基于尿素酶的幽门螺杆菌唾液检测分析_李若彬.pdf

智慧健康Smart Healthcare2022 年 第 33 期6|智慧医疗医疗信息化基于尿素酶的幽门螺杆菌唾液检测分析李若彬，王柯为，李梦娜，杨贺迪，冷锋哈尔滨医科大学大庆校区，黑龙江大庆163000摘要：目的 唾液幽门螺杆菌（Hp）检测分析。方法 首先采集样品唾液，将采样品的唾液对其进行预处理，然后放入反应盒内，5min左右后观察其颜色改变，通过比色法进行酶动力学实验，最后进行观察颜色变化来判断是否为阳性。结果 本文通过对尿素的浓度以及结合唾液链球菌经过精准的分析后得，经过调节后的液体环境且不会对本实验产生任何影响，所以本实验具有较高的可行度以及较高的可信度，同时对200列试验人员进行精密的检测，然后分析该方法的准确性。结论 Hp唾液检测试剂盒灵敏性约为98.29%，特异性约为90.36%，阳性预测值约为94.26%，阴性预测值为约96.15%，准确性约为95%，差异性约5%，低于实验允许变异系数（10%），Hp唾液检测试剂盒实验标本为唾液，同时对人体无危害，且所花费的检测时间短，其操作简单，也可以进行多次检测，适用于家庭、学校以及一些公共场合的初次检查。关键词：Hp；13C；尿素酶；半定量DOI:10.19335/ki.2096-1219.2022.33.002 Detection and Analysis of Helicobacter Pylori Saliva Based on UreaseLI Ruobin,WANG Kewei,LI Mengna,YANG Hedi,LENG FengDaqing Campus,Harbin Medical University,Daqing,Heilongjiang,163000ABSTRACT：Objective To detect and analyze saliva Hp.Methods First,the paper collected sample saliva and pretreated it,put it into reaction box.After about five minutes,color changes were observed.Enzyme kinetics experiment was conducted by colorimetry.Finally,color changes were observed to determine whether it was positive.Results The paper carried out accurate analysis on concentration of urea and streptococcus salivarius.Adjusted liquid environment caused no effect on the experiment,which had high feasibility and reliability.At the same time,the paper carried on precise test for 200 cases test staff,then analyzed accuracy of the method.Conclusion Sensitivity of HP salivary detection kit is about 98.29%,with specificity of about 90.36%,with positive predictive value of about 94.26%,with negative predictive value of about 96.15%,with accuracy of about 95%,with difference of about 5%,lower than allowable coefficient of variation(10%)of experiment.Test sample of HP salivary detection kit is saliva,which is harmLess to human body,with short detection time and simple operation,and it can be tested many times,and is suitable for initial inspection of families,schools and some public places.KEYWORDS：Hp;Urease;Semiquantitative0引言幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功，是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类，能够导致Hp病包括由Hp感染引起的胃炎、消化道溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等，存在于大多数慢性胃炎患者的胃黏膜上皮表面或腺体的黏液层中1-2。在发达国家，大约占比30%60%，在发展中国家，大约占比60%。Hp能产生大量的脲酶，其活性是其他变形杆菌的2070倍，是所有已知产生脲酶的细菌中最活跃的。Hp产生脲酶，该酶催化游离氨的产 生3。氨气在Hp周围形成“氨气云”，中和胃酸，保护Hp免受胃黏膜酸性环境的影响。医学从业基于尿素酶的幽门螺杆菌唾液检测分析 7人员认为体内的Hp通常可以消除，应进行全国普查。至少那些曾经做过胃部手术、胃部疾病或者胃癌的患者应该接受Hp检测，感染者应接受杀菌治疗，希望能够控制胃癌。1检测材料Hp唾液检测试剂：尿素50g，酵母浸膏0.1g，酚红0.01g，乙醇，PH计。呼气试验：13C呼气试验分析仪（WLD600），13C胶囊。2实验检测2.1Hp唾液检测方法2.1.1采样预处理患者一周之内不可服用抗生素，铋剂，质子泵抑制剂等药物，留取唾液样本前一晚十二点之后禁食禁水（见图1）。清晨刷牙前留取唾液样本至采集管1，通过调节唾液PH酸碱度至6.8降低唾液链球菌酶活性，减少其对实验结果的影响。图 1实验检测步骤2.1.2口腔Hp半定量检测将采样预处理后的样本用胶头滴管吸入35滴，放入配置好的反应盒内，5min后观察其颜色改变，通过比色法进行酶动力学实验，以此实现对Hp的半定量4。5min后反应试剂盒内溶液为黄色则为阴性，变为红色则显示阳性，且随着HP含量的增加，溶液的颜色也会随之加深，由浅红色变为深红色或玫红色5-6。2.213C呼气试验呼气试验是检测Hp感染的首选方法，主要是13C和14C尿素呼气试验，具体如下：（1）呼气试验检测Hp主要是通过13C和14C的尿素呼气试验，由于尿素能够在尿素酶的作用下生成氨和CO2，在患者进行呼气试验的时候可以先服用一颗有标记的13C或14C尿素，当患者体内有Hp时，它就可以被分解为氨和CO2，在使用同位素标记的CO2将会通过呼吸道排放到体外，因此可以用患者呼气来检测Hp感染的情况，同位素标记的CO2越多则Hp感染的情况越严重7-8。（2）呼气试验无创无痛，减轻了患者的疼痛感，并且敏感性高，检测的准确性率高，不会造成交叉感染，所以Hp的检测首选呼气试验的方法13C呼吸试验检测的方法，通过检测被13C标记的CO2是否超过100dpm来确定是否有Hp感染，本文主要运用的是13C9-10。3实验分析3.1尿素浓度与反应时间确定尿素酶催化尿素水解，生成两分子的氨和一分子的CO2，同时也引起溶液PH的变化（见图2），因此，分别将浓度为0.1、0.7、7、30、50、70、140g/L的10mL尿素溶液与1mL，0.5U/mL的尿素酶溶液混合，30min后检测其PH酸碱度，结果显示，尿素浓度在0.7、7、30、50、70g/L时，PH变化最为明显，且5组数据之间无显著差异。据此，本实验试剂尿素溶液浓度设置为50g/L。图 2不同浓度尿素溶液检测结果将10mL的尿素溶液与0.5U/mL的尿素酶溶液充分混合，静置5min，30min，60min，90min，智慧健康Smart Healthcare2022 年 第 33 期8|分别检测其PH变化，经过多次实验发现，在反应时间为5min时其PH酸碱度与反应时间30min的PH酸碱度无显著差异。据此本检测方式设定反应时间为5min。3.2唾液链球菌的分析口腔中的唾液链球菌是最为主要的产生尿素酶分解尿素的细菌，因此会对实验结果产生一定影响。根据唾液链球菌的酶活性数据与PH数据，结合matlab软件进行数据拟合，软件拟合得出的R-square=0.9613，可以看出拟合的精确度较高，同时也符合实际情况，详见表1。表 1唾液链球菌酶活性与 PH 关系变化图表指标指标 1指标 2指标 3指标 4PH2.633.43.8酶活性0.440.880.9695.109指标指标 5指标 6指标 7指标 8PH4.24.655.4酶活性5.9027.4874.4040.1763.3评价指标本文对200组检测结果进行综合分析，对检测结果的灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率、一致性进行统计分析，具体方法如下：计算灵敏度数学方法：灵敏度的计算需要与阳性标本数与总阳性标本数有关，计算公式如下：总阳性本书阳性标本数灵敏性=P计算特异性数学方法：特异性的计算主要与阴性标本数与总的阴性标本数有关，计算公式如下：总阴性本数阴性标本数特异性=P计算特异性数学方法：阳性预测值主要与真阳性标本数和诊断实验结果呈阳性标本数有关,计算公式如下：本数诊断试验结果呈阳性标真阳性标本数阳性预测值=P计算阴性预测值数学方法：阴性预测值主要与真阴性标本数和诊断实验结果呈阴性标本数有关,计算公式如下：本数诊断试验结果呈阴性标真阴性标本数阴性预测值=P计算准确性数学方法：准确性主要与真阳性标本数、真阴性标本数以及总标本数有关,计算公式如下：总标本数真阳性标本数真阴性标本数准确性+=P计算一致性数学方法：计算一致性主要与共阳性标本数和阳性总数有关，计算公式如下：阳性总数共同阳性标本数一致性=P4实验结果在200例受试者中，Hp唾液检测试剂盒检测出受试者阳性的数目为122例，Hp唾液检测试剂盒检测出受试者阴性的数目为78例；Hp唾液检测试剂盒检测出受试者13C阳性的数目为117例，Hp唾液检测试剂盒检测出受试者阴性的数83例，122例Hp唾液检测试剂盒阳性标本对应13C阳性117例，Hp唾液检测试剂盒阳性标本对应假阳性7例；78例Hp唾液检测试剂盒阴性标本对应13C阴性83例，Hp唾液检测试剂盒阴性标本对应假阴性2例；本实验所采用的试剂盒灵敏性通过前面数学方法计算达到了98.29%，特异性通过前面数学方法计算达到了90.36%，阳性预测值通过前面数学方法计算达到了94.26%，阴性预测值通过前面数学方法计算达到了96.15%，准确性通过前面数学方法计算达到了95%，差异性通过前面数学方法计算达到了5%，低于实验允许变异系数（10%），所以本实验具有很高可行性与可信度11-14。5讨论Hp经口到达胃黏膜后定居感染，会引发慢性、浅表性胃炎、溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤、慢基于尿素酶的幽门螺杆菌唾液检测分析 9性萎缩性胃炎、肠化生、胃癌等，大量研究数据表明口腔中存在Hp，且具有较高的检出率15-16。Hp产生尿素酶，可分解尿素生成CO2和氨气。13C呼气试验通过标记、检测Hp尿素酶分解生成的CO2，实现对Hp的检测；Hp唾液检测试剂盒，通过检测被氨气碱化的溶液，确定是否有Hp感染17-18。Hp唾液检测试剂盒与13C呼气试验检测结果存在一定差异，但是差异性为5%，低于实验允许变异系数10%，无统计学意义。Hp唾液检测试剂盒实验标本为唾液19，对人体无危害，且检测时间短，操作简单，可重复检测，适用于家庭、学校的初查。6防治建议想要彻底的把Hp消灭并不是一件困难的事，大约85%的细菌感染者经过714d的正确治疗过后，位于身体