基于一测多评法定量的四季三黄片质量评价研究_周亚楠.pdf

204 Chin J Mod Appl Pharm,2023 January,Vol.40 No.2 中国现代应用药学 2023 年 1 月第 40 卷第 2 期 基于一测多评法定量的四季三黄片质量评价研究 周亚楠，张元元，白洁，苏建，武红敏，刘永利*(河北省药品医疗器械检验研究院，石家庄 050229)摘要：目的 建立同时测定四季三黄片中黄芩苷、去甲汉黄芩素苷、千层纸素 A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素 A 等 7 种成分的一测多评法。方法 采用 HPLC，岛津 VP-ODS 色谱柱(4.6 mm250 mm，5 m)，以乙腈-0.1%三氟乙酸溶液为流动相，梯度洗脱；流速 1.0 mLmin1；柱温 30；检测波长 276 nm。以黄芩苷为内参物，建立去甲汉黄芩素苷、千层纸素 A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素 A 的相对校正因子，同时采用一测多评法和外标法测定四季三黄片中 7 个成分的含量，并将 2 种方法的测定结果进行比较。结果 7 种成分在各自范围内线性关系良好(r0.999 8)，平均加样回收率 97.0%102.1%，RSD 为 1.2%2.5%。共测定了 4 个企业 29 批四季三黄片中 7 种成分的含量，结果一测多评法与外标法测定结果无明显差异。不同企业样品间各成分含量存在明显差异。结论 建立的含量方法能够反映出投料用黄芩饮片的质量状况，进而全面有效地评价四季三黄片的质量，为其质量标准的提升奠定基础。关键词：四季三黄片；一测多评；黄芩苷；汉黄芩苷；黄芩素；汉黄芩素；质量评价 中图分类号：R284.1 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2023)02-0204-09 DOI:10.13748/ki.issn1007-7693.2023.02.008 引用本文：周亚楠,张元元,白洁,等.基于一测多评法定量的四季三黄片质量评价研究J.中国现代应用药学,2023,40(2):204-212.Study on the Quality Evaluation of Sijisanhuang Tablets Based on Quantitative Analysis of Multi-components by Single Marker ZHOU Yanan,ZHANG Yuanyuan,BAI Jie,SU Jian,WU Hongmin,LIU Yongli*(Hebei Institute for Drug and Medical Device Control,Shijiazhuang 050299,China)ABSTRACT:OBJECTIVE To establish a quantitative analysis of multi-components by single marker(QAMS)method for simultaneous determination of baicalin,unmethylated bacicalein,melaeuca A-7-O-D-glucuionide,scutellarin,bacicalein,wogonin,melaeuca A in Sijisanhuang tablets.METHODS The separation was performed on HPLC with Shimadzu VP-ODS column(4.6 mm250 mm,5 m),with the mobile phase consisting of acetonitrile-0.1%trifluoroacetic acid elution for gradient elution.The flow rate was 1.0 mLmin1,the column temperature was 30,and the detection wavelengths were 276 nm.The relative correction factors of unmethylated bacicalein,melaeuca A-7-O-D-glucuionide,scutellarin,bacicalein,wogonin,melaeuca A were calculated by using the baicalin as the internal standard.At the same time,the external standard method was used to determine the content of the seven components,and the differences between the two methods were compared.RESULTS The linear ranges of seven components were well(r0.999 8).And the average recoveries were 97.0%102.1%,RSDs were 1.2%2.5%,respectively.There were no significant difference in assay results between QAMS and the external standard method.There were obvious differences in the contents of each component among samples from different enterprises.CONCLUSION The QAMS method can reflect the quality of Radix Scutellariae for feeding,and then comprehensively and effectively evaluate the quality of Sijisanhuang tablets,so as to lay a foundation for improving its quality standard.KEYWORDS:Sijisanhuang tablets;QAMS;baicalin;scutellarin;bacicalein;wogonin;quality evaluation 作者简介：周亚楠，女，硕士，高级工程师 E-mail: *通信作者：刘永利，男，硕士，正高级工程师 E-mail: 四季三黄片是由大黄、黄芩、黄柏、栀子 4味饮片组成的复方制剂，具有清炎退热、通便利水等功效，主要用于口鼻生疮、咽疼齿痛、口干舌燥、目眩头晕、大便秘结、小便赤黄等的治疗。方中大黄泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐淤通经、利湿退黄，黄芩清热燥湿、泻火解毒，黄柏清热解毒、清热燥湿，三者共为君药；栀子具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒之功效，为臣药。四季三黄片现行质量标准收载于卫生部药品标准第二十册，仅有性状和检查项，未对其特征成分进行含量控制。结合质量标准和文献报道1-2，发现仅对所含单个成分或部分药味的主要 中国现代应用药学 2023 年 1 月第 40 卷第 2 期 Chin J Mod Appl Pharm,2023 January,Vol.40 No.2 205 成分进行了定量检测，未有针对处方中黄芩药材的全面质量进行评价分析的研究。现代研究表明黄芩中的主要活性成分以黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素 A等黄酮类成分为主3，为全面评价四季三黄片中投料用黄芩药材的质量状况，拟采用 HPLC 测定黄芩中黄芩苷、去甲汉黄芩素苷、千层纸素 A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素 A 7 种成分的含量。而一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS)既能实现多指标成分的质量控制，又能解决对照品紧缺或价格昂贵的问题，已应用于多个成方制剂的质量评价4-7。本实验选取质量稳定、价廉易得的黄芩苷作为内标，采用QAMS 对四季三黄片中黄芩苷、去甲汉黄芩素苷、千层纸素 A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素 A 7 种成分的含量进行测定，建立其他 6 种成分间的相对校正因子，计算各成分的含量，并用含量结果评价不同企业间四季三黄片投料用黄芩饮片的质量差异，以期为更有效地全面控制四季三黄片的质量提供参考。1 仪器与试药 Waters e2695 高效液相色谱仪(配备 PDA 检测器，美国 Waters 公司)；Integral-10 纯水仪(Millipore公司)；KQ-500KDE 超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；甲醇、乙腈(色谱纯，Merck 公司)；三氟乙酸为优 级纯；水 为超纯水；黄芩苷(批号：110715-201821；含量：95.4%)、汉黄芩苷(批号：112002-201702；含量：98.5%)、黄芩素(批号：111595-201808；含量：97.9%)、汉黄芩素(批号：111514-201706；含量：100%)均购自中国食品药品检定研究院；去甲汉黄芩素苷(批号：STC1110205；含量：95.0%)、千层纸素 A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷(批号：ST15720105；含量：98.0%)、千层纸素 A(批号：St23660220，含量：95.0%)对照品均购自上海诗丹德标准技术服务有限公司；四季三黄片样品29 批，来自全国 4 家药品生产企业，比智高药业有限公司(厂家 A，批号：A01A06)，江西华太药业有限公司(厂家 B，批号：B1B15)，江西新远健药业有限公司(厂家 C，批号：C1C4)，天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂(厂家 D，批号：D1D4)。2 方法与结果 2.1 色谱条件 岛 津 VP-ODS 色 谱 柱(4.6 mm250 mm，5 m)；以乙腈(A)-0.1%三氟乙酸溶液(B)为流动相，梯度洗脱：012 min，22%24%A；1217 min，24%A；1730 min，24%30%A；3036 min，30%40%A；3642 min，40%A；4260 min，40%52%A；6065 min，52%80%A；检测波长：276 nm；进样量：10 L。柱温：30。流速为 1.0 mLmin1。混合对照品及样品的色谱图见图1。表明在此色谱条件下各成分分离度较好。2.2 混合对照品溶液的制备 取黄芩苷、去甲汉黄芩素苷、千层纸素 A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素 A 对照品适量，精密称定，加甲醇制成含黄芩苷 0.203 3 mgmL1、去甲汉黄芩素苷0.012 19 mgmL1、千层纸素 A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷 0.015 72 mgmL1、汉黄芩苷 0.050 13 mgmL1、黄 芩 素0.031 05 mgmL1、汉 黄 芩 素0.014 20 mgmL1、千层纸素 A 0.022 15 mgmL1的混合对照品溶液。2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约 0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇溶液 25 mL，密塞，称重，超声处理(功率 700 W，频率 80 kHz)30 min，放冷，再称重，用 70%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.4 阴性样品溶液制备 按照处方和制法，制备缺黄芩的阴性样品，按“2.3”项下方法制备，即得。2.5 方法学考察 2.5.1 专属性试验 取对照品、供试品、阴性样品溶液，按“2.1”项色谱条件下进行测定，结果显示所记录色谱图基线平稳，四季三黄片中待测目标成分黄芩苷、去甲汉黄芩素苷、千层纸素A-7-O-D 葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素 A 与相邻成分色谱峰