阿托伐他汀对人舌鳞癌CAL...、凋亡和迁移的影响及其机制_王开.pdf

第 49 卷 第 2 期2023年 3 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.2Mar.2023DOI：10.13481/j.1671587X.20230208阿托伐他汀对人舌鳞癌 CAL-27细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制王开,黄汉（锦州医科大学附属第一医院口腔颌面外科，辽宁 锦州 121000）摘要 目的目的：探讨阿托伐他汀（ATO）对人舌鳞癌 CAL-27细胞体外增殖、凋亡和迁移的影响，阐明其作用机制。方法方法：CAL-27细胞分为对照组和 1、5、10、20及 40 molL1 ATO 组。ATO 作用后，CCK-8 法检测各组 CAL-27 细胞存活率，克隆形成实验检测各组 CAL-27 细胞克隆形成率，Hoechst33342 荧光染色和流式细胞术检测各组 CAL-27 细胞凋亡率，细胞划痕实验检测各组 CAL-27细胞迁移率，Western blotting 法检测各组 CAL-27 细胞中 P53、P21、B 细胞淋巴瘤 2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、Caspase-9和周期蛋白依赖性激酶 6（CDK6）蛋白表达水平。结果结果：培养 24和 48 h后，与对照组比较，不同浓度 ATO 组细胞存活率明显降低（P0.05）。培养 48 h后，与对照组比较，不同浓度 ATO 组细胞克隆形成率（P0.01）和细胞迁移率（P0.05）明显降低，40 molL1 ATO 组细胞基本丧失克隆和迁移能力；不同浓度ATO 组细胞凋亡率明显升高（P0.05），其中 40 molL1 ATO 组细胞几乎全部凋亡。培养 48 h后，与对照组比较，不同浓度ATO组细胞均出现不同程度细胞核浓染或碎片化，20和 40 molL1 ATO 组细胞全部呈现碎片化。与对照组比较，培养 48 h 后，不同浓度 ATO 组细胞中 P53、P21、Bax、Caspase-3和 Caspase-9蛋白表达水平升高（P0.01），CDK6和 Bcl-2蛋白表达水平降低（P0.05或P0.01）。结论结论：ATO通过 P53/P21/CDK6通路抑制 CAL-27细胞增殖及迁移并促进凋亡。关键词 舌鳞状细胞癌；阿托伐他汀；细胞增殖；细胞凋亡；细胞迁移中图分类号 R739.86;R966文献标志码 AEffects of atorvastatin on proliferation,apoptosis,and migration of human tongue squamous cell carcinoma CAL-27 cells and their mechanismsWANG Kai,HUANG Han（Department of Oral Maxillofacial Surgery，First Affiliated Hospital，Jinzhou Medical University，Jinzhou 121000，China）ABSTRACT Objective：To investigate the effects of atorvastatin（ATO）on the proliferation，apoptosis，and migration of the human tongue squamous cell carcinoma CAL-27 cells in vitro，and to clarify their mechanisms.Methods：The CAL-27 cells were divided into control group and 1，5，10，20，and 40 molL1 ATO groups.After treated with ATO，CCK-8 assay was used to detect the survival rates of the CAL-27 cells in various groups，clone formation assay was used to detect the clone formation rates of the CAL-27 文章编号 1671587X(2023)02032408收稿日期 20220512基金项目 辽宁省科技厅自然科学基金资助项目（20180550549）作者简介 王 开（1997），女，辽宁省朝阳市人，在读硕士研究生，主要从事口腔颌面部肿瘤基础方面的研究。通信作者 黄汉，副主任医师，副教授，硕士研究生导师（E-mail：）324王开，等.阿托伐他汀对人舌鳞癌 CAL27细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制cells in various groups；Hoechst33342 fluorescence staining and flow cytometry were used to detect the apoptotic rates of the CAL-27 cells in various groups；cell scratch test was used to detect the migration rates the CAL-27 cells in various groups；Western blotting method was used to detect the expression levels of P53，P21，B-cell lymphoma-2（Bcl-2），Bcl-2 associated X protein（Bax），cysteinyl aspartate specific proteinase（Caspase）-3，Caspase-9，and cyclin-dependent kinase 6（CDK6）proteins in the CAL-27 cells in various groups.Results：Compared with control group，the survival rates of the cells in different concentrations of ATO groups were decreased after cutured for 24 and 48 h（P0.05）.After cultured for 48 h，compared with control group，the clone formation rates（P0.01）and migration rates（P0.05）of the cells in different concentrations of ATO groups were decreased，and the cells in 40 molL1 ATO group basically lost the abilities of cloning and migration；the apoptotic rates in different concentrations of ATO groups were increased（P0.05），and almost all the cells in 40 molL1ATO group were apoptotic.After cultured for 48 h，compared with control group，the cells in different concentrations of ATO groups showed nuclear staining or fragmentation，and all the cells in 20 and 40 mol L1 ATO groups were fragmented.Compared with control group，after cultured for 48 h，the expression levels of P53，P21，Bax，Caspase-3，and Caspase-9 proteins in the cells in different concentrations of ATO groups were increased（P0.01），and the expression levels of CDK6 and Bcl-2 proteins were decreased（P0.05 or P0.01）.Conclusion：ATO inhibits the proliferation and migration of the CAL-27 cells and promotes the apoptosis of the CAL-27 cells through P53/P21/CDK6 pathway.KEYWORDS Tongue squamous cell carcinoma；Atorvastatin；Cell proliferation；Apoptosis；Cell migration舌鳞癌的发生率在口腔癌中一直位于首位并呈持续升高趋势 1，且近年来发展趋向年轻化2，高恶性、高复发率、高淋巴结转移率和低存活率是舌鳞癌的主要特征 3。目前，手术联合术后放化疗是舌鳞癌的首要治疗方法，但由于其部位特殊、手术难度大、放化疗不良反应大且易复发，患者预后并不十分理想。因此，探讨关于舌鳞癌的有效靶向治疗药物具有重要意义。他汀类药物是一种主要针对甲羟戊酸途径（mevalonate pathway，MVP）的限速酶3-羟 甲 基 戊 二 醇 辅 酶 A 还 原 酶（3-hydroxymethylpentanediol coenzyme A reductase，HMGCR）的抑制剂，阿托伐他汀（atorvastatin，ATO）是其最常见的一种，临床上常用于治疗高脂血症和动脉粥样硬化等心血管循环系统疾病 4。近年来多项研究5-10表明：ATO 在肿瘤的发生发展过程中具有抑制作用，且与肿瘤患者的生存率有密切关联，可调控前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和非小细胞肺癌等多种癌症细胞的表达。但目前，关于 ATO 在舌鳞癌中所发挥的作用及其机制的 报 道 较 少，本 研 究 通 过 探 讨 ATO 对 舌 鳞 癌CAL-27 细胞增殖、细胞凋亡和细胞迁移的影响及其可能的作用机制，为临床舌鳞癌的治疗及提高舌鳞癌患者的生存 率提 供必 要的 理论 支持 和实 验基础。1 材料与方法 1.1 细 胞细 胞、主 要 试 剂 和 仪 器主 要 试 剂 和 仪 器 人 舌 鳞 癌 细 胞 株CAL-27 购于中科院上海细胞库。ATO（药物浓度 98%）购于北京索莱宝生物科技有限公司，DMEM-高糖培养基和双抗购于美国 Hyclone公司，胎牛血清购于美国 Gemini 公司，CCK-8 检测试剂盒、4%甲 醛 固 定 液、结 晶 紫 染 色 液、Hoechst33342 染色液、BCA 蛋白定量试剂盒和超敏 ECL 化学试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司，Annexin-FITC/7-AAD 凋亡检测试剂盒购于北京四正柏生物科技有限公司，蛋白 Marker购于美国 Thermo 科技有限公司，-actin 抗体和P53 抗体购于南京巴傲德生物科技有限公司，P21抗 体 和 周 期 蛋 白 依 赖 性 激 酶 6（cyclin-dependent kinase 6，CDK6）抗体购于北京博奥森生物技术有限 公 司，B 细 胞 淋 巴 瘤 2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）抗体、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）抗体、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白 水 解 酶（cysteinyl aspartate specific