苦皮藤薄层色谱鉴别方法的建立_罗健菱.pdf

402023 年第 1 期（总第 165 期）分析与应用苦皮藤薄层色谱鉴别方法的建立罗健菱，赵婷婷，胡家震，唐娟，胡成刚*，马彬焰，邰通芝（贵州中医药大学，贵州贵阳，550025）摘 要：为建立苦皮藤二氯甲烷部位的薄层色谱鉴别方法，该研究以雷公藤醌 F（TriptoquinoneF）和Epikatonicacid 为对照品,考察供试品溶液制备方法、展开剂、点样量、展距、显色剂对薄层色谱分析的影响,确定苦皮藤的最佳薄层色谱条件。结果显示：采用薄层色谱 GF254硅胶板，以二氯甲烷为萃取溶剂制备供试品溶液，甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸=7：2：0.2 为展开剂展开，喷以 5%磷钼酸乙醇溶液，热风吹干显色，于日光底部灯下进行检视，所得苦皮藤层色谱分离效果和显色效果较佳，斑点清晰且特征性好。该方法安全、易操作、专属性强,可作为苦皮藤二氯甲烷部位的薄层鉴别方法。关键词：薄层色谱鉴别；苦皮藤；展开剂；显色剂；中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1008-3103（2023）01-0040-05Establishment of TLC Identification Method for Celastrus Angulatus MaximLuoJian-ling,ZhaoTing-ting,HuJia-zhen,TangJuan,HuCheng-gang*,MaBin-yan,TaiTong-zhi（SchoolofPharmacy,GuizhouUniversityofTraditionnalChineseMedicine,GuiyangGuizhou5500025,China）Abstract：InordertoestablishaTLCidentificationmethodforthedichloromethanepartofCelastrusangulatus,TripoquinoneFandEpikatonicacidwereusedasreferencesubstances,andtheeffectsofpreparationmethodoftestsolution,developingagent,sampleamount,spreadingdistanceandcolordeveloperonTLCanalysiswereinvestigated,andthebestTLCconditionsofCelastrusangulatusweredetermined.Theresultsshowedthatthin-layerchromatographyGF254silicagelplatewasusedtopreparethetestsolutionwithdichloromethaneasextractionsolvent,toluene-ethylacetate-glacialaceticacid=7：2：0.2asdevelopingagent,sprayedwith5%phosphomolybdicacidethanolsolution,driedbyhotairforcolordevelopment,andexaminedunderthesunlightbottomlamp.TheobtainedCelastrusangulatuslayerchromatographyhasgoodseparationandcolordevelopmenteffect,clearspotsandgoodcharacteristics.Themethodissafe,easytooperateandspecific,andcanbeusedasaTLCidentificationmethodfordichloromethanepartsofCelastrusangulatus.Keywords：TLCidentification；Bittervine；Developingagent；developer；基金项目：贵州省中药资源普查项目（3040-040180039）。作者简介：罗健菱,女,硕士研究生在读,研究方向中药与民族药基础研究与开发；通讯作者：胡成刚,男,教授,研究方向为中药与民族药基础研究与开发。0 前言苦皮藤（CelastrusangulatusMaxim）为卫矛科南蛇藤属植物1的干燥根及根茎，全年采挖，鲜用或炮制后用，其功效各异。苦皮藤性凉，味辛、苦，能清热解毒、杀虫消肿、舒筋活络、调经透疹等。现代研究发现，全世界卫矛科南蛇藤属植物大约有 30 种，中国分布有 25 种，其中有 16 种为中国特有，以西南地区为多2-5，其化学成分主要有倍半萜、三萜、黄酮、生物碱、皂苷等6，9，其黄酮类成分多用于治疗癌症、肿瘤、抗炎镇痛及免疫调节等方面10，苷类化合物有免疫调节等作用11。前期研究从苦皮藤二氯甲烷部位主要分离的 TriptoquinoneF（雷公藤醌 F）、Epikatonicacid 有抑制 IL-1 和 IL-1 释放的作用；因此后续在评价苦皮藤质量标准时，可将这两种单体化合物作DOI:10.14127/ki.jiangxihuagong.2023.01.014412023 年 2 月苦皮藤薄层色谱鉴别方法的建立为指标成分。迄今，在苦皮藤药材的质量控制方面，尚未有完善可行的质量控制体系，且 2020 版 中国药典中也未收载其质量标准，这使苦皮藤的用药安全存在隐患，也阻碍了资源开发利用的发展。薄层色谱法（TLC）是一种可以将混合样品进行快速分离、鉴别、杂质检查和定性少量物质的实验技术12，13。基于以上方面，本研究以苦皮藤二氯甲烷部位的化学成分为出发点，旨在建立一种适用于苦皮藤的薄层色谱鉴别方法，使苦皮藤项下的薄层色谱鉴别方法更加简便易行、经济实用。1 仪器与材料1.1 仪器与试剂JCS-31001C 电子天平（哈尔滨众汇衡器有限公司）；KQ-5200DA 数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FW135 中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；ZF-20D 暗箱式紫外分析仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；KL-UP-20T 超纯水系统（四川宜科纯水设备有限公司）；HWS-24电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）。GF254 硅胶板（青岛海洋化工有限公司）规格：50100mm；其试剂均为分析纯。1.2 药材苦皮藤药材共 14 批，均采自贵州各地，经贵州中医药大学药学院胡成刚教授均鉴定为苦皮藤（CelastrusangulatusMaxim）干燥全草，产地及批号信息见表 1，凭证标本保存于贵州中医药大学苗药博物馆。表 114 批苦皮藤样品编号及产地信息编号产地采集日期编号产地采集日期S1贵州省贵阳市乌当区航天路2020.11S8贵州省清镇市百花湖镇2020.11S2贵州省贵阳市白云区下水村2020.11S9贵州省贵阳市修文县乌栗乡2020.11S3贵州省贵阳市乌当区2020.11 S10贵州省黔西县中山村2020.11S4贵州省安顺市下羊场村2020.08 S11贵州省贵阳市修文县六厂镇2017.06S5贵州省贵阳市观山湖区龙井村2020.11 S12贵州省贵阳市龙里羊场2017.06S6贵州省织金县以那2020.11 S13贵州省贵阳市清镇九龙山2017.06S7贵州省贵阳市龙里县流阴洞2020.11 S14贵州省安顺市普定县2017.062 方法与结果2.1 薄层色谱条件考察2.1.1 供试品制备方法的考察取苦皮藤粉末（过 20 目筛）2.0g，3 份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别按下述方法处理后作为供试品溶液：（1）加 20mL 甲醇，超声提取 30min，滤过，滤液浓缩至 2mL，作为供试品溶液 1；（2）加 20mL 甲醇，超声提取 30min，过滤，滤液挥干，残渣加水 20mL 溶解，二氯甲烷 20mL 萃取，取二氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇 2ml 溶解，作为供试品溶液 2；（3）乙酸乙酯代（2）中二氯甲烷萃取，其操作不变，作为供试品溶液 3；（4）加二氯甲烷 40mL，加热回流60min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2mL 溶解，作为供试品溶液 4。按“2.1”项下的薄层色谱条件对苦皮藤样品进行薄层色谱鉴定。结果：方法（1）主斑点不清晰；方法（2）主斑点清晰，薄层色谱图展距适中；方法（3）主斑点不清晰；（4）主斑点不清晰。故选择方法（2）为供试品溶液的制备方法。结果见图 1。图 1 不同制备方法下的供试品溶液的苦皮藤薄层色谱图1.方法（1）；2.方法（2）；3.方法（3）；4.方法（4）2.1.2 对照药材溶液的制备取苦皮藤对照药材 2.0g，精密称定，按“2.1”项下方法制成对照药材溶液，即得。2.1.3 对照品溶液的配制称 取 TriptoquinoneF（雷 公 藤 醌 F）、Epikatonicacid（均为实验室自制、纯度 98%）对照品适量，分别加二氯甲烷、甲醇制成每 1mL 约含 0.1mg 的对照品溶液，即得。2.1.4 不同展开剂考察取苦皮藤供试品溶液及 TriptoquinoneF（雷公藤醌 F）、Epikatonicacid（均为实验室自制、纯度 98%）422023 年第 1 期（总第 165 期）对照品溶液各 3L，点于硅胶 GF254 预制板上，分别选择甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（7：2：0.2），环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（9：1：2：0.2），三氯甲烷-丙酮（12：0.1）和环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20：5：8：0.1）为展开剂展开，取出，热风吹干，置 254nm 的紫外灯下检视，5%磷钼酸乙醇溶液显色，后日光下检视。结果显示，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（7：2：0.2）为展开剂时各主斑点显色清晰，展开效果较好，见图 2。图 2 不同展开剂展开的苦皮藤薄层色谱图1：TriptoquinoneF；2：Epikatonicacid；35：苦皮藤供试品溶液2.1.5 点样量的选择分别吸取供试品溶液 1L、2L、3L、4L点于同硅胶 GF254预制板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（7：2：0.2）为展开剂，取出，热风吹干，置 254nm的紫外灯下检视，5%磷钼酸乙醇溶液显色，后日光下检视，结果发现当点样量为 1L、2L、4L 时存在不同程度的拖尾现象；当点样量为 3L 时斑点清晰，分离效果较好，故选择点样量 3L，见图 3。图 3 不同点样量的苦皮藤薄层色谱图（A）供试品溶液：1.1L；2.2L；3.3L；4.4L；5.5L；（B1）TriptoquinoneF：1.1L；2.2L；3.3L；4.4L；5.5L；（B2）Epikatonicacid：6.1L；7.2L；8.3L；9.4L；10.5L2.1.6展距的考察吸取对照品和供试品溶液各 3L，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（7：2：0.2）为展开剂，展距分别为 6cm、7cm、8cm 取出，热风吹干，置 254nm 的紫外灯下检视，5%磷钼酸乙醇溶液显色，后日光下检视。结果发现不同展距下各斑点大小和颜色深浅无显著性差异，综合考虑，选择展距为 8cm，见图 4。图 4 不同展距的苦皮藤薄层色谱图1：TriptoquinoneF；2：Epikatonicacid；35：苦皮藤供试品溶液2.1.7 显色剂考察取苦皮藤供试品溶液及 TriptoquinoneF（雷公藤醌 F）、Epikatonicacid（均为实验室自制、纯度 98%）对照品溶液各 3L，点于硅胶 GF254预制板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（7：2：0.2）为展开剂展开，取出，热风吹干，置 254nm 的紫外灯下检视，分别喷以2%香草醛 10%硫酸乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液、5%磷钼酸乙醇溶液显色，后日光下检视。结果发现以 5%磷钼酸乙醇溶液为显色剂时各斑点显色清晰；以 2%香草醛 10%硫酸乙醇溶液和 10%硫酸乙醇溶液为显色剂时，颜色虽清晰，但分离度不好，见图 5。图 5 不同显色剂显色的苦皮藤薄层色谱图1：E