可见异物检查中注射用无菌制...菌原料药样品制备方法的考察_李帅.pdf

第 1 期第 53 卷工业微生物基金项目：2021 年湖南省科技厅科药联合基金(2021JJ80033)阶段性成果作者简介：李帅（1982），男，湖南长沙人，主任药师，硕士研究生，研究方向：药物分析与研究。E-mail：。*通信作者：廖彬（1983），女，湖南长沙人，副主任药师，硕士研究生，研究方向：药物研究与核查。E-mail：。可见异物检查中注射用无菌制剂和无菌原料药样品制备方法的考察李帅1，2，刘雁鸣1，2，李昭1，2，王皖1，2，唐桂鹏1，2，廖彬*31.湖南省药品检验检测研究院，湖南 长沙 410001；2.湖南省药品质量评价工程技术研究中心，湖南 长沙 410001；3.湖南省药品审核查验中心，湖南 长沙 410001摘要：文章主要是对于可见异物检查中注射用无菌制剂和无菌原料药样品制备方法的考察。在实验过程中，主要采用光散射可见异物检测仪考察水的处理、注射器与西林瓶的清洗与无菌原料药的称量方法。最后，能够得到以下结论：注射用无菌制剂和无菌原料药样品制备过程中的多个环节均有引入外来异物的风险，需要建立科学可行的样品制备与验证方法。关键词：可见异物；光散射法；灯检法；注射用无菌制剂；注射用无菌原料药doi：10.3969/j.issn.1001-6678.2023.01.022可见异物系指存在于注射剂、眼用液体制剂和无菌原料药中，在规定条件下目视可以观测到的不溶性物质，其粒径或长度通常大于 50 pm1。中国药典 2020 年版四部通则 0904 可见异物检查法(以下简称通则 0904)规定：“注射用无菌制剂和无菌原料药的可见异物检查需要使用适宜的溶剂和适当的方法溶解后检查”。对于“适宜的溶剂”，注明为“应无可见异物”“如为水溶性药物，一般使用不溶性微粒检查用水进行溶解制备”；对于“适当的方法”，注明为“注射用无菌制剂及无菌原料药溶解所用的适当方法应与其制剂使用说明书中注明的临床使用前处理的方式相同。除振摇外，如需要其他辅助条件，则应在各品种正文中明确规定”。在实际检验中，发现通则 0904 对于需要溶解后检查可见异物的制剂样品的制备方法表述得不够充分，主要体现在以下几个方面：一是“适宜的溶剂”如何选择；二是满足不溶性微粒检查用水的溶剂是否一定满足可见异物检查；三是复溶的器具需要达到什么要求才能确保不引入外来异物；四是如何确保在无菌原料药的取样过程中不会引入外来异物。尤其是在缺少无菌原料药可见异物检查规范操作细则的前提下，检验人员无法判断检验操作的可靠性，各实验室之间目视检查的掌控尺度也可能因此存在差异2。通则 0904 中收载的第二法(光散射法)是 中国药典 2020 年版新收载的方法，该方法避免了目视检查的主观性与漏检的偶然性3，且灵敏度大幅提高。文章采用该法对自制的空白样品进行检测，发现溶剂制备、注射器处理、容器的处理以及操作环境等各环节均对结果的准确性有较大影响。1材料与仪器1.1材料水为注射用水、市售纯化水、实验室集中供水系统提供的去离子水与纯水机再制水；铬酸洗液为自制；注射器均为 10 mL，分为玻璃与塑料两种材质，注射器针筒与推杆均为玻璃材质。1.2仪器VIDI3860 型光散射法全自动可见异物检测系统(中国施启乐公司)，苏净安泰 AIRTECHSW-CJ-2FD型超净工作台，密理博 MilliQAdvantage 型纯水机、优普 UPT 型纯水机、MI624 型纯水、YB-3 型伞棚灯。2方法与结果2.1西林瓶的准备取西林瓶浸泡铬酸过夜，丁基胶塞超声处理30 min，转移至超净工作台内，用注射用水充分冲第 53 卷第 1 期2023 年 2 月工业微生物Industrial MicrobiologyVol.53 No.1Feb.202370-第 1 期第 53 卷洗，确保无微粒残留。2.2水的考察将测试用水直接倒入经处理的容器并充分润洗，加入量约为西林瓶容量的大约 80%，加塞并压盖，各制备不少于5 瓶，分别用目视法与光散射法进行测定。2.2.1注射用水目视法均未检出可见异物。光散射法测定玻璃瓶装注射用水偶见 12 粒可见异物，袋装注射用水均未检出可见异物，表明注射用水基本满足目视法检查要求，品质以袋装注射用水为佳，玻璃瓶装水使用前需要检查，符合要求后方能使用。2.2.2市售纯化水目视法均未检出可见异物。光散射法测定 2 个品牌的纯化水，均可检出少量可见异物，表明市售纯化水基本满足目视法的检查要求，但不宜直接用于光散射法。2.2.3实验室集中供水目视法偶尔检出可见异物，光散射法测定可见大量异物，表明笔者所在实验室集中供水不宜直接用于可见异物检查。不同实验室集中供水的品质可能不同，但需经检测后方可使用。2.2.4纯水机再制水纯水机水源为实验室集中供水。目视法与光散射法均未检出可见异物，但值得注意的是，纯水机在更换反渗透滤芯及其后级的滤芯或终端过滤器后，均需冲洗后才能用于检查，经检测合格后可持续保持无可见异物状态，表明纯水机再制水满足可见异物检查用水要求，且品质稳定。2.4注射器清洗方法的考察鉴于上述实验中目视法与光散射法在可见异物检查灵敏度上的差异较大，且目视法存在主观因素的影响，故后续测定仅使用光散射法检查，并且所有操作均在超净工作台中进行。2.4.1玻璃注射器用铬酸洗液浸泡、超声处理、用纯水机再制水反复冲洗后仍能检出大量异物，表明磨砂推管与针筒间摩擦可能导致玻璃屑脱落，可见异物转移溶液的注射器不宜采用玻璃材质。2.4.2一次性注射器6 种品牌的一次性注射器开封后，可以发现第一管溶液可见少量异物，表明一次性注射器无菌不代表无微粒。4 种普通一次性注射器反复取液推注冲洗后仍可检出异物，2 种二件式一次性注射器经清洗后，可保持无异物状态。经研究，硅胶密封塞在推注中脱落微粒是导致冲洗后仍检出异物的主要原因，且该现象可反复出现。而二件式注射器采用自润性材料制作的一体式推杆不含有硅胶或橡胶，颗粒的脱落大幅减少。此外操作过程可能是偶检出异物的次要原因：一是带针抽取注射用水，冲洗注射器需要反复扎胶塞，不排除胶塞经多次扎入后脱屑被扎入针孔引入异物4；二是不带针取水需要多次插拔针头，针座与注射器的外表面难免与橡胶手套多次接触而粘上异物，在取样过程中异物沾染溶剂后被吸入，因此这种操作方法存在偶然引入异物的可能性，对操作要求较高。注射器的冲洗建议使用纯水机(MI624 型)进行灌洗操作，顺序为：清洗注射器套筒外壁与推管灌洗注射器套筒内壁接上针管，从套筒尾部加水，塞入推管冲洗，反复操作 3 次再次灌满排气并推至设定体积。采用该方法处理 10 支新开二件式注射器(2 种品牌各 5 支)，均未检出可见异物，表明该方法的处理效率高、清洗效果好，缺点是超净工作台需要加装净水器出水管和下水系统。2.5西林瓶处理方法的考察通则 0904 对无菌原料药可见异物样品制备的方法描述为“除另有规定外，按抽样要求称取各品种制剂项下的最大规格量 5 份，分别置于洁净透明的适宜容器内，采用适宜的溶剂及适当的方法使药物全部溶解后，按注射用无菌制剂的方法检查。在实际操作中，一般将无菌原料药称取至洁净、透明的西林瓶中，压盖后溶解检查，因此需要对西林瓶进行清洗后方可用于检验。因此有必要对其清洗方法进行探究，并确认清洗后是否达到可见异物检查需要的清洁度。2.5.1清洗方法参考注射器的清洗方法，先取西林瓶和瓶塞超声处理 30 min，去除附着牢固的异物，再转移至超净工作台中，开启纯水机灌洗 5 次，清洗完毕后压盖，用注射器加水后检查。连续处理 10 支西林瓶均未检出可见异物，表明该方法能有效清洁西林瓶，达到可见异物的检查要求。李帅等：可见异物检查中注射用无菌制剂和无菌原料药样品制备方法的考察71-第 1 期第 53 卷工业微生物2.6无菌原料药可见异物称量方法的考察按通则 0904，无菌原料药需要在洁净区开封并称量至适宜容器后，再按注射用粉针操作，这意味着容器的清洗、检查与称量均需要在同一区域，否则无法排除非洁净区域尘埃粒子对检验结果的影响。经调研，除药品生产企业以外的大部分实验室可见异物检查区域并非在 B 级洁净区，而是在洁净工作台。洁净工作台开启层流送风后容易将原料药吹散，天平也无法稳定读数，因此需要一种简易可行的操作方法。经研究，最佳方案为洁净工作台做手套箱改造。洁净工作台以垂直层流双面型为宜，其中一面加装手套箱手套与套筒用于称量操作，另一面采用常规操作。称量操作前需要预先准备好洁净的容器与取样勺，将分析天平与样品放入洁净的工作台中，关闭挡风玻璃，开启工作台稳定半小时后关闭送风，随即戴上手套进行原料药的开封与称量。取洁净的培养皿（100 mm），敞口，加水约 30 mL，模拟称量过程与时长（10 min），用注射器取样并进行验证，结果 5份样品均未检出可见异物。表明该方法简单有效，实现了无菌原料药在洁净工作台中的称量。3讨论3.1满足不溶性微粒检测的水不一定适用于光散射法可见异物检查在限度方面，不溶性微粒检查用水对 25 m 及以上微粒的要求是每 10 mL 不得超过 2 粒，限度量粒子对于可见异物结果的判定已有较大的影响；在粒子特性方面，一般粒径越小的粒子在水中的悬浮性更好，不溶性微粒主要是 50 m 以下的粒子，对于小粒径异物检验效能高。可见异物主要检测粒径在 50 m 以上的粒子，且多为静置后下沉，当取容器底部的水或倒置抽取注射用水时容易吸入下沉的异物；仪器检测方面，对于可见异物不合格样品中常见的纤毛2与偶然出现的上浮异物在不溶性微粒检测仪中是否能检出、如何计数等问题暂未有效验证。这就解释了本研究中采用符合不溶性微粒用水要求的水在光散射法中仍偶见异物的原因，故建议可见异物用水的检查改用光散射法检测更为合理。3.2建立科学可行的样品制备与验证方法势在必行可见异物检查属于“不可复检”项，当检出异物时，首先要能排除因操作原因导致引入外来异物的可能性，但在没有科学可行的样品制备与验证方法作为支持时，检验人员往往无所适从甚至容易出现误判。经实践，在没有开展系统研究、培训并有效验证前进行溶解操作，引入外来可见异物的可能性是较大的，尤其是以无菌原料药的检查为甚，因此需要建立科学可行的样品制备与验证方法来提升检验的可靠性。参考文献1 国家药典委员会.中国药典 2020 年版.四部 M.北京:中国医药科技出版社,2020:127-129.2 丁锐,纪宏,庞青云,等.2009 年全国 15 省市药品检验所可见异物检查情况及结果分析 J.中国药房,2011,22(29):2745-2747.3 邢军.可见异物检查法有关问题的探讨J.中国药事,2008(6):472-473.4 刘晓哲,王磊.注射剂可见异物检查中几个问题的探讨J.齐鲁药事,2009,28(8):474-475.AbstractThis article is mainly about the investigation of the preparation methods of sterile preparations for injection and sterile APIsamples in the examination of visible foreign bodies.During the experiment,the light scattering visible foreign body detector was mainlyused to investigate the water treatment,the cleaning of syringes and vials,and the weighing method of sterile APIs.Finally,the followingconclusions can be drawn:there is a risk of introducing foreign substances in many links of the preparation of sterile preparations forinjection