第38卷第1期大连海洋大学学报Vol.38No.12023年2月JOURNALOFDALIANOCEANUNIVERSITYFeb.2023DOI:10.16535/j.cnki.dlhyxb.2022-086文章编号:2095-1388(2023)01-0076-10斑马鱼Notch信号通路配体基因delta-like4对smad基因的调控作用程瑶1,2,王子睿1,2,周泽斌1,2,张鹏1,2,邱军强2,李伟明3,张庆华1,2∗(1.上海海洋大学国家海洋生物科学国际联合研究中心,上海201306;2.上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海201306;3.密歇根州立大学渔业与野生生物系,美国东兰辛48824)摘要:为研究斑马鱼(Daniorerio)的Notch信号通路配体delta-like4(dll4)对smad基因(smad1和smad7)的调控作用,利用qRT-PCR方法检测受精后2d(daypostfertilization,dpf)的斑马鱼dll4纯合突变体smad家族中smad1和smad7的表达变化,利用生物信息学软件预测smad1和smad7启动子序列的转录结合位点和CpG岛;采用同源重组的方法,构建p3×Flag-CMV-dll4真核表达载体及pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc报告基因载体,并通过双荧光素酶试验检测dll4对smad1和smad7的调控活性;分别转染两种启动子报告基因载体到HEK293T细胞,共转染启动子报告基因载体与真核表达载体到HEK293T细胞。结果表明:dll4纯合突变体斑马鱼中smad1和smad7表达量均显著下调(P<0.0001);两种基因启动子均包含HNF-3、GATA-1和Oct-1等转录因子结合位点,只有smad7启动子存在CpG岛;报告基因pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc的活性分别为对照组的7.3倍和142.7倍,两种报告基因与p3×Flag-CMV-dll4表达载体共转后,转录活性均升高,分别为对照组的2.8倍和2.2倍,说明p3×Flag-CMV-dll4可以促进pGL3-smad1-Luc和pGL3-smad7-Luc的转录表达活性。研究表明,斑马鱼Notch信号通路配体基因dll4可通过smad基因家族在血管生成中发挥调控作用,为损伤血管的修复和肿瘤血管生成提供特异的生物学靶点。关键词:斑马鱼;Notch信号通路配体;delta-like4;smad1;smad7;双荧光素酶报告基因中图分类号:S917.4;Q71文献标志码:ANotch信号通路在胚胎血管形成中发挥了重要作用[1]。Delta-like4(Dll4)是Notch信号通路的一个重要配体,对正常的血管发育至关重要[2]。Smad(smallmothersagainstdecapentaplegic)蛋白家族在脊椎动物的早期发育、原肠形成、造血和背腹轴形成中发挥了重要作用[3],是转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)家族信号传导的关键下游介质。其功能除调节TGF-β、骨形态发生蛋白(bonemorphogenicproteins,BMPs)、激活素或抑制...
