口腔颌面外科杂志2023年2月第33卷第1期JournalofOralandMaxillofacialSurgeryVol．33No．1February,2023[基础研究]甲氨蝶呤对小鼠磨牙牙胚发育的影响罗容春，韩雪，王海丞，朱辙文，刘力维，王佐林（上海牙组织修复与再生工程技术研究中心，同济大学口腔医学院，同济大学附属口腔医院口腔种植科，上海200072）[摘要]目的：探究甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）对磨牙牙胚发育的影响。方法：体外于体式显微镜下分离出胚胎13.5d（E13.5）小鼠下颌第一磨牙（firstmolar，M1）牙胚，并将其加入到新鲜的器官培养液中。将MTX溶解于二甲基亚砜，分别配制成0.1、1.0、10.0μmol/LMTX的器官培养液，作为实验组（MTX组）；在培养液中加入等量的二甲基亚砜，作为对照组。隔日拍照观察牙胚变化的情况。对出生后2d（P2）至出生后6天（P6）的新生鼠按1、3、5mg/kg的剂量进行腹腔注射MTX（隔日注射），于第2.5、4、6、8天时取样，对下颌第三磨牙（thirdmolar，M3）进行组织学分析。结果：体外培养9d后，观察到1.0、10.0μmol/LMTX组牙胚均死亡；0.1μmol/LMTX组牙胚的宽度、总高度及牙尖高度均出现异常。体内实验观察到3、5mg/kgMTX组的P8小鼠下颌M3较对照组形态异常；凋亡检测结果表明，3mg/kgMTX组下颌M3在牙发育过程中，其凋亡细胞较对照组多；免疫荧光结果表明，在P2.5、P4小鼠下颌M3中，3mg/kgMTX组增殖细胞较对照组少，P6、P8小鼠下颌M3中，3mg/kgMTX组增殖细胞较对照组多。结论：MTX会导致磨牙形态发育异常，出现牙胚体积减小、发育延缓等,这可能是因为牙发育过程中，MTX促进了牙胚细胞凋亡，在蕾状期及帽状期抑制了牙胚细胞增殖。[关键词]甲氨蝶呤；牙发育；细胞增殖；细胞凋亡[中图分类号]R782[文献标志码]ADOI:10.3969/j.issn.1005-4979.2023.01.001EffectofmethotrexateonthedevelopmentinmousemolartoothgermLUORongchun,HANXue,WANGHaicheng,ZHUZhewen,LIULiwei,WANGZuolin(ShanghaiEngineeringResearchCenterofToothRestorationandRegeneration,DepartmentofOralImplantology,SchoolandHospitalofStomatology,TongjiUniversity,Shanghai200072,China)[Abstract]Objective:Toexploretheeffectofmethotrexate(MTX)onthedevelopmentofmousemolartoothgerm.Methods:Invitro,mandibularfirstmolar(M1)toothgermsfromthe13.5thdayembryonic(E13.5)mouseweredissectedunderstereomicroscopeandthenculturedwithfreshorganculturesolution.Intheexperimentalgr...
