加味四妙勇安膏对急性放射性...肤细胞凋亡和炎症损伤的影响_苑忠霞.pdf

中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 598 加味四妙勇安膏对急性放射性皮炎大鼠皮肤 细胞凋亡和炎症损伤的影响苑忠霞1,2，宋凤丽2，廖子玲1,2，胡汉琼1,2，李仝2，康宁2，杨文博3（1北京中医药大学，北京 100029；2北京中医药大学第三附属医院，北京 100029；3河北省沧州中西医结合医院，沧州 061000）摘要：目的：观察加味四妙勇安膏对急性放射性皮炎（a-RISR）大鼠创面愈合部位细胞凋亡及炎症损伤的影响。方法：18只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组（Control组）、模型组（Model组）、加味四妙勇安膏 A组（A7、A14组）和加味四妙勇安膏B组（B7、B14组），每组3只。除Control组，其他组均建立度a-RISR大鼠，分别用加味四妙勇安膏或0.9%氯化钠溶液对照射野进行外涂，观察照射野皮肤组织淋巴细胞浸润、细胞凋亡及线粒体损伤情况，检测血清白细胞介素（IL）-1、IL-6、肿瘤坏死因子-（TNF-）水平。结果：与Control组比较，Model组大鼠皮损组织可见大量淋巴细胞浸润，凋亡细胞数目较多，线粒体空泡化异常伴有数量减少，血清IL-1、IL-6、TNF-水平显著升高（P0.01）。与Model组比较，A组和B组明显改善照射野皮肤淋巴细胞浸润，减少创面凋亡细胞数量，缓解线粒体损伤，显著降低大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-水平（P0.01，P0.05）。结论：加味四妙勇安膏外用可通过调节照射野皮肤细胞凋亡和炎症损伤达到促进a-RISR大鼠创面愈合的防治作用。关键词：加味四妙勇安膏；急性放射性皮炎；细胞凋亡；炎症损伤；中医外治法基金资助：国家自然科学基金项目（No.81973783）Effects of Modified Simiao Yongan Ointment on apoptosis of wound skin and inflammatory injury in rats with acute radiation dermatitisYUAN Zhong-xia1,2,SONG Feng-li2,LIAO Zi-ling1,2,HU Han-qiong1,2,LI Tong2,KANG Ning2,YANG Wen-bo3(1Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China;2Beijing University of Chinese Medicine Third Affiliated Hospital,Beijing 100029,China;3Hebei Cangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese Medicine and Western Medicine,Cangzhou 061000,China)Abstract:Objective:To observe the effects of Modified Simiao Yongan Ointment on apoptosis of wound healing area and inflammatory injury in rats with acute radiation dermatitis.Methods:Eighteen SPF male Wistar rats were randomly divided into Control group,Model group,Modified Simiao Yongan Ointment A group(A7,A14 group)and Modified Simiao Yongan Ointment B group(B7,B14 group),3 rats in each group.Except the Control group,the other groups were established into the rat model of II degree acute radiation dermatitis.Their irradiated field was respectively coated with Modified Simiao Yongan Ointment or 0.9%sodium chloride solution.The lymphocyte infiltration,cell apoptosis and mitochondrial damage of skin tissue in the irradiation field were observed,and the levels of IL-1,IL-6 and TNF-in serum were detected.Results:Compared with the Control group,a large number of lymphocytes were infiltrated in the skin tissue of Model group,the number of apoptotic cells was more,mitochondria showed vacuolated and decreased in numbers,and the levels of IL-1,IL-6 and TNF-in serum were significantly increased(P30 Gy）放射线照射后引起的皮肤黏膜损害，伴有皮肤红斑、水肿、溃疡、脱屑、疼痛、发热或出血等症状2，可对肿瘤治疗进程和疗效造成不利影响。西医方面主要以比亚芬软膏、激素类乳膏、维生素B12和重组表皮生长因子等药物治疗为首选，但临床疗效存在一定局限性3。中医学认为，放射线为一种特殊的“火热毒邪”，由此引起的a-RISR可归属于“疮疡”“烧伤”范畴4。病机特点为本虚标实，以气阴两虚、营血亏损为本，外感火毒、气血壅滞为标，故将“清热解毒、益气养阴、活血生肌”作为基本治法。李仝教授在治疗恶性肿瘤放射性损伤方面有丰富的临床经验，在经典四妙勇安汤的基础上进行加减化裁，自拟加味四妙勇安方，北京中医药大学第三附属医院肿瘤血液科将其制成膏剂、油剂并开展前期研究，多项临床研究及动物实验发现加味四妙勇安制剂对a-RISR具有较好的防治作用，且治疗机制同促进血管生成、抑制炎症反应等相关5-8。本研究拟建立度a-RISR大鼠模型，观察加味四妙勇安膏对创面愈合部位细胞凋亡及炎症损伤的影响，进一步明确和完善其作用机制，以期为a-RISR的临床治疗方案提供新的选择。材料1.动物 SPF级雄性Wistar大鼠18只，体质量（23010）g，89周龄，购于斯贝福（北京）生物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2019-0010。本实验经北京中医药大学动物实验伦理委员会审批通过（批准号：202019）。大鼠饲养于中日友好医院动物实验室，环境温度（232），相对湿度（6010）%，自由进食、饮水。2.药物 加味四妙勇安膏：以金银花90 g、玄参90 g、当归60 g、黄芪30 g、连翘30 g、蒲公英 30 g、紫草30 g和甘草10 g为原料，制成浓缩配方颗粒（北京康仁堂药业有限公司），将165 g上述配方颗粒及10 g冰片加入熔化后的凡士林进行混合，并加入 10 g冰片，调成糊膏状备用。3.试剂 白细胞介素（interleukin，IL）-1、IL-6、肿瘤坏死因子-（tumor necrosis factor-，TNF-）酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（江苏酶免实业有限公司，批号分别为MM-0047R1、MM-019OR1、MM-018OR1）；无水乙醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：220301）；TUNEL凋亡检测试剂盒（大连美仑生物计数有限公司，批号：D027-1-3）；DAPI染料（索莱宝生物技术有限公司，批号：21088733）。4.仪器 371型恒温培养箱（美国Thermo Forma）；SW-CT-2D型超净工作台（苏州净化设备有限公司）；5415D型离心机（德国Eppendor）；ELX800型酶标仪（美国Bio-tek）；TS-1型脱色摇床（江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；NIB900-FL荧光显微镜（上海悌可光电科技有限公司）；水浴恒温箱（DK-8）、电热恒温孵育箱（DNP-9082）、干燥消毒烤箱（DHG-9246A）（上海精宏试验设备有限公司）；JEM-1400FLASH型透射电子显微镜（日本日立）；RM2265型超薄切片机（德国徕卡）。方法1.分 组、造模与给药 按随机数 表法将 18只雄性Wistar大鼠分为空白对照组（Control组，n=3）、模型组（Model组，n=3）、加味四妙勇安膏 A组（A组，n=6）和加味四妙勇安膏B组（B组，n=6）；A组与B组根据治疗时间分别分为A7、A14组 与B7、B14组，每组3只。造模前用1%戊巴比妥钠溶液0.4 mL/100 g腹腔注射麻醉，剃除大鼠臀部及双后肢毛发，单侧面积约3 cm3 cm。参照文献9-10及前期动物实验，制备度a-RISR大鼠模型，予Control组大鼠伪照射，其余各组大鼠6 MeV电子线单次照射，剂量率400 cGy/min，源皮距1 m，持续10 min，总照射剂量40 Gy。A组于照射后第2天起在照射野皮肤均匀涂抹加味四妙勇安膏1次/d；B组于出现放射性皮炎症状后外涂加味四妙勇安膏 skin lymphocytes in irradiated field,reduced the number of apoptotic cells on wound surface,alleviated mitochondrial damage,and significantly decreased the levels of IL-1,IL-6 and TNF-in serum of rats(P0.01,P0.05).Conclusion:The external application of Modified Simiao Yongan Ointment can promote the wound healing of a-RISR rats by regulating the apoptosis and inflammatory injury of skin cells in irradiation field.Key words:Modified Simiao Yongan Ointment;Acute radiation dermatitis;Apoptosis;Inflammatory injury;TCM external treatmentFunding:National Natural Science Foundation of China(No.81973783)内文1.indd 5992023/2/10 16:57:18中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 600 1次/d；Control组和Model组于照射后第2天起均匀外涂相同体积的0.9%氯化钠溶液1次/d。Control组、A7组、B7组连续涂抹7 d，Model组、A14组、B14组连续涂抹14 d。2.取样 于照射后第8天收集Control组、A7组大鼠照射野皮肤组织和腹主动脉血清，第15天收集Model组、A14组和B7组皮肤和血清，第22天对B14组进行采样。给药结束后，腹主动脉取血1015 mL，室温静置60120 min后予3 5004 000 r/mi