■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■科学实验狂犬病病毒GX074株P蛋白48～78位区域氨基酸联合M蛋白突变株的构建及特性研究周桂全1，陈俊蓉1，韦显凯2，李晓宁1*，罗廷荣1*(1．广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005;2．广西壮族自治区动物疫病预防控制中心，广西南宁530001)中图分类号:S834．5文献标识码:B文章编号:1002－5235(2023)01－0003－05doi:10．3969/j．issn．1002－5235．2023．01．001摘要:为探究广西狂犬病病毒街毒GX074株P蛋白联合M蛋白对生物学特性的影响，实验以构建的弱毒疫苗株rＲC－HL感染性cDNA克隆质粒pＲC－HL为基础，将GX074株P蛋白的48～78位区域氨基酸及M蛋白联合替换到pＲC－HL相同位置，进行突变病毒的拯救，经间接免疫荧光实验及序列测定获得突变体rＲC－HL(GX074P48～78M)。结果表明，突变体病毒rＲC－HL(GX074P48～78M)基因组稳定，拯救后的荧光灶小于亲本弱毒rＲC－HL株，大于亲本强毒GX074株及CVS－11株;在细胞中的复制能力表现出与rＲC－HL株相似的特点，多步生长曲线显示突变体病毒滴度略低于rＲC－HL，而稍高于GX074株及CVS－11株。说明突变体毒株rＲC－HL(GX074P48～78M)相较于亲本弱毒rＲC－HL株复制能力有所降低，比亲本强毒GX074株复制能力略高。关键词:狂犬病病毒;P蛋白;病毒拯救;突变病毒;生长特性狂犬病是一种人畜共患病，是世界范围内一个重要的公共卫生问题，狂犬病主要通过患病动物抓咬传播，潜伏期受年龄大小、创口部位、毒力大小等因素影响，发病后死亡率达100%，WHO报道全世界每年造成约7万人死亡，现今仍无有效治疗手段，风险人群应主动接种疫苗进行预防，暴露后必须立即接种疫苗和免疫球蛋白［1］。狂犬病的病原体是狂犬病病毒(ＲabiesVirus，ＲABV)，它是弹状病毒科中的一种负链ＲNA病毒，嗜神经性是狂犬病发病机制的主要特征。ＲABV基因组编码5种结构蛋白:核蛋白(N)、磷收稿日期:2022－04－18基金项目:广西自然科学基金项目(2020GXNSFAA297212)。作者简介:周桂全(1996－)，女，硕士研究生，研究方向:动物传染病防治与免疫学，1043484490@qq．com。*通讯作者。E-mail:lizzylizzy2007@qq．com;tingrongluo@gxu．edu．cn。蛋白(P)、基质蛋白(M)、外表面糖蛋白(G)和ＲNA依赖的ＲNA聚合酶(L)。糖蛋白G分布于病毒囊膜表面，M蛋白位于膜下。N蛋白结合在基因组ＲNA上，后与P蛋白和L蛋白结合形成核糖核蛋白即ＲNP结构，是病毒的基本复制单位［2］。ＲABVP蛋白是一种多功能蛋白，它是病毒ＲNA依...
