加速溶剂萃取-超高效液相色...乳粉中17种磺胺类药物残留_吉小凤.pdf

浙江农业学报 Acta Agriculturae Zhejiangensis，2023，35(1):175 183http:/www zjnyxb cn吉小凤，王小骊，吕文涛，等 加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中 17 种磺胺类药物残留 J 浙江农业学报，2023，35(1):175 183DOI:10.3969/j issn 1004-1524.2023.01.19收稿日期:2021-08-19基金项目:国家重点研发计划政府间合作项目(2019YFE01039000);江山市“一县一品一策”示范县创建(ZJNY2021001-012)作者简介:吉小凤(1974)，女，河北唐山人，硕士，副研究员，研究方向为农产品质量安全。E-mail:jxfzjsnky163 com*通信作者，杨华，E-mail:yanghua zaas ac cn加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中 17 种磺胺类药物残留吉小凤1，王小骊1，吕文涛1，周忠静2，吴钰潇3，杨华1，*(1 浙江省农业科学院 农产品质量安全与营养研究所，浙江 杭州 310021;2 农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室，浙江 杭州 310021;3 浙江工业大学 化学工程学院，浙江 杭州 310014)摘要:建立了加速溶剂萃取(ASE)-超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定婴幼儿配方乳粉中17 种磺胺类药物残留的方法，并对方法的线性、灵敏度、回收率及基质效应等进行验证分析，同时将该方法应用于市场采集的婴幼儿配方乳粉样品中磺胺类药物残留进行分析和确证。试验结果表明，17 种磺胺类药物在 0.5 100 g kg1范围内呈线性，决定系数均大于 0.998，不同添加浓度下的回收率为 75.3%103.6%，相对标准偏差(RSD)均小于 11.0%，基质效应为 0.4 1.0，检出限为 0.1 3.0 g kg1，定量限为 0.3 10 g kg1。该方法具有萃取便捷、灵敏度和准确度高等特点，可同时对婴幼儿配方乳粉中 17 种磺胺类药物残留进行测定。关键词:加速溶剂萃取;超高效液相色谱-串联质谱法;乳粉;磺胺类药物中图分类号:TS252.51文献标志码:A文章编号:1004-1524(2023)01-0175-09Determination of 17 sulfonamides in infant formula by accelerated extraction and ultra-highperformance liquid chromatography/mass spectrometryJI Xiaofeng1，WANG Xiaoli1，LYU Wentao1，ZHOU Zhongjing2，WU YUxiao3，YANG Hua1，*(1 Institute of Agro-Product Safety and Nutrition，Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou 310021，China;2 State Key Laboratory for Managing Biotic and Chemical Threats to the Quality and Safety of Agro-Prod-ucts，Hangzhou 310021，China;3 College of Chemical Engineering，Zhejiang University of Technology，Hangzhou310014，China)Abstract:A method for the determination of 17 sulfonamides residues in infant formula by accelerated solvent extrac-tion(ASE)and ultra-high performance liquid chromatography/mass spectrometry(UHPLC-MS/MS)was devel-oped The linearity，sensitivity，recovery rate and matrix effect of the method were verified Meanwhile，the screen-ing analysis for 17 sulfonamides in infant formula collected from the market was carried out The results showed thatthe linearity of sulfonamides were in the range of 0.5 100 g kg1，and the correlation coefficient was greater than0 998，the recoveries were 75.3%103.6%，the relative standard deviation was less than 11.0%，the matrixeffect was 0.4 1.0，the detection limit for sulfonamides in infant formula was 0.1 3.0 g kg1，and the limit ofquantification(LOQ)was 0.3 10 gkg1 The developed method has the merits for convenient extraction，highsensitivity and accuracy，and the method can simultaneously determine 17 sulfonamides residues in infant formulaKey words:accelerated solvent extraction(ASE);ultra-high performance liquid chromatography/mass spectrometry(HPLC-MS/MS);infant formula;sulfonamides随着人们生活水平提高和安全意识增强，动物源食品中兽药残留已逐渐成为人们关注的质量安全焦点之一。根据作用机理，兽药种类分为磺胺类(SAs)、喹诺酮类(Qs)、大 环 内 酯 类(MLs)、四环素类(TCs)、氨基糖苷类(AGs)、-内酰胺类等1。磺胺类药物是一种广谱抗菌药，性质稳定，由于其抑制细菌生长的作用，被广泛应用于人类和动物胃肠道和呼吸系统疾病的预防和治疗1 2。由于磺胺类药物的半衰期较长，通过任何途径摄入的磺胺类药物均会在人体中蓄积，对人体产生一定的毒副作用，如造血紊乱，过敏反应，引起肠道菌群失调，影响人体免疫功能等3，这些危害对婴幼儿的影响更大。因此，很多国家对磺胺类药物的使用范围及其在动物源性食品中的残留限度进行了严格的规定。我国 食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量(GB 316502019)中规定乳中磺胺类药物最大残留限量为 100 gkg1，其中磺胺二甲基嘧啶最大残留限量为 25 gkg1 4。近些年来，磺胺类药物在国内外牛奶和奶粉中均有残留检出。2019 年，Moudgil 等5 对从印度旁遮普省 9 个区奶牛场的动物中采集的生奶样本进行检测，发现牛奶样品中磺胺甲噁唑检出率为 0.6%。任孟伟6 采用超高效液相色谱质谱联用法对 30 份不同品牌的奶粉和牛奶进行检测，发现在 3 批样品中检出磺胺硝苯，其测定值分别为 0.05 gkg1、0.16 g kg1和 0.18 g kg1。现有的奶粉中磺胺类药物残留检测前处理方法主要有固相萃取7 8 和 QuEChERS 法9 10 等。其中，固相萃取小柱价格高，操作繁琐，不适合于复杂样品基质的分析。QuEChERS 法虽可用于多残留分析，但是吸附剂不能重复使用。加速溶剂萃取法通过使用少量有机溶剂及提高温度和压力来提高样品中化合物的萃取效率，与其他样品前处理技术相比具有自动化程度高、费时短、消耗溶剂少等优点。前期研究中加速溶剂萃取法用于各类基质中磺胺类药物的萃取已有报道。王静等11 建立了加速溶剂萃取-全自动凝胶渗透色谱-高效液相色谱联用检测水产品中 13 种磺胺类药物的方法，13 种磺胺类化合物在 0.01 1.00 mgL1线性关系良好，相关系数均大于0.999 9;添加 100、200、400 g kg1，3 个浓度水平的平均回收率为 77.9%98.6%，相对标准偏差(RSD)为 0.4%13.4%。Zhu 等12 用加速溶剂萃取-萃取池内净化与超高效液相色谱质谱联用的方法分析了海参中 21 种抗生素(10 种磺胺类药物、4 种氟喹诺酮类药物、3 种两性药物、2 种-内酰胺、1 种林可酰胺和 1 种甲氧苄啶)。通过优化处理获得最佳工艺参数，使得目标分析物的回收率为 50.1%129.2%(RSD 小于 20%)，方法检出限在 0.03 2.9 gkg1。Alessandra等13 用加速溶剂萃取-液相色谱质谱联用的方法分析了生肉和婴幼儿食品中 13 种磺胺类药物，样品中磺胺类药物加标回收率为 70%101%，检出限低于 2.6 gkg1。Konak 等14 分别用QuEChERS 和加速溶剂萃取两种方法对婴儿食品中 12 种磺胺类药物及其衍生物进行分析，研究结果发现，QuEChERS 方法的回收率范围为60.9%85.9%，RSD 19.1%;加速溶剂萃取方法回收率为 75.5%96.6%，RSD 10.1%。目前，运用加速溶剂萃取法测定婴幼儿配方乳粉中的磺胺类药物残留却鲜有报道，因此，建立加速溶剂萃取前处理方法同时结合高效液相色谱-串联质谱实现高通量检测婴幼儿配方乳粉中的磺胺类药物残留的方法，对保障婴幼儿的食品安全具有重要的现实意义。1材料与方法1.1仪器、材料与试剂ASE 350 加速溶剂萃取仪(美国 Thermo Fish-er Scientific 公司);高效液相色谱仪(日本岛津公司);三重四极杆-线性离子 QTRAP 6500 阱复合质谱仪(美国 AB Sciex 公司);TurboVap LV自动氮吹仪(美国 Biotage 公司);BS2202S 电子天平(德国 Sartorius 公司);SORVALLHeraeus671浙江农业学报第 35 卷第 1 期Biofuge 冷冻高速离心机(德国 Sartorius 公司);Talboys 数显涡旋混合仪(美国 Troemner 公司);KQ5200B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。萃取池为 34 mL，购自美国 Thermo FisherScientific 公司;接收瓶，购自上海安谱实验科技股份有限公司;玻璃纤维纸直径为 47 mm，购自英国 Whatman 公司;PTFE 滤膜孔径为 0.22 m，购自北京迪科马科技有限公司;一次性使用无菌注射器为 1 mL，购自上海康德莱企业发展股份有限公司;离心管为 1.5 mL，购自德国 Eppendorf 公司;进样瓶为 2 mL，购自北京迪科马科技有限公司;硅藻土为80 100 目，购自美国 Thermo FisherScientific 公司。甲醇为 HPLC 级，购自德国 Merck 公司;乙腈为 HPLC 级，购自德国 Merck 公司;甲酸为 HPLC级，购自美国 ANAQUA 公司;甲酸铵为 HPLC 级，购自美国 ACROS Organics 公司;实验用水为Milli-Q 纯水仪制备的超纯水(18 Mcm);17种磺胺类药物标准品购自德国 Dr Ehrenstorfer 公司，基本信息如表 1 所示。1.2混合标准溶液配制混合标准储备液:分别准确称取适量各标准品，甲醇溶解，用甲醇(HPLC