PLOD1在结直肠癌组织中的表达及意义_何平.pdf

性 段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南中华心血管病杂志，（）：中华医学会心血管病学分会介入心脏病学组，中国医师协会心血管内科医师分会血栓防治专业委员会，中华心血管病杂志编辑委员会中国经皮冠状动脉介入治疗指南（）中华心血管病杂志，（）：中国医师协会急诊医师分会，国家卫健委能力建设与继续教育中心急诊学专家委员会，中国医疗保健国际交流促进会急诊急救分会 急性冠脉综合征急诊快速诊治指南（）中华急诊医学杂志，（）：中国血栓性疾病防治指南 专家委员会 中国血栓性疾病防治指南中华医学杂志，（）：，（）：马剑英，常书福，陈章炜，等急性心肌梗死合并心肌桥冠脉造影分析 中华急诊医学杂志，（）：范胜坤多层螺旋 冠状动脉成像在急性心肌梗死介入诊疗中疗效评估及术后左心室重构的诊断价值分析 实用医院临床杂志，（）：赵良桥，卢佳佳，黄汉钦，等 心电图联合冠状动脉 血管造影在冠心病诊断及罪犯血管定位中的应用研究中国 和 杂志，（）：，：，（）：，：，（）：冯长超，付敏 血管造影术在评估冠脉狭窄程度及其与斑块钙化程度关系中的应用中国临床研究，（）：杨亚攀，董淑娟，李静超，等不同类型急性冠状动脉综合征患者罪犯病变的形态学特点中国动脉硬化杂志，（）：，（）：（收稿日期：）基金项目：吉林省财政厅省直卫生专项项目（）通讯作者文章编号：（）在结直肠癌组织中的表达及意义何平，何成彦，郑岩，康云霞，孙景春（吉林大学中日联谊医院 检验科，吉林 长春 ）近年来结直肠癌已成为新发癌症病例发病率第三高和癌症死亡原因第三高的原因，而中国是结直肠癌年均新发病例数和死亡病例数第一的国家。（前胶原赖氨酸氧代戊二酸双加氧酶）是编码赖氨酸羟化酶 的基因，该基因存在于染色体 ，包含 个外显子。赖氨酰羟化酶是一种膜结合的同源二聚体蛋白，定位于内质网的蓄水池，可以催化赖氨酰残基羟基化，所得的羟赖氨酸基团是胶原蛋白中碳水化合物的附着位点，对分子间交联的稳定性至关重要。本实验通过二维色谱质谱联用技术以及免疫印迹试验，分析 在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达情况，旨在探究其与结直肠癌发生、发展之间的关系。材料与方法 一般资料本实验选取的组织为在吉林大学中日联谊医院接受手术治疗的结直肠癌患者组织 例（术前未经任何治疗且经病理诊断为结直肠腺癌）。取样位置为：结直肠癌组织及与之对照的癌组织上段相距 的癌旁组织。取样后需立刻用生理盐水冲洗处理，储存于 液氮以便后续实验。研究经医院伦理委员会批准，所有患者及家属知情同意。主要试剂与仪器 质谱仪，液相色谱仪，蛋白试剂盒（品 牌），酶，酶，裂 解 液，胰酶，。方法 提取总蛋白及浓度测定提前备好裂解液，酶和 酶。组织研磨充分经 冲洗后，中国实验诊断学 年月第 卷第期于冰 上 加 入 裂 解 液 振 荡 混 匀。再 于 常 温 下 加 入 酶和 酶，然后低温离心机 离心 ，取上清即为总蛋白（冰箱冻存）。蛋白定量试剂盒测浓度，并将测得结果绘制成标准曲线。制备蛋白水解多肽混合物取出冻存蛋白于室温缓慢融化，加 （倍蛋白体积）溶解稀释蛋白，加入适量体积的 （）来调整浓度，随后避光 反应小时。反应结束调整为室温避光条件下，加入适量（）终浓度定至 后继续反应 ，最后加入胰酶（比例）水浴箱过夜。二维色谱质谱联用技术分析取上一步骤获得的蛋白制品，经 处理后取样 上样，经 离子阱质谱仪处理分析即可得到质谱图。免疫印迹试验该实验测定新鲜结直肠癌组织及配对癌旁组织中目的蛋白 的表达情况，是上一步骤 试验的验证性试验。本试验所用抗体，一抗、二抗、内参均为 品牌抗体。统计学方法实验结果均输入 软件进行统计学分析处理，选择 方法，时差异有统计学意义。结果 二维色谱与质谱联用技术分析结果本实验中蛋白的差异表达用蛋白丰度表示，蛋白有差异表达的标准是蛋白图谱数比值和差值分别和。据此标准，检测到上调表达蛋白 个，下调表达蛋白个，是上调蛋白中的一个，其质谱图结果如图所示。免疫印迹试验结果免疫印迹试验结果见图，可见 在癌组织中的表达量远高于癌旁组织，差异表达明显。图 质谱图结果图 免疫印迹结果讨论近年来结直肠癌的发病人群有年轻化的趋势，早发性结肠癌（年龄 岁）的发病率近 年来几乎翻了一翻，预计到 年将占结直肠癌总发病人数的，有研究建议对结直肠癌的筛查可以从 岁开始。诊断标志物用于早期发现疾病和对疾病的风险分层，且可能会延长患者的总生存期。本实验采用的 技术不仅具有定量或半定量鉴定蛋白质的能力，而且还具有确定蛋白质亚型和特定序列变体（即蛋白质形式）的能力。家 族 已 鉴 定 出 三 个 （，），主要作用是催化赖氨酸的羟化反应，、的羟基化部位是胶原的三螺旋结构，而 羟化胶原的末端。赖氨酸残基的羟化作用参与胶原合成过程，提供碳水化合物的附着位点，增强 了 胶 原 纤 维 的 抗 拉 强 度 和 机 械 稳 定 性。在人体中组织特异性低，在许多类型的癌症中都能检测到 表达增加。实 验发现 在骨肉瘤（）组织和细胞中上调，促进了肿瘤的发生和转移；在 组织中的下调，与 的表达呈负相关，是 的直接调节基因。通过 实验和菌落形 ，成测定发现 的高表达促进胶质瘤细胞的增殖和集落形成，且确定了 是 的上游调控因子。发现 可以通过 信号促进胶质母细胞瘤（）的恶性表型，并且缺氧可以增强这种作用，证明 的过表达可能是 侵袭性和间充质亚型（）转化增强的重要因素。还有研究表明 在胃癌中高表达，而甲基化基团对 有负向调控作用，通 过 调 节 胃 癌 中 的 信号通路来促进细胞生长和有氧糖酵解。通 过 细 胞 功 能 实 验、凋 亡 实 验 证 明 上调促进了膀胱癌的发生发展，又通过统计分析发现 高表达是预后不良的独立预后因素。利用数据库筛选出糖酵解基因集，确定该基因特征是独立的肾癌预后因子；通过 和 实验，发现 、的沉默抑制肾癌细胞的增殖和迁移。建立卵巢癌小 鼠模型，提取 肿 瘤进 行免 疫 组 化实验，发现 （，）在 卵 巢 癌 组 织 中 均 高 表达。本实验通过 发现 在结直肠癌中的高表达，并在组织层面用免疫印迹试验对其结果加以验证，进一步确定 表达调控的分子机制可能会为结直肠癌提供潜在的治疗靶点。参考文献：，：，（）：曾嘉琪，王丽茹，邢杰，等基因突变在结直肠癌诊疗及预后中的研究进展生物信息学，（）：，（）：，：（），（）：，：，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（），（）：，：，（）：，（）：，（）：（收稿日期：）中国实验诊断学 年月第 卷第期