基于Nrf2信号通路探究参...亡对酒精性肝损伤大鼠的影响_周相宇.pdf

第 29 卷第 5 期2023年 3 月Vol.29，No.5Mar.，2023中国实验方剂学杂志Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae基于 Nrf2信号通路探究参苓白术散调节铁死亡对酒精性肝损伤大鼠的影响周相宇1，周素芳1，2*，李玉茹1，蔡世揿1，廖佳佳1，叶佐玉1（1.贵州中医药大学 第一临床医学院，贵阳 550002；2.贵州中医药大学 第一附属医院，贵阳 550001）摘要 目的：观察参苓白术散通过调节核因子 E2相关因子 2（Nrf2）信号通路的干预调节铁死亡对酒精性肝损伤大鼠的影响。方法：将 40只 SD大鼠随机分为模型组、多烯磷脂酰胆碱组、参苓白术散高、中、低剂量组，每组 8只，另取 8只 SD大鼠作为正常组。模型组、多烯磷脂酰胆碱组、参苓白术散高、中、低剂量组予以 10 mL kg-1灌胃造模，正常组予以等体积蒸馏水灌胃；每日灌酒 4 h后，予以多烯磷脂酰胆碱组 143.64 mg kg-1药物灌胃、参苓白术散高、中、低剂量组分别予以 15、7.5、3.75 mg kg-1的药物，正常组与模型组予以等体积蒸馏水灌胃，灌胃连续 6周。全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素-1（IL-1）水平，生化检测法检测脂多糖（LPS）、丙二醇（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、铁离子（Fe+）水平，苏木素-伊红（HE）和油红 O染色观察肝脏病理变化，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测 Nrf2、血红素加氧酶-1（HO-1）、谷胱甘肽过氧化物酶 4（GPX4）、铁蛋白重链 1（FTH1）、核转录因子-B（NF-B）mRNA 表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 Nrf2、HO-1、GPX4、FTH1、p65、磷酸化（p）-p65蛋白表达。结果：与正常组比较，模型组肝功能（ALT、AST、GGT）、血脂（TC、TG）水平明显升高（P0.05），肝脏出现明显脂肪变性，有大量脂肪沉积，氧化应激水平及炎症因子明显升高（P0.05），Fe+水平明显增高（P0.05），Nrf2、HO-1、GPX4、FTH1 蛋白表达明显下调（P0.05），p65、p-p65 蛋白表达明显上调（P0.05），Nrf2、HO-1、GPX4、FTH1 mRNA 表达明显下调（P0.05），NF-B mRNA 表达明显上调（P0.05）；与模型组比较，参苓白术散高、中剂量组肝功能（ALT、AST、GGT）、血脂（TC、TG）水平明显下调（P0.05），肝脏脂肪变性明显改善，脂肪沉积明显减少，氧化应激水平以及炎症因子明显降低（P0.05），Fe+水平明显降低（P0.05），Nrf2、HO-1、GPX4、FTH1蛋白表达明显上调（P0.05），p65、p-p65蛋白表达明显下调（P0.05），Nrf2、HO-1、GPX4、FTH1 mRNA表达明显上调（P0.05）、NF-B mRNA表达明显下调（P0.05）。结论：参苓白术散能够有效减少ALD大鼠肝损伤，调节脂肪变性与脂肪沉积，并在肝脏内发挥抗氧化与抗炎作用；其作用机制可能与上调Nrf2信号通路改善氧化应激的途径抑制肝细胞内铁死亡发生有关。关键词 参苓白术散；酒精性肝损伤；核因子 E2相关因子 2（Nrf2）；氧化应激；铁死亡中图分类号 R2-0；R22；R285.5；R289；R33 文献标识码 A 文章编号 1005-9903（2023）05-0104-10doi 10.13422/ki.syfjx.20221907 网络出版地址 https:/ 2022-10-19 11:55:09Effect of Shenling Baizhusan on Alcoholic Liver Injury in Rats by Regulating Ferroptosis Based on Nrf2 Signaling PathwayZHOU Xiangyu1，ZHOU Sufang1，2*，LI Yuru1，CAI Shiqin1，LIAO Jiajia1，YE Zuoyu1（1.The First Clinical Medical College of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine（TCM），Guiyang 550002，China；2.First Affiliated Hospital of Guizhou University of TCM，Guiyang 550001，China）收稿日期 2022-07-31基金项目 国家自然科学基金项目（81460683）；贵州省科技项目计划项目（黔科合支撑 2021 一般 015）第一作者 周相宇，在读硕士，从事中医药防治肝病、脾胃病研究，E-mail：通信作者 *周素芳，博士，主任医师，教授，博士生导师，从事中医药调节肠道微生态及保护肠黏膜、肝脾相关理论在消化系统运用的基础及临床研究，E-mail： 药理 104第 29 卷第 5 期2023年 3 月中国实验方剂学杂志Chinese Journal of Experimental Traditional Medical FormulaeVol.29，No.5Mar.，2023Abstract Objective：To observe the effect of Shenling Baizhusan on the intervention of the nuclear factor erythroid 2-related factor 2（Nrf2）signaling pathway by regulating ferroptosis in rats with alcoholic liver injury.Method：Forty SD rats were randomly divided into model group，polyene phosphatidylcholine group，and high，medium，and low-dose Shenling Baizhusan groups，with 8 rats in each group.Another 8 SD rats were taken as blank group.The model group，polyene phosphatidylcholine group，high，medium，and low-dose Shenling Baizhusan groups were given 10 mL kg-1 liquor by gavage for modeling，and the blank group was given equal volume of distilled water by gavage.After 4 h of daily alcoholic administration，143.64 mg kg-1 of polyene phosphatidylcholine group was given to the polyene phosphatidylcholine group，15，7.5，3.75 mg kg-1 of Shenling Baizhusan were given to Shenling Baizhusan high，medium，and low-dose groups，respectively，and the blank group and the model group were given equal volume of distilled water.The gavage lasted for 6 weeks.The levels of alanine aminotransferase（ALT），aspartate aminotransferase（AST），glutamyl transpeptidase（GGT），total cholesterol（TC），and triglyceride（TG）were detected by automatic biochemical analyzer.The levels of tumor necrosis factor-（TNF-）and interleukin-（IL-）were detected by the enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.The levels of lipopolysaccharide（LPS），malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD），glutathione（GSH），and Fe+were detected by biochemical assay.The pathological changes in the liver were observed by hematoxylin-eosin（HE）staining and oil red O staining.The mRNA expression levels of Nrf2，heme oxygenase-1（HO-1），glutathione peroxidase 4（GPX4），ferritin heavy polypeptide 1（FTH1），and nuclear factor-B（NF-B）were detected by Real-time polymerase chain reaction（Real-time PCR）.The protein expression levels of Nrf2，HO-1，GPX4，FTH1，p65，and phosphorylation（p）-p65 were detected by Western blot.Result：As compared with the blank group，the levels of liver function（ALT，AST，and GGT）and blood lipids（TC and TG）in the model group were significantly increased（P0.05）.The liver showed obvious steatosis，with a large number of fat deposition，the oxidative stress and inflammatory factors were significantly increased（P0.05），and the level of Fe+was significantly increased in model group（P0.05）.The protein expression levels of Nrf2，HO-1，GPX4，and FTH1 was significantly down-regulated（P0.05），and those of p65 and p-p65 was significantly up-regulated in the model group（P0.05）.The mRNA expression levels of Nrf2，HO-1，GPX4，and FTH1 were significantly down-regulated（P0.05），and the mRNA expression level of NF-B was significantly up