试验研究NO.02202389饲料研究FEEDRESEARCH1株耐酸秸秆纤维素降解菌株的筛选、鉴定及其内切葡聚糖酶的异源表达研究张超1，2李晓意1杨吉1武晓乐1张洋3李孟欣1刘宇欣1李凯悦1（1.衡水学院生命科学学院，河北衡水053000；2.河北省果蔬发酵技术创新中心，河北衡水053000；3.河北农业大学生命科学学院，河北保定071001）摘要：试验旨在解决农作物秸秆饲料化过程中，秸秆纤维素难降解、适口性差和营养价值低等问题。试验以玉米秸秆粉为唯一碳源，从堆砌秸秆的土壤中分离筛选出1株耐酸且具有高纤维素酶活性的菌株HSU-20SJ。经3,5-二硝基水杨酸法测定纤维素酶活性，利用形态学、生理生化和16SrDNA进行种属鉴定，通过分子克隆技术，构建内切葡聚糖酶的大肠杆菌异源表达系统。结果显示，菌株HSU-20SJ粗酶液酶活为3.23U/mL，最适反应pH值为5.0。该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis），从菌株HSU-20SJ基因组中获得内切葡聚糖酶基因eg20SJ，异源表达后获得重组酶，分子量约为55kDa，粗酶液酶活为6.28U/mL。研究表明，试验在获得耐酸、高纤维素酶活菌株基础上，实现了内切葡聚糖酶基因的异源表达，可为纤维素酶的规模化生产和应用提供参考。关键词：秸秆；纤维素；降解；内切葡聚糖酶；异源表达中图分类号：S816.7文献标识码：A文章编号：1002-2813（2023）02-0089-05Doi：10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.018Studyonscreeningandidentificationofanacid-tolerantstrawcellulose-degradingbacteriaandheterologousexpressionofendoglucanaseZHANGChaoLIXiao-yiYANGJiWUXiao-leZHANGYangLIMeng-xinLIUYu-xinLIKai-yueAbstract:Thestudywastosolvetheproblemsofstrawcellulosedifficulttodegrade,poorpalatabilityandlownutritionalvalueinprocessofstrawfeed.Usedcornstalkpowderassolecarbonsource,astrainHSU-20SJwithhighcellulaseactivityandacid-tolerancewasisolatedfromsoilpiledwithstraw.Cellulaseactivitywasdeterminedby3,5-dinitrosalicylicacidmethod,speciesidentificationwascarriedoutbymorphology,physiologyandbiochemistryand16SrDNA,andtheheterologousexpressionsystemofendoglucanaseinEscherichiacoliwasconstructedbymolecularcloningtechnology.TheresultsshowedthatthecrudeenzymeactivityofstrainHSU-20SJwas3.23U/mL,andtheoptimumreactionpHwas5.0.ThestrainwasidentifiedasBacillusvelezensis.Theendoglucanas...
