拉曼光谱法直接测定甲硝唑片含量_刘永.pdf

中国现代应用药学 2023 年 1 月第 40 卷第 2 期 Chin J Mod Appl Pharm,2023 January,Vol.40 No.2 219 拉曼光谱法直接测定甲硝唑片含量 刘永1，付璐2(1.剑阁县产品质量检验中心，四川 广元 628300；2.剑阁县中医院内科，四川 广元 628300)摘要：目的 建立拉曼光谱法直接测定甲硝唑片含量的方法。方法 从便携式激光拉曼光谱仪的标准光谱图库中选出甲硝唑标准拉曼光谱图，再从甲硝唑标准拉曼光谱图(2003 000 cm1)中筛选出适宜用于含量测定的特征峰，通过线性、重复性、回收率等方法学验证建立拉曼光谱直接测定甲硝唑片含量的方法，将甲硝唑片从药瓶中取出后直接用拉曼光谱法测定含量并将测定结果与 HPLC 测定结果做比较分析。结果 甲硝唑标准拉曼光谱图中 1 533 cm1处的特征峰未受辅料干扰，专属性和稳定性最好，适宜用作含量测定的特征峰。拉曼光谱直接测定甲硝唑片含量的方法在 261 000 mgg1线性良好，线性方程为 y=7.989 5x+0.394 8，相关系数为 0.999 4；该方法的检测限和定量限分别为 10 和 26 mgg1。在高、中、低 3 个含量下，该方法的日内和日间精密度的 RSD 值分别为 0.08%，0.12%，0.11%和 0.47%，0.48%，0.65%。同一甲硝唑片重复测定 6 次的 RSD 值为 0.41%。在回收率试验中，该方法测定高、中、低含量的平均回收率分别为 99.87%，100.2%，100.1%，RSD 值分别为 0.04%，0.07%，0.18%。拉曼光谱法 1 测定结果的预测相对误差范围为0.7%0.5%，最大误差绝对值为 0.7%，拉曼光谱法 2 测定结果的预测相对误差范围为0.7%1.1%，最大误差绝对值为 1.1%。结论 本法快速、简便，可以实现甲硝唑片含量的无损检测。关键词：拉曼光谱；特征峰；甲硝唑片；高效液相色谱 中图分类号：R917 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2023)02-0219-05 DOI:10.13748/ki.issn1007-7693.2023.02.010 引用本文：刘永,付璐.拉曼光谱法直接测定甲硝唑片含量J.中国现代应用药学,2023,40(2):219-223.Direct Content Determination of Metronidazole Tablets by Raman Spectroscopy LIU Yong1,FU Lu2(1.Jiange Test Center for Product Quality,Guangyuan 628300,China;2.Department of Internal Medical,Jiange Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangyuan 628300,China)ABSTRACT:OBJECTIVE To establish the direct content determination method of metronidazol tablets by raman spectroscopy.METHODS By selecting standard raman spectrum of metronidazol from standard spectrum database in portable laser reman spectrometer and then selecting proper characteristic peak from standard raman spectrum(2003000 cm1)of metronidazol,using of methodological verification including linear,repeatability and recovery tests,the direct content determination method of metronidazol tablets by raman spectroscopy was established.The metronidazol tablets without any pretreatment were taken from bottles for content determination directly by using of reman spectroscopy and their determination results were compared with that of HPLC.RESULTS The characteristic peak at 1 533 cm1 in the standard raman spectrum of metronidazol was not affected by supplements,with best exclusivity and stability and proper to be used for its content determination.In the direct content determination method of metronidazol tablets,the good linear relationship was achieved in the range of 261 000 mgg1,its linear equation was y=7.989 5x+0.394 8 with correlation coefficient of 0.999 4 and its detection and quantitative limits were 10 and 26 mgg1 respectively.The determination RSDs of same-day and between-days of high,middle and low contents were 0.08%,0.12%,0.11%and 0.47%,0.48%,0.65%respectively.The RSD of 6 repeated determinations of the same metronidazol tablet was 0.41%.In recovery test,the average recoveries of reman spectroscopy in determinating high,middle and low contents were 99.87%,100.2%,100.1%,RSDs were 0.04%,0.07%and 0.18%respectively.The scope and max of relative prediction error of reman spectroscopy 1 were 0.7%0.5%and 0.7%and that of reman spectroscopy 2 were 0.7%1.1%and 1.1%.CONCLUSION The method is fast and simple,which can achieve nondestructive testing of metronidazole tablets.KEYWORDS:Raman spectroscopy;characteristic peak;metronidazol tablets;HPLC 作者简介：刘永，男，硕士，工程师 E-mail: 拉曼光谱法在药学领域作为新兴技术，已经在药物定性鉴别1-6、定量检测7-12、非法添加药物快速检测13-15、药物晶型判别16-17、药理学研究18-19、制剂溶出20等方面取得了一些应用研究成果，美国药典 41 版已收载了配对的拉曼光谱法通则和拉曼光谱法理论与实践指导原则21，国内外研究都展示了拉曼光谱技术的开发价值和应用潜力。拉曼光谱技术能在一定程度上解决实验室 220 Chin J Mod Appl Pharm,2023 January,Vol.40 No.2 中国现代应用药学 2023 年 1 月第 40 卷第 2 期 大型仪器检验成本高、前处理繁琐、试剂污染环境等问题。目前，药学领域对拉曼光谱技术的应用研究多为定性研究，定量研究目前相对较少。采用便携式激光拉曼光谱仪直接测定甲硝唑片含量的研究尚未见报道。本研究为开发便携式快检设备在药品检测领域的应用前景提供了可行性。甲硝唑化学名为 2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇，分子结构式见图 1，临床上主要用于治疗厌氧菌感染。甲硝唑片为白色或类白色片，主要用于治疗肠道和肠外阿米巴病，还可用于治疗阴道滴虫病、小袋虫病、皮肤利什曼病、麦地那龙线虫感染等，也广泛用于厌氧菌感染的治疗。中国药典 2020 年版记载甲硝唑片的含量测定方法为高效液相色谱法22，该方法检测时间较长，仪器设备成本较高且污染环境。拉曼光谱法操作简单，检测时间短，不污染环境，样品可重复测定。本研究以 0.2 g 规格的甲硝唑片为例研究建立拉曼光谱快速测定甲硝唑片含量的方法。图 1 甲硝唑的分子结构式 Fig.1 Molecular structure of metronidazole 1 仪器与试药 HHX 便携式拉曼光谱仪(厦门海荭兴)；LC-20AD 高效液相色谱仪岛津(苏州)；TLE204电子天平(梅特勒-托利多)；甲硝唑对照品(坛墨质检，含量：99.2%；批号：3292012)；甲硝唑片(华中药业，规格：0.2 g，批号分别为 20181001，20200701，20201112，20210203；江苏平光制药，规格：0.2 g，批号：2007061；山东齐都药业，规格：0.2 g，批号：1D2011245；湖北美宝药业，规格：0.2 g，批号：190402；双新制药，规格：0.2 g，批号：200202；太原药业，规格：0.2 g，批号：180502；金不换兰考制药，规格：0.2 g，批号：20200401)；纯化水(自制，电阻率18 Mcm)，辅料样品(安徽山河药用辅料股份有限公司)，原料药样品(武汉贝尔卡生物医药有限公司)。2 方法 2.1 拉曼光谱采集 拉曼光谱法 1：将甲硝唑片从药瓶中取出后立于样品槽中，以顶面或底面朝向光源处，直接测定。拉曼光谱法 2：将甲硝唑片研磨成细粉，装入石英玻璃比色皿中测定。测定条件：拉曼激光功率为 0500 mW，激发光波长为 785 nm，稳频激光，位移范围 200 3 000 cm1。将甲硝唑片从药瓶中取出后立于石英比色皿内，以正面或背面面向光源采集拉曼光谱图，空白片以相同方式采集拉曼光谱图。2.2 HPLC 测定 2.2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(2080)为流动相，检测波长为320 nm，进样体积 10 L。2.2.2 系统适用性要求 理论板数按甲硝唑峰计算2 000。2.2.3 供试品溶液制备 取甲硝唑片 20 片，精密称定，研细，精密称定细粉适量(约相当于甲硝唑0.25 g)，置 50 mL 量瓶中，加 50%甲醇溶液适量，振摇使甲硝唑溶解，用 50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5 mL，置 100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。2.2.4 对照品溶液配制 取甲硝唑对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每 1 mL约含 0.25 mg 的溶液。2.2.5 测定法 精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。2.3 空白片的制备 国产甲硝唑片制剂处方的主要辅料为淀粉、糖粉、糊精，采用国产制剂处方(剔除主药)和湿法制颗粒压片法制备空白片。2.4 统计分析 HPLC 测定结果与拉