基于网络药理学结合动物实验...宁治疗格雷夫斯病的作用机制_高长久.pdf

中国医药导报 2 0 2 3 年 1 月第 2 0 卷第 3 期论著CHINA MEDICAL HERALD Vol.20 No.3 January 2023基金项目 国家自然科学基金青年科学基金项目（8 1 3 0 2 89 8）；国家自然科学基金面上项目（8 2 0 7 4 1 4 9）。作者简介 高长久（1 9 8 3.2-），男，黑龙江中医药大学研究生学院 2 0 2 0 级临床中药学专业在读博士研究生；研究方向：中药药性理论及药效物质基础。通讯作者 刘树民（1 9 6 3.3-），男，博士，教授，博士生导师，主任医师；研究方向：中药药性理论及药效物质基础。基于网络药理学结合动物实验探究芪玄抑甲宁治疗格雷夫斯病的作用机制高长久1丁崧1卢芳2柳长凤2于栋华2刘树民21.黑龙江中医药大学研究生院，黑龙江哈尔滨 1 5 0 0 4 0；2.黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江哈尔滨 1 5 0 0 4 0摘要目的通过网络药理学与动物实验探究芪玄抑甲宁治疗格雷夫斯病（G D）的作用机制。方法应用中药系统药理学数据库与分析平台和化学专业数据库查筛芪玄抑甲宁的活性成分及其靶点，从 G e n e c a r d s、在线人类孟德尔遗传数据库等中查筛 G D相关靶点；将药物与疾病共有靶点导入 S T R I N G平台构建蛋白质-蛋白质相互作用（P P I）网络并筛选核心靶点；使用 C y t o s c a p e 3.8.2 软件绘制“药物-活性成分-靶点”网络图并筛选核心成分；应用 M e t a s c a p e 平台对核心靶点进行富集分析。选取 6 周龄 S P F级体重（2 0 2）g 的雌性 B A L B/c 小鼠 4 0 只，其中1 0 只设为正常对照组，其余 3 0 只均用重组腺病毒 A d-T S H R-2 8 9 免疫 3 次构建 G D模型。将造模成功的小鼠采用随机数字表法分为 G D模型组、甲巯咪唑组、芪玄抑甲宁组，每组 8 只。芪玄抑甲宁组灌胃芪玄抑甲宁 5 0 g/k g，甲巯咪唑组灌胃甲巯咪唑片 3.7 5 m g/k g，正常对照组、G D模型组灌胃同体积的饮用水，1 次/d。连续给药 4 周后，采用酶联免疫吸附试验检测四组血清血管内皮生长因子（V E G F）含量，免疫组织化学染色法检测四组甲状腺组织血小板内皮细胞黏附分子-1（P E C A M-1）的表达量。结果共得到芪玄抑甲宁活性成分 6 3 种，靶点 2 8 1 个，G D靶点 1 4 8 9 个，药物与疾病共有靶点 1 2 4 个。P P I 获得信号转导和转录激活因子 3、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1、V E G F A等 2 1 个核心靶点。药物-靶点分析得到木犀草素、山柰酚、槲皮素、熊果酸、-谷甾醇等 1 8 种核心成分。G O分析获得炎症反应、血管新生、血管形态发生等 9 5 4 项，K E G G分析获得 M A P K、P I 3 K/A K T、V E G F 等 9 2 条通路。动物实验显示，G D模型组血清 V E G F 和甲状腺组织 P E C A M-1 表达量高于正常对照组，且芪玄抑甲宁组低于 G D模型组，差异有高度统计学意义（P0.0 1）。结论芪玄抑甲宁可能通过调控 M A P K、P I 3 K/A K T、V E G F等信号通路产生抑制血管新生的作用治疗 G D。关键词芪玄抑甲宁；格雷夫斯病；网络药理学；血管新生；作用机制中图分类号 R581.4文献标识码 A文章编号 1673-7210（2023）01（c）-0009-06D O I：1 0.2 0 0 4 7/j.i s s n 1 6 7 3-7 2 1 0.2 0 2 3.0 3.0 2Discussion of the mechanism of Qixuan Yijianing in the treatment ofGraves disease based on network pharmacology and animal experimentsGAO Changjiu1DING Song1LU Fang2LIU Changfeng2YU Donghua2LIU Shumin21.G r a d u a t e S c h o o l,H e i l o n g j i a n g U n i v e r s i t y o f C h i n e s e M e d i c i n e,H e i l o n g j i a n g P r o v i n c e,H a r b i n 1 5 0 0 4 0,C h i n a;2.I n s t i t u t eo f C h i n e s e M e d i c i n e,H e i l o n g j i a n g U n i v e r s i t y o f C h i n e s e M e d i c i n e,H e i l o n g j i a n g P r o v i n c e,H a r b i n 1 5 0 0 4 0,C h i n aAbstract Objective T o e x p l o r e t h e m e c h a n i s mo f Q i x u a nY i j i a n i n g i nt h e t r e a t m e n t o f G r a v e s d i s e a s e(G D)b a s e do nn e t w o r kp h a r m a c o l o g ya n da n i m a l e x p e r i m e n t s.Methods T h ea c t i v ec o n s t i t u e n t sa n dt a r g e t so f Q i x u a nY i j i a n i n gw e r ed e t e c t e d b y t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e s y s t e m s p h a r m a c o l o g y d a t a b a s e a n d a n a l y s i s p l a t f o r m,a n d c h e m i c a l d a t a b a s e,a n dG Dr e l a t e dt a r g e t s w e r e d e t e c t e df r o mG e n e c a r d s,o n l i n e h u m a nM e n d e l i a ng e n e t i c d a t a b a s e,etc.T h e c o m m o nt a r g e t s o fd r u g s a n d d i s e a s e s w e r e i n t r o d u c e d i n t o S T R I N Gp l a t f o r mt o c o n s t r u c t p r o t e i n-p r o t e i n i n t e r a c t i o n(P P I)n e t w o r k a n d s c r e e nc o r et a r g e t s.C y t o s c a p e3.8.2s o f t w a r ew a su s e dt om a pt h ed r u g-a c t i v ei n g r e d i e n t-t a r g e tn e t w o r ka n ds c r e e nc o r ec o m p o n e n t s.T h e c o r e t a r g e t w a s e n r i c h e d b y M e t a s c a p e p l a t f o r m.F o r t y 6-w e e k-o l d f e m a l e B A L B/c m i c e w i t h S P F g r a d e a n db o d y w e i g h t o f(2 0 2)g w e r e s e l e c t e d,t e n o f w h i c h w e r e s e t a s n o r m a l c o n t r o l g r o u p,a n d t h e r e m a i n i n g 3 0 w e r e i m m u n i z e d w i t hr e c o m b i n a n t a d e n o v i r u s A d-T S H R-2 8 9f o r t h r e e t i m e s t oc o n s t r u c t G Dm o d e l.T h em i c et h a t m o d e l e ds u c c e s s f u l l yw e r ed i v i d e di n t oG Dm o d e l g r o u p,M e t h i m a z o l eg r o u p,a n dQ i x u a nY i j i a n i n gg r o u pb yr a n d o m n u m b e rt a b l em e t h o d,w i t he i g h t m i c ei ne a c hg r o u p.Q i x u a nY i j i a n i n gg r o u pw a s i n t r a g a s t r i ca d m i n i s t r a t i o no f Q i x u a nY i j i a n i n g5 0 g/k g,M e t h i m a z o l e g r o u p w a s i n t r a g a s t r i c a d m i n i s t r a t i o n9论著中国医药导报 2 0 2 3 年 1 月第 2 0 卷第 3 期CHINA MEDICAL HERALD Vol.20 No.3 January 2023格雷夫斯病（G r a v e s d i s e a s e，G D）又称毒性弥漫性甲状腺肿，是一种甲状腺器官特异性自身免疫性疾病，其特征是促甲状腺激素受体抗体的产生，导致甲状腺功能亢进 1。当前，治疗 G D主要有抗甲状腺药物、手术和放射性碘 3 种治疗方式 2-3，但存在着复发率高、易伴发甲状腺功能减退等问题 4。G D属于中医“瘿病”范畴，甲状腺肿大为中医之“痰凝”。本病初期多为气机郁滞，继而津凝痰聚，痰气搏结颈前。日久引起血脉瘀阻，气、痰、瘀三者常协同为患。随着病情的进展，本病常发生病机转化。如肝气郁结日久可化火，火热内盛，耗气伤阴，导致气阴两虚之候 5。验方芪玄抑甲宁补气滋阴、清肝降火、化痰散结，广泛应用于临床，并取得良好疗效，其由黄芪、玄参、浙贝母、夏枯草和牡蛎 5 味中药组成，前期药效学研究已证实其对 G D有显著改善作用 6-8，但其具体作用机制尚未明确。因此，本研究通过网络药理学预测芪玄抑甲宁治疗 G D的作用机制，并对筛选的部分预测结果进行动物实验验证，以期初步探讨芪玄抑甲宁治疗 G D的作用机制，为其进一步研究奠定基础，为中药防治 G D提供依据。1材料与方法1.1材料与仪器1.1.1实验动物6周龄 S P F级雌性 B A L B/c 小鼠，体重（2 0 2）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号 S C X K（京）2 0 2 1-0 0 0 6。动物于温度 2 0 2 6、湿度 4 0%6 0%条件下适应性饲养 7 d，自由进食饮水。动物实验在黑龙江中医药