5株灵芝菌株母种培养特性研究_朱金霞.pdf

宁夏农林科技，Ningxia Journal of Agri.and Fores.Sci.&Tech.2022，63（09）：19-24 园艺 基金项目：宁夏回族自治区重点研发计划项目（2020BBF03006、2022BBF03027）。作者简介：朱金霞（1977），女，宁夏中宁人，副研究员，主要从事农业微生物研究，E-mail:。*通信作者：冯锐（1964），男，宁夏盐池人，研究员，主要从事农业微生物方面的研究，E-mail:。收稿日期：2022-05-215 株灵芝菌株母种培养特性研究朱金霞1，2，冯 锐3*，任怡莲4，郑国保1，2，李 苗1，2，孔德杰1，2，朱 丹3，徐立春1，21.宁夏农林科学院农业生物技术研究中心，宁夏 银川7500022.宁夏农业生物技术重点实验室，宁夏 银川7500023.宁夏农林科学院农业经济与信息技术研究所，宁夏 银川7500024.宁夏农林科学院，宁夏 银川750002摘要：以引进的 5 株灵芝菌株（HZ、RBZ、HLZ、ZHH、MLZ）为研究对象，比较其在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）及改良后的 PDA 培养基上的生长特性。结果表明，5 株灵芝菌株的菌落直径随培养时间的增长而增大，但不同菌株间差异显著。从培养 48 h 到满皿前，菌株 MLZ 的生长速率明显大于其他品种；菌株 MLZ 和 ZHH 菌丝洁白且生长速度较快，在 PDA 培养基上培养 6 d 内就可长满整个培养皿，菌丝长势明显优于 HZ、RBZ 和 HLZ；在 PDA 培养基中加入枸杞枝条粉能显著改善菌株 HZ、RBZ、HLZ 和 ZHH 菌丝生长状况，但最适于菌株MLZ 菌丝生长的培养基为 PDA+玉米芯粉。研究结果可为进一步提高灵芝母种质量和促进宁夏灵芝产业发展提供技术支撑。关键词：灵芝；菌丝；生长特性；菌落直径中图分类号：S567.31文献标识码：A文章编号：1002-204X（2022）09-0019-06doi:10.3969/j.issn.1002-204x.2022.09.007A Study on Growth Characteristics of Five Strains of Ganoderma lucidumZhu Jinxia1,2,Feng Rui3*,Ren Yilian4,Zheng Guobao1,2,Li Miao1,2,Kong Dejie1,2,Zhu Dan3,Xu Lichun1,2(1.Agricultural Biotechnology Research Center,Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences,Yinchuan,Ningxia 750002;2.Ningxia Key Laboratory of Agricultural Biotechnology,Yinchuan,Ningxia 750002;3.Instituteof Agricultural Economy and Information Technology,Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences,Yinchuan,Ningxia 750002;4.Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences,Yinchuan,Ningxia 750002)Abstract Taking five strains of Ganoderma lucidum as the subject,the growth characteristics on potato glucoseagar(PDA)and modified PDA culture medium were compared.The results showed that the colony diameter of5 Ganoderma strains improved with the increase of culture time,but the difference among different strains wassignificantly.From 48 h after inoculations to the strains colonized all the petri dishes,the growth rate of MLZwas obviously higher than that of other strains,and the hyphae of strains MLZ and ZHH were white and grewquickly,the whole culture plate could be grown on PDA medium within 6 days,and the growth of hyphae wasobviously superior to HZ,RBZ and HLZ.The mycelial growth of HZ,RBZ,HLZ and ZHH could besignificantly improved by adding Lycium barbarum branch powder into PDA medium,but the optimum medium19for mycelial growth of MLZ was PDA+corncob powder.The research results can provide technical support forfurther improving the quality of Ganoderma seed and promoting the development of Ganoderma industry inNingxia district.Key words Ganoderma lucidum;Mycelial;Growth characteristics;Colony diameter63 卷 09 期朱金霞，等5 株灵芝菌株母种培养特性研究灵芝（Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.）属于担子菌纲多孔菌目灵芝科灵芝属，别名林中灵、木灵芝、赤芝、红芝、丹芝、菌灵芝、神芝、瑞芝、仙草等1-2，菌丝体、子实体及孢子中含有多种活性成分，如多糖、氨基酸、蛋白质、脂肪酸、萜类化合物、类固醇、生物碱和酚类化合物等3，是一种具有极高药用价值的食用真菌，在我国已有两千多年的药用历史。中医学著作 神农本草经 中记载，灵芝具有扶正固本、滋补强壮、延年益寿的功效4。现代医学研究表明，灵芝具有良好的抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、降血糖等特性5。随着国内外对灵芝价值的挖掘和应用，涌现了越来越多的灵芝产品，市场对于灵芝的需求也越来越大。灵芝种质资源丰富，全球已发现的灵芝超过 250种，欧洲、美洲、亚洲和非洲均有分布，我国系统描述的就有 103 种6。食用菌菌种是食用菌产业发展的根本，菌种的好坏直接关系到食用菌子实体的产量和品质7。同一灵芝品种在不同气候条件下，不同培养基中的生长状况也会产生巨大差别，筛选出适宜当地栽培的菌株对当地食用菌产业发展至关重要。宁夏气候冷凉，适宜灵芝日光温室和工厂化栽培，且品质较好，近年来灵芝种植面积也在逐年增大。由于宁夏开展灵芝栽培时间短，部分栽培品种的菌丝生长特性、优质母种的培育方法还不明确，灵芝的配套栽培技术还不完善，农业废弃物资源利用还不充分，导致灵芝栽培在宁夏成本高、经济效益不稳定，影响宁夏灵芝产业的可持续发展。该研究引进 5 株灵芝菌株，比较其在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上的生长特性，并在 PDA 培养基中添加 3 种宁夏特色农业废弃物（玉米芯粉、枸杞枝粉、红枣核粉），优化 5 株灵芝菌株的母种培养条件，旨在为灵芝的高效栽培提供技术支撑，也为宁夏食用菌产业可持续发展提供理论基础。1材料与方法1.1试验材料1.1.1菌株5 株供试灵芝菌株分别为黑芝（HZ）、日本紫芝（RBZ）、荷兰紫芝（HLZ）、中华红芝（ZHH）和美国灵芝（MLZ），均引自江苏省高邮市食用菌研究所。1.1.2培养基基础培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），购自青岛高科园海博生物技术有限公司。母种培养基制备方法：分别取过 40 目筛的玉米芯粉、枸杞枝粉、红枣核粉各 15 g，加蒸馏水约 1.0 L，加热至沸腾，小火煮沸 15 min，再加入 46 g PDA 培养基，定容至 1.0 L，边加热边搅拌，溶解后分装，在 121条件下灭菌 30 min 后制平板。1.2菌种制备方法在 PDA 平板中央接入经活化的斜面灵芝菌种，在 25 条件下恒温暗培养，待菌丝长满平板后备用。1.3试验方法灵芝母种培养基共设置 4 个处理，分别为 PDA、PDA+玉米芯粉、PDA+枸杞枝粉、PDA+红枣核粉，记为 T1（CK）、T2、T3、T4。在无菌条件下，利用打孔器将长满菌丝的平板外沿制成直径 5.00 mm 菌饼，分别接种至无菌平板中央，在 25 条件下暗培养，每处理重复 5 次。接种完成后尽快放入培养箱，并开始计时，每 24 h 用游标卡尺测量菌落直径（mm）1 次，共测定 5 次，至培养 120 h时结束试验。采用十字划线法测定菌丝平均生长速率（S，mm/h）。S=D/（2*24）式中：D 为 24 h 内菌落平均直径变化量（mm）。1.4数据分析利用 Microsoft Office 2016 进行数据分析及绘图，利用 SPSS 21.0 进行方差分析。2结果与分析2.15 株灵芝菌株在 PDA 培养基上的生长特性由图 1 可知，5 株灵芝的菌落直径随培养时间延长而逐渐增大，且不同菌株之间具有显著差异。在培养 24 h 时，菌株 HZ 的菌落直径最大，可达 11.82 mm，ZHH 次之，为 11.49 mm，RBZ 最小，仅为 8.57 mm。随着培养时间的延长，ZHH 和 MLZ 菌落直径增加最为迅速，在培养 48h 时，分别可达 18.81 mm 和 18.77 mm。在培养时间超过 48 h 后，MLZ 菌落直径超过 ZHH，成2063 卷 09 期朱金霞，等5 株灵芝菌株母种培养特性研究表 1菌落直径增长速率单位：mm h-1菌株024 h2448 h4872 h7296 h96120 hHZ0.190.01a0.130.02c0.110.03c0.220.04b0.280.05bRBZ 0.170.01b0.130.04c0.170.02c0.220.03b0.220.05bHLZ 0.170.01b0.130.03c0.160.01c0.210.03b0.270.08bMLZ 0.170.01b0.500.17a0.590.06a0.810.18a0.730.16aZHH 0.210.03a0.290.08b0.420.12b0.740.04a0.750.07a注：图中不同小写字母表示在同一时间不同菌株菌落直径差异显著（P0.05）。下同。为菌落直径最大的菌株，且显著大于菌株 HZ、RBZ 和HLZ（P0.05）。由表 1 可知，5 株灵芝的菌丝平均生长速率存在显著差异。在接种 24 h 后，MLZ 和 ZHH 的菌丝平均生长速率显著高于菌株 HZ、RBZ 和 HLZ（P0.05），菌株 ZHH 随培养时间的延长呈逐渐增大的趋势，在培养 024 h 内，其菌丝平均生长速率为 0.21 mm/h；在培养 96120 d 时，增大至 0.75 mm/h，增大了 3.75倍。菌株 MLZ 菌丝在 7296 h 的平均增长速率最大，是菌株 HZ、RBZ 和 HLZ 同时期增长速率的近 4 倍，但与 ZHH 增长速率无显著差异（P0.05）。菌株 HZ、RBZ 和 HLZ 的平均生长速率随培养时间的延长，呈先减小后增大的趋势，菌丝平均