热带作物学报2023,44(2):254-263ChineseJournalofTropicalCrops收稿日期2022-05-10；修回日期2022-06-27基金项目海南省自然科学基金项目（No.321QN300）；广东省自然科学基金项目（No.2021A151501242）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（No.1630062022002）。作者简介杨倩（1985—），女，硕士，助理研究员，研究方向：作物资源与育种。*通信作者（Correspondingauthor）：曾辉（ZENGHui），E-mail：zenghui@catas.cn；杨子平（YANGZiping），E-mail：yangziping302@163.com。澳洲坚果光壳种MiSAD的克隆与表达杨倩1,2,3，杨子平1,2,3*，邹明宏1，宋喜梅1，万继锋1，陈菁1，罗炼芳1，曾辉1*1.中国热带农业科学院南亚热带作物研究所，广东湛江524091；2.农业农村部热带果树生物学重点实验室，广东湛江524091；3.海南省热带作物营养重点实验室，广东湛江524091摘要：澳洲坚果果仁中含有丰富的不饱和脂肪酸（unsaturatedfattyacid,UFA），其不饱和脂肪酸生物合成的分子机制还有待进一步解析。植物硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶（SAD）是脂肪酸生物合成途径中形成不饱和脂肪酸的关键酶。本研究以澳洲坚果（Macadamiaintegrifolia）光壳种为对象，通过PCR技术克隆获得澳洲坚果硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因（MiSAD），并对结构功能和表达模式进行了初步分析。结果显示，克隆获得5923bp的MiSAD基因组DNA序列，该基因由3个外显子2个内含子组成，包含1191bp的编码框，与公布的粗壳种MtSAD序列高度一致；编码396个氨基酸；MiSAD分子量为45.22kDa，等电点为5.93，属于酰基-ACP脱饱和酶，是位于叶绿体或质体基质中的水溶性酶；高度保守的区域存在形成酶活位点的2个E-X-X-H二铁原子中心基序，N端和C端氨基酸序列差异较大；二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主；三级结构预测中存在形成脂酰链结合部位的螺旋-转角-螺旋（HTH）；与蒂罗花的同源性最高达94.2%，与其他物种的SAD同源性也都在80%以上；分子进化树显示与荷花进化关系较近，属于植物脂酰-ACP脱饱和酶。荧光定量PCR数据显示MiSAD在根、茎、叶、花、果中均有表达，其中叶片和果实中表达量较高，果实中的MiSAD表达量在开花后第100天左右达到最高，之后随着果实的成熟逐渐下降，呈现正态分布趋势。该研究为深入研究MiSAD在澳洲坚果果仁中不饱和脂肪酸生物合成的作用机制奠定基础。关键词：澳洲坚果；硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶；基因克隆；表达分析中图分类号：S664.9文献标识码：ACloningand...
