学试剂 有 限 公 司），.氯 化 钠 注 射 液（批 号，石家庄四药有限公司），花生油（批号，山东鲁花集团有限公司），甲醛（批号，福晨（天津）化学试剂有限公司），试剂盒（南京建成生物工程研究所），试剂盒（南京建成生物工程研究所），高糖培养基（批号，美国 公司），（批号，康宁公司），青链霉素（批号，康宁公司），胎牛血清（批号，公司），胰蛋白酶（批号，康宁公司），甘油三酯试剂盒（批号，南京建成生物工程研究所），总胆固醇试剂盒（批号，南京建成生物工程研究所），甲醇、乙腈、甲酸为质谱级（美国赛默飞世尔科技公司），屈臣氏水。柴胡皂苷（批号，质量分数）、乙酰基柴胡皂苷（批号，质 量 分 数）、水 仙 苷（批 号，质量分数）均购自于上海源叶生物科技有限公司。.细胞和动物 细胞株购自北京协和细胞资源中心。昆明系小鼠 只，体质量（），雄性，级，购自斯贝福（北京）生物技术有限公司，许可证号（京），饲养于北京中医药大学良乡校区动物房。实验过程遵循北京中医药大学伦理委员会规定，伦理审查编号为。小鼠适应性饲养 ，自由摄食和饮水，温度，自由光照 ，相对湿度 ，定时通风换气。方法.含柴胡药味的经典方剂本草学考证通过在医学电子书（：）网站下的“中医经典”及“中医图书”查阅伤寒杂病论备急千金要方本草求真外台秘要名医别录温病条辨世医得效方太平惠民和剂局方等 本中医学电子书，以“柴胡”为检索词对历代含有柴胡的处方进行本草学考证，并通过中国知网（：）对伤寒杂病论中以柴胡为君药方剂的功效、药理作用及临床应用进行文献调研。.技术测定北柴胡和南柴胡水煎液的化学成分.北柴胡与南柴胡水煎液的制备称取柴胡 放于煎煮锅内，加水 ，武火煮沸，文火煎煮至 ，弃去药渣，继续文火煎煮，浓缩至，离心 ，取上清液，过.微孔滤膜即得。.对照品溶液的制备分别精密称取对照品柴胡皂苷、乙酰基柴胡皂苷 和水仙苷，分别置于 量瓶中，加质谱级甲醇溶解，摇匀定容，配制成质量浓度为.的对照品储备液，吸取 各对照品储备液，分别置于 量瓶中，加质谱级甲醇溶解，摇匀定容，配制成质量浓度为 的对照品溶液，.微孔滤膜滤过即得。.色谱条件 色谱柱（.，.）；流动相.甲酸水（）乙腈（），梯度洗脱（，；，；，；，；，；，；，；，；，）；流速.；进样量 ；柱温 。.质 谱 条 件 离 子 源，离 子 源 温 度，负离子模式下：电离源电压，毛细管电压，管透镜电压；鞘气流速 ，辅助气流速 ；数据采用傅里叶变换高分辨全扫方式，分辨率 ，鞘气和辅助气均为高纯氮气（纯度.）。质谱多级碎片离子检测采用数据依赖性扫描，选取 离子进行多级碎裂，碎裂方式为 碰撞诱导裂解，归一化裂解能量为。.数据分析采用 软件分析柴胡样品的总离子流图及离子碎片，对北柴胡与南柴胡水煎液的差异成分进行结构解析。.北柴胡与南柴胡水煎液保肝差异研究.供试品溶液的制备 称取柴胡 放于煎煮锅内，加水 ，浸泡 ；武火 煮沸；文火煎煮 后，去渣煎煮 至 ，配成质量浓度为 的柴胡水煎液。.实验分组与给药 只 雄性小鼠，禁食 ，随机分为 组，分别为空白组、模型组、北柴 年 月第 卷第 期.，.，胡水煎液组、南柴胡水煎液组，每组 只。按照.项下的方法分别制备北柴胡与南柴胡水煎液，每天灌胃给药 次，连续灌胃给药 。末次给药 后，除 空 白 组 外，其 余 各 组 以 （）灌胃造模，空白组灌胃等体积生理盐水。油溶液在临用前超声 。.血清收集及理化指标检测 造模后各组正常食水，停止药物操作。后，小鼠摘眼球取血，以 离心 ，制备血清，检测血清中 及 活性，并观察小鼠肝组织病理切片。.北柴胡与南柴胡水煎液降脂差异研究将处于对数生长期的细胞以密度.个孔接种于 孔板中，设置空白组（完全培养基）、模型组（油酸钠）、北柴胡水煎液组（.）、南柴胡水煎液组（.）。每组平行 个重复孔，置于 、培养箱中孵育 ，待细胞贴壁后，除空白组外，其余各组分别加入质量浓度为 油酸钠溶液，继续在、培养箱孵育 ，待造模成功后，分别加入对应的药物继续培养 。给药结束后弃去培养液，用预冷的 洗 遍，再用 裂解液冰上裂解 ，收集裂解液，在、离心 ，取上清液，按试剂盒的操作步骤测定蛋白浓度及 和 的含量。蛋白浓度采用 蛋白浓度测定试剂盒。.数据统计和分析采用 统计学软件进行统计学分析。数据正态采用单因素 方差分析，非正态采用非参数检验。结果.本草学考证历代含有柴胡的处方共 个，分别记载于伤寒杂病论千金翼方太平惠民和剂局方等本草著作。其中，伤寒杂病论为中医临床学最重要的著作之一，其收载的处方被后世尊为经方，记载的包含柴胡的共 方，以柴胡为君药的共 方，包括大柴胡汤、小柴胡汤、柴胡加芒硝汤、柴胡桂枝干姜汤、柴胡桂枝汤、柴胡加龙骨牡蛎汤、四逆散。本文通过对本草典籍以及现代临床应用情况的考证与调研，对上述 个以柴胡为君药的经方的应用情况进行总结，结果见表。表 伤寒杂病论中以柴胡为君药的经方在现代中医临床应用 方名功效药理作用临床应用大柴胡汤和解少阳，内泻热结抗炎、保肝、利胆、降脂、降糖 急慢性胆囊炎、胆石症、急慢性胰腺炎、糖尿病、高血压病、高脂血症、冠心病、外感及内伤发热性疾病、哮喘、支气管炎等小柴胡汤和解少阳 解热、抗炎、免疫、保肝、抗肿瘤、降糖、降脂 红斑狼疮、酒精性脂肪肝、自身免疫性肝炎、慢性肾炎、肿瘤系统疾病、类风湿关节炎、高脂血症、乙型肝炎等柴胡加芒硝汤和解少阳，兼下里实抗炎、保肝 胆源性胰腺炎、胆囊炎、胃溃疡穿孔、急慢性胃炎、流行性腮腺炎、扁桃体炎等柴胡桂枝干姜汤和解散寒，生津敛阴保肝、抗癫痫、抗炎、降脂 慢性胃炎、胃下垂、急慢性胆囊炎、胆石症、胆道感染、肺炎、肺结核、肺门淋巴炎、胸膜炎、急慢性肾炎、糖尿病、高脂血症、肝炎、肝硬化等柴胡桂枝汤和解少阳，调和营卫 抗溃疡、抗惊厥、抗炎、保肝、降脂、增强免疫、解热镇痛 感冒、胃炎、肩周炎、神经官能症、高血压病、高脂血症、风湿性关节炎、胆囊炎、颈椎病、肝硬化、系统性红斑狼疮等柴胡加龙骨牡蛎汤 和解少阳，通阳泄热，重镇安神抗抑郁、降脂 动脉硬化、高脂血症、高血压病、神经性心悸亢进、冠心病、慢性肾脏病等四逆散透邪解郁，疏肝理脾抗炎、保肝、降脂、改善动脉硬化胰腺炎、肝纤维化、高脂血症、溃疡性结肠炎、慢性胃炎等 伤寒杂病论中以柴胡为君药的方剂主要功效为和解少阳、疏调气机。主治少阳病及其兼证、类佘玉萍等：经方中的北柴胡与南柴胡精准化应用探究证。现代临床主要用于消化、代谢、免疫、循环等系统的疾病，上述 个不同的经方，虽然均以柴胡为君药，但通过不同的配伍，在临床用于治疗的疾病也不尽相同。比如，小柴胡汤擅长治疗酒精性脂肪肝，而柴胡加龙骨牡蛎汤则多用于动脉粥样硬化及高脂血症等。作为上述方剂君药的柴胡则具有保肝、利胆、降脂、解热等多个功效，在药材基原规格上还分为北柴胡和南柴胡。经本草考证，在伤寒杂病论等历代记载柴胡方剂的医书中未将 种基原的柴胡区分使用。最早将柴胡分为北柴胡和南柴胡的是明代李时珍的本草纲目：“北地所产者，亦如前胡而软，今人谓之北柴胡是也，入药亦良，南土所产者不似前胡，正如蒿根，强硬不堪使用。”明清时期，柴胡品种得到很好的区分，医家针对不同品种柴胡的药性有了更清晰的认识，认为北柴胡清热解表之力偏强，南柴胡疏肝解郁之力偏强。综上，不同功效的处方中 种基原的柴胡可能发挥的药效存在一定差异，需要用客观依据来验证，下文将通过化学分析和药理学等手段对 种基原柴胡的成分及药效进行对比研究，为阐明二者在活性成分及药效上存在的差异提供科学依据。.北柴胡与南柴胡水煎液的差异成分分析依照.项的方法将 批北柴胡和