30%吡唑醚菌酯·丙环唑乳油高效液相色谱分析方法研究_刘雪芬.pdf

第53卷精细化工中间体30%吡唑醚菌酯 丙环唑乳油高效液相色谱分析方法研究刘雪芬，廖文斌，潘光飞，徐瑶，陈梦露，陈华，王进（浙江禾本科技股份有限公司，浙江 温州 325008）摘要：建立了一种同时分离复配制剂中吡唑醚菌酯和丙环唑的高效液相色谱法，使用Poroshell 120 EC-C18反相不锈钢柱和具有可变波长的紫外检测器，以乙腈、甲醇和水为流动相，采用外标法对复配制剂中有效成分进行定性和定量分析。有效成分吡唑醚菌酯和丙环唑方法重复性相对标准偏差分别为 0.49%和0.82%，均小于修订后的霍维茨值RSDr，吡唑醚菌酯和丙环唑的线性相关系数为0.999 9和0.999 8，平均回收率分别为100.4%和100.6%。关键词：丙环唑；吡唑醚菌酯；高效液相色谱中图分类号：O657.7文献标志码：A文章编号：1009-9212（2023）01-0088-04DOI：10.19342/ki.issn.1009-9212.2023.01.018Analysis of 30%PyraclostrobinPropiconazole EC by HPLCLIU Xue-fen,LIAO Wen-bin,PAN Guang-fei,XU Yao,CHEN Meng-lu,CHEN Hua,WANG Jin(Zhejiang Heben Pesticide&Chemicals Co.,Ltd.,Wenzhou 325008,China)Abstract：A HPLC method was established for the simultaneous separation of PyraclostrobinPropiconazole in acompound formulations.Using Poroshell 120 EC-C18 reversed-phase stainless steel column and UV detector withvariable wavelength,the active components in compound formulations were analyzed and quantified by externalstandard method using acetonitrile,methanol and water as mobile phases.The result showed that the variationcoefficients were 0.49%and 0.82%which belowed the value of RSDr,the linear correlation coefficients ofPyraclostrobin and Propiconazol were 0.999 9 and 0.999 8,and the average recoveries were 100.4%and 100.6%,respectively.Key words：Propiconazol;Pyraclostrobin;HPLC作者简介：刘雪芬（1985）女，山东滨州人，研究方向：农药分析检测与研究和农药登记试验（E-mail：）。收稿日期：2022-08-01分析与测试第53卷第1期2023年2月精 细 化 工 中 间 体FINE CHEMICAL INTERMEDIATESVol.53 No.1Feb.2023丙环唑是一种甾醇脱甲基化抑制剂类内吸传导杀菌剂1，具有速效，持效、不易产生抗药性等特点，广泛用于担子菌、半知菌等真菌引发的多种植物病害防治2-3；吡唑醚菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，具有保护、治疗、铲除、渗透、强内吸活性及耐雨水冲刷作用，通过抑制线粒体呼吸作用可有效防治谷物、蔬菜、草坪等作物上几乎所有类型真菌病原体引起的病害4。但吡唑醚菌酯作用位点单一，具“高抗性风险”，将其与丙环唑复配可延缓病原菌抗药性的产生，且未产生交互抗性5-6，同时扩大杀菌效率，降低成本，应用前景非常广泛，但目前国内外丙环唑和吡唑醚菌酯两者的复配制剂产品的分析方法较为少见。本文建立了30%吡唑醚菌酯 丙环唑乳油中有效成分的高效液相色谱分析方法。液相色谱法是一种分离效率高、选择性强、稳定性好的广谱分析方法7-8。使用Poroshell 120 EC-C18色谱柱，通过调试甲醇-乙腈-水流动相体系的比例完成了第1期刘雪芬，等：30%吡唑醚菌酯 丙环唑乳油高效液相色谱分析方法研究30%吡唑醚菌酯 丙环唑乳油中有效成分和杂质的分离，且同时应用于丙环唑原药、吡唑醚菌酯原药以及其单独或复配相关制剂产品的分析。1实验部分1.1仪器与试剂仪器：Agilent1260 Infinity II 高效液相色谱仪（美国Agilent公司）、DAD检测器（G7115A，美国Agilent公司）、色谱柱Poroshell 120 EC-C18不锈钢柱（4.6 mm150 mm4 m，美 国 Agilent 公 司）、CPA225D 型分析天平（精度为 0.000 01 g，德国Sartorius公司）、PMI-300TD超声波清洗器（PRIMAtechnologyGroup公司）、有机微孔滤膜（孔径0.45 m，MILEDT Technology公司）。试剂：乙腈（色谱纯，乐清亿邦仪器设备有限公司）、甲醇（色谱纯，乐清亿邦仪器设备有限公司）、新制超纯水、吡唑醚菌酯标样（含量99.0%，白色固体，上海市农药研究所）、丙环唑标样（含量98.9%，浅黄色粘稠液体，上海市农药研究所）、30%吡唑醚菌酯丙环唑乳油（浙江禾本科技股份有限公司）。1.2色谱工作条件流动相条件为梯度洗脱程序：015.00 min，V（乙腈）V（甲醇）V（水）=45550；15.0120.00 min，V（乙 腈）V（水）=9010；20.0125.00 min，V（乙腈）V（甲醇）V（水）=45 5 50；流动相流速：1.0 mL/min；柱温：（302）；测定波长：230 nm；进样量：5 L；保留时间：丙环唑A约 8.4 min，丙环唑 B 约 8.7 min，吡唑醚菌酯约13.9 min。丙环唑、吡唑醚菌酯的标样液相色谱图见图1，复配制剂试样液相色谱图见图2。1.3测定步骤1.3.1标样溶液的配制准确称取 0.03 g（精确至 0.000 01 g）吡唑醚菌酯和0.06 g（精确至0.000 01 g）丙环唑标样于同一50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇溶解，放入超声波振荡 3 min，然后用甲醇稀释至刻度、定容、摇匀。1.3.2试样溶液的配制称取 0.30 g（精确至 0.000 01 g）30%吡唑醚菌酯丙环唑乳油试样于 50 mL 容量瓶中，加入40 mL甲醇溶解，放入超声波振荡 3 min，然后用甲醇稀释至刻度，定容、摇匀，使用前用0.45 m有机膜过滤。1.3.3测定在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样（其中丙环唑峰面积为丙环唑A与丙环唑B的峰面积之和）直至相邻2针峰面积相对变化小于1.2%，再按照标样、试样、试样、标样的顺序进行上机测定。1.3.4计算测量结束后，将测得的2针同一试样溶液的峰面积以及试样溶液前后2针标样溶液中丙环唑（或吡唑醚菌酯）峰面积分别进行平均。试样中丙环唑（或吡唑醚菌酯）质量分数w按式（1）计算：w=A2 m2 w1A1 m2（1）式中：A1为标样溶液中丙环唑A与丙环唑B的峰面积之和（或吡唑醚菌酯峰面积）的平均值；A2为试样1-丙环唑A；2-丙环唑B；3-吡唑醚菌酯图1吡唑醚菌酯 丙环唑混合标样液相色谱图Fig.1Liquid chromatogram of PyraclostrobinPropiconazolemixed standard1-丙环唑A；2-丙环唑B；3-吡唑醚菌酯图230%吡唑醚菌酯 丙环唑乳油试样液相色谱图Fig.2Liquid chromatogram of 30%PyraclostrobinPropiconazole EC sample89第53卷精细化工中间体溶液中丙环唑A与丙环唑B的峰面积之和（或吡唑醚菌酯峰面积）的平均值；m1为丙环唑（或吡唑醚菌酯）标样质量，g；m2为试样质量，g；w1为标样中丙环唑（或吡唑醚菌酯）质量分数。2结果与分析2.1液相色谱条件的选择吡唑醚菌酯和丙环唑的紫外光谱图如图 3、图4。由图3、4可知，丙环唑在230 nm附近有较强吸收，吡唑醚菌酯也有明显吸收，该波长附近避免了助剂溶剂油的吸收，也避免了低波长下的溶剂峰等干扰，能够满足分析的要求，故将检测波长确定为230 nm。色谱柱选择为 Poroshell 120 EC-C18反相不锈钢柱，并且用4.6 mm150 mm4 m柱，较小的粒径使其有良好的分离效果，较短的分析时间，适用乳油等杂质较多的制剂的分析。对于流动相的选择，分别考查了在流速1.0 mL/min条件下不同比例的甲醇-水、乙腈-水作为流动相时有效成分与杂质的分离效果，发现以甲醇-水作为流动相体系时，吡唑醚菌酯峰与杂质峰分离效果较差；以乙腈-水作为流动相体系时，有效成分出峰较快，可以实现吡唑醚菌酯峰与杂质峰的分离但无法分离丙环唑与杂质。故考虑以甲醇、乙腈和水作为流动相，将其按不同比例进行测试试验，结果发现当V（乙腈）V（甲醇）V（水）=45 5 50，峰型好，有效成分吡唑醚菌酯和丙环唑分离度与峰纯度测试均符合要求，兼顾检测效率与分离效果。为进一步提高检测效率，在有效成分出峰完成后设置梯度洗脱，使后续杂质尽快出峰。2.2分析方法的线性关系测定试验按照1.3中试样溶液的制备方法，分别称取6个不同质量的吡唑醚菌酯和丙环唑标样，配制成不同质量浓度的吡唑醚菌酯和丙环唑系列标样溶液。以吡唑醚菌酯（或丙环唑）对应的峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，然后得到两者的线性相关曲线。其中，吡唑醚菌酯在0.100.99 mg/mL 范围内，其线性相关方程为 y=4 606.345 8x+14.764 8，相关系数r为0.999 9；丙环唑在 0.211.99 mg/mL 范围内，其线性方程为 y=5 726.456 2x+63.969 1，相关系数r为0.999 8。见图5和图6。2.3分析方法的精密度测定试验按照1.2的色谱条件，对同一批次乳油试样做6次重复测定试验，试验结果表明，吡唑醚菌酯测定结果的标准偏差为0.05，相对标准偏差（RSD）为0.49%，重复性测定结果小于 0.672（1-0.5logC）（修订后Horwits公式）1.89；丙环唑测定结果的标准偏差图3吡唑醚菌酯的紫外吸收Fig.3UV absorption of Pyraclostrobin图4丙环唑的紫外吸收Fig.4UV absorption of Propiconazole图5吡唑醚菌酯的线性关系图Fig.5Linear relationship of Pyraclostrobin90第1期为0.17，RSD为0.82%，重复性测定结果小于0.672（1-0.5logC）（修订后Horwits公式）1.70；结果表明同一批次产品的检测结果重复性良好，能够满足日常检测工作的需要。2.4分析方法的准确度测定试验分别称取5个已知质量分数乳油的一半试样约0.15 g（精确至0.000 01 g）于50 mL容量瓶中，然后分别加入制备标样溶液一半质量的丙环唑标样和吡唑醚菌酯标样，按1.3.2配制试样溶液，在上述色谱条件下进行分析，分别测定吡唑醚菌酯和丙环唑的回收率。结果见表2。结果显示吡唑醚菌酯的平均回收率为100.4%、丙环唑的平均回收率为100.6%，均符合回收率标准范围98%102%。图6丙环唑的线性关系图Fig.6Linear relationship of Propiconazole表1分析方法的精密度试验结果Table 1Precision test results of analytical method成分吡唑醚菌酯丙环唑序号12345612345