基于QuEChERS的GC...中的有机磷农药残留量的研究_张碧宇.pdf

2023 年第 1 期文章编号：1671-9646（2023）01b-0057-05第 1 期（总第 568 期）农产品加工No.12023 年 1 月Farm Products ProcessingJan.摘要：建立一种肉制品中的 5 种有机磷农药含量的气相色谱-三重四极杆串联质谱（Gas chromatography-tandem massspectrometry，GC-MS/MS）的定性定量分析方法。样品用乙腈提取，加入合适比例的粉剂净化，40 水浴吹至近干。定容后，用 GC-MS/MS 法同时对 5 种有机磷农药进行定性定量分析，内标法定量。结果表明，这 2 种农药在 10500 ng/mL 质量浓度内，相关系数均大于 0.999，检出限为 0.0010.010 mg/kg，定量限为 0.0030.030 mg/kg，样品的加标回收率在 80%120%，相对标准偏差均小于 12%。该方法灵敏度、准确度和稳定性较高，适用于肉制品中 5 种有机磷农药的检测。关键词：GC-MS/MS；农药残留；肉制品；辛硫磷中图分类号：TS207.5文献标志码：Adoi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2023.01.047Determination of Five Kinds of Pesticide Residues in Meat Productsby GCQQQ Base on QuEChERSZHANG Biyu1，ZHOU Jianfeng1，XIANG Linmin1，YAN Yanyang1，*SUI Yujie2（1.Wenzhou Quality and Technology Testing Research Institute，Wenzhou，Zhejiang 325000，China；2.Wenzhou Institute for Food and Drug Control，Wenzhou，Zhejiang 325000，China）Abstract：To establish a method for the simultaneous determination of five kinds of organic phosphorus pesticide residues inthe meat products by gas chromatography-tandem mass spectrometry（GC-MS/MS）.The sample was extracted with acetoni-trile，purified by adding appropriate proportion of powder，and blown to nearly dry in 40 water bath.After constant vol-ume，five kinds of organic phosphorus pesticides were analyzed qualitatively and quantitatively by GC-MS/MS，and quantifiedby internal standard method.The results showed that the correlation coefficients of the linear equations of the five kinds of pes-ticide residues in the concentration range of 10500 ng/mL，were more than 0.999，with the limits of detection from 0.0010.010 mg/kg，and the limits of quantitation from 0.0030.030 mg/kg.The recoveries of standard addition of the sample were80%120%，and the relative standards deviation were less than 12%.The method had high sensitivity，accuracy and stabili-ty，and was suitable for the detection of five kinds of organic phosphorus pesticide residues in meat products.Key words：GC-Ms/Ms；pesticide residues；meat products；Phoxim基于 QuEChERS 的 GCQQQ 同时检测肉制品中的有机磷农药残留量的研究张碧宇1，周建峰1，项林敏1，颜艳阳1，*隋玉杰2（1.温州市质量技术检测科学研究院，浙江 温州325000；2.温州市食品药品检验科学研究院，浙江 温州325000）收稿日期：2022-03-22基金项目：温州市科技局基础性农业科技项目（N2020014）。作者简介：张碧宇（1987），女，本科，高级工程师，研究方向为食品分析与检验。*通讯作者：隋玉杰（1978），女，硕士，高级工程师，研究方向为食品安全检测。我国是世界上肉制品生产和消费第一大国。随着生活水平的提高，肉类食品在居民食品消费中的比例日益增加，人们对肉制品的安全问题也越来越重视。同时，肉制品中的农药残留问题也逐渐引起人们的关注。肉制品中常见的农药残留主要有有机磷农药残留、有机氯农药残留和拟除虫菊酯农药残留等。目前，残留最多的种类是有机磷农药1。一方面，有机磷农药在农业生产中的广泛使用，导致农作物中存在不同程度的农药残留，并对土壤和水体环境造成一定程度的污染，由此导致畜禽饲料及生活环境的有机磷农药污染。其中，倍硫磷更是对水生生物具有极高毒性，可能对水体环境产生长期不良影响，澳大利亚自 2015 年 10 月以后禁止使用含有倍硫磷的产品；另一方面，在畜牧养殖加工过程中，二嗪磷、辛硫磷、倍硫磷等作为兽药杀虫剂广泛用于畜类防疫杀虫方面，可按比例配制成药液，喷涂牲畜体表或进行药浴。其中，二嗪磷可注射牛体，灭杀牛瘤蝇的幼虫，也可作为家庭卫生用杀虫喷雾剂。农产品加工2023 年第 1 期此外，在我国，因农药残留引起的食品中毒事件时有发生，不法商家在腌制火腿等食品中，添加有机磷农药用来防腐和防虫2，更有甚者，用有机磷农药浸泡肉制品来牟取非法利益。有机磷农药超标会导致人体出现一系列神经中毒症状，如出汗、震颤、精神错乱、语言失常，严重者会出现呼吸麻痹，甚至死亡3。由此可见，二嗪磷、辛硫磷、倍硫磷不仅可以作为农药杀虫剂，还可作为兽药杀虫剂，从而导致肉制品中有机磷农药残留超标，通过生物链富集到人体，进而产生残留毒性，严重威胁人体健康。但在国内标准中并无肉制品中有机磷残留量的检测方法4，国内外文献报道中也未见肉制品中有机磷残留量的 GC-MS/MS 检测方法。目前，对于肉制品中有机磷的前处理方法主要有液液萃取法5、固相萃取法和 GPC净化法等6-7。这些方法在处理样品的过程中，有机试剂使用量大，导致洗脱、浓缩过程耗时、费力、污染大。而基于 QuEChERS 法的前处理方法具有试剂使用量少、前处理过程简单、回收率高等优点8，不仅有利于实验室提高检测效率，还能减少有机试剂的污染。有机磷的检测方法主要有光谱法9-10、气相色谱法11-13、气相色谱-质谱联用法14-16、液相色谱-三重四极杆联用法17-19。但是，气相色谱法仅能依靠时间定性，在结果判断中易出现把杂峰误认为目标峰的情况，从而导致判断错误，影响检测结果；气相色谱-质谱联用法也同样有类似的问题，时间相近的且离子碎片质量相同的情况下无法准确定性；液相色谱-三重四极杆联用法虽然准确性比前两者高，但它不能检测有机氯农药，存在一定局限性。而 GC-MS/MS 检测方法，不仅检出限低、干扰少，能够同时检测多种类农药残留，且以多反应监测进行判断，提高结果的准确性。试验通过对 QuECh-ERS 前处理方法的优化，并采用高灵敏度和准确度的 GC-MS/MS 检测肉制品中二嗪磷、辛硫磷、倍硫磷、倍硫磷砜、倍硫磷亚砜残留量。这不仅能确保肉制品的质量，达到有效监管，维护消费者的权益；还能为今后肉制品中有机磷国家标准的制定提供数据基础。1材料与方法1.1材料与试剂不同种类的市售肉制品样品，包括酱油肉、卤羊排、酱牛肉、卤鸡腿、烤鸭、烧鹅、卤猪心、酱鸭舌、卤猪肝、卤牛百叶、卤鸭肠（依次编号为111），市售；乙腈、乙酸乙酯、C18粉、硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸氢二钠、PSA，上海安谱实验科技股份有限公司提供；二嗪磷、辛硫磷、倍硫磷、倍硫磷砜、倍硫磷亚砜、环氧七氯 B 标准品（质量浓度 100 mg/L），上海安谱实验科技股份有限公司提供。1.2仪器与设备8890A-7000D 型气相色谱-三重四极杆质谱联用仪（配有电子轰击源 EI）、HP-5 型色谱柱（30 m250 m0.25 m，美国 Agilent 公司产品；T25 型分散机，德国 IKA 公司产品；水浴加热氮吹仪，上海安谱实验科技股份有限公司产品；SIGMA 3K15 型冷冻离心机（转速5 000 r/min），美国 Sigma 公司产品；涡旋混合仪，赛默飞世尔 LP Vprtex Mixer 公司产品；移液器（Research Plus），美国 Eppendorf公司产品；微孔滤膜（0.22 m 有机相），上海安谱实验科技股份有限公司产品。1.3方法1.3.1标准溶液配制分别准确移取 5 种有机磷标准品 1.0010 mL 棕色容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，配制成10.0 mg/L的混合标准溶液，在-18 下避光保存。称取 5 mg环氧七氯 B 标准品至 10 mL 棕色容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，配制成 500.0 mg/L 标准储备液，在-18 下避光保存。移取环氧七氯 B 标准储备液1.0100 mL 容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，配制成 5.0 mg/L 的标准工作溶液。在进行测试前，移取适量有机磷混合标准溶液和环氧七氯 B 标准工作溶液，配制成标准工作曲线。制作标准工作曲线质量浓度为 10.0，20.0，50.0，100.0，500.0 ng/mL，内标质量浓度为 100.0 ng/mL。1.3.2样品的制备（1）样品制备。将样品 111 分别用粉碎机粉碎、装袋、标号，密封后保存于-18 冰箱中。（2）加标样品制备。取 2.00 g 粉碎后的样品 1室温解冻，按照 0.05，0.10，0.50 mg/kg 这 3 个水平的加标量，将稀释后的有机磷混合标准溶液加入到肉制品中，加入乙酸乙酯溶液 5.0 mL，在室温下自动振荡 12 h，待混合均匀后，氮吹挥去多余溶剂，即获得加标样品，与冰箱 4 下保存，备用。前处理优化及部分方法学数据以样品 1 为代表进行检测，而实际样品分析是将样品 211 号按照 2.3.2 加标制备所得。1.3.3样品前处理20-21称取 2.0 g 样品（精确至 0.01 g）于 50 mL 塑料离心管中，加入乙腈 10 mL、硫酸镁 4 g、氯化钠 1 g、柠檬酸钠 1 g、柠檬酸氢二钠 0.5 g，匀浆1 min 后以转速 8 000 r/min 离心 5 min。吸取上清液 6 mL 加到硫酸镁 1 200 mg、PSA 400 mg及 C18400 mg的 15 mL塑料离心管中，涡旋混匀 1 min，以转速 8 000 r/min 离心 5 min，准确吸取上清液 2 mL于 10 mL试管中，40 水浴中氮气吹至近干。加入内582023 年第 1 期标溶液 20 L，加入乙酸乙酯 1 mL 复溶，过微孔滤膜，用于测定。1.3.4GC-MS/MS参数色谱柱：AgilentHP-5UltraInert（30m250m0.25m）；程序升温（70保持2min，然后以25/min升温至15