miRNA-21在胸腔积液中表达及临床意义_李昱.pdf

基金项目蚌埠医学院自然科学基金(BYKY2019266ZD)作者单位1 安徽省蚌埠市第三人民医院 呼吸内科，233000;2 蚌埠医学院第一附属医院 神经内科，安徽 蚌埠 233000 作者简介李昱(1986 )，男，主治医师，硕士。DOI:10 14126/j cnki 1008 7044 2023 02 004论著miNA 21 在胸腔积液中表达及临床意义李昱1，吴伟莉2，钱朝霞1 摘要 目的:了解 miNA-21 在胸腔积液中的表达及临床意义。方法:选取蚌埠市第三人民医院呼吸内科住院治疗的 60 例胸腔积液患者，其中恶性胸腔积液 45 例(肺鳞癌、肺腺癌、小细胞肺癌各15 例)、良性胸腔积液15 例。每例取13 mL 新鲜胸腔积液提取 miNA，采用 T-PC 法检测各组胸腔积液中 miNA-21 的相对表达量，采用 OC 曲线评价 miNA-21 对恶性胸腔积液诊断效能。结果:恶性组胸腔积液中 miNA-21 表达水平(7.46 1.16)高于良性组(6.16 0.60)，差异有统计学意义(P 0.05)。肺鳞癌组(8.15 0.74)、肺腺癌组(8.08 0.78)、小细胞肺癌组(8.10 0.66)与良性组(6.16 0.60)比较，差异均有统计学意义(P 0.05)，恶性胸腔积液各组之间两两比较差异无统计学意义(P 0.05)。OC 分析结果显示，miNA-21 诊断恶性胸腔积液，曲线下面积 0.977，灵敏度为 87.8%，特异度为 86.70%。结论:miNA-21 高表达在恶性胸腔积液的诊断方面具有一定的诊断效能，可能成为一种有效的诊断标志物。关键词 胸腔积液;miNA-21;T-PC 中图分类号 561.3 文献标识码 A 文章编号 1008-7044(2023)02-0124-04Expression of miNA 21 in pleural effusion and its clinical significanceLI Yu，WU Weili，QIAN Zhaoxia(espiratory Depart-ment，Bengbu Third Peoples Hospital，Anhui 233000，China)【Abstract】Objective:To investigate the expression and clinical significance of miNA-21 in pleural effusion Methods:A total of60 patients with pleural effusion admitted to the respiratory department of a hospital in Bengbu city were selected，including 45 cases ofmalignant pleural effusion(15 cases of lung squamous cell carcinoma，15 cases of lung adenocarcinoma，and 15 cases of lung smallcell lung cancer)and 15 cases of benign pleural effusion MiNA was extracted from 13ml fresh pleural effusion of each patient Therelative expression of miNA-21 in pleural effusion of each group was detected by T-PC，and the diagnostic accuracy was evaluatedby OC curve esults:The expression level of miNA-21 in pleural effusion of the malignant group(7 46 1 16)was significantlyhigher than that of the benign group(6 16 0 60)，with statistical significance(P 0 05)When compared with the benign group(6 16 0 60)，The differences of expression levels of the lung squamous cell carcinoma group(8 15 0 74)，the lung adenocarci-noma group(8 08 0 78)，and the lung small cell carcinoma group(8 10 0 66)were statistically significant(P 0 05);Pair-wise comparison showed no significant difference among groups of malignant pleural effusion(P 0 05)The area under OC curvewas 0 977，sensitivity 87 8%，specificity 86 70%，indicating that miNA-21 had high diagnostic accuracy for malignant pleural effu-sion Conclusion:MiNA-21 has high accuracy in diagnosis of malignant pleural effusion and may be an effective diagnostic marker【Key words】Pleural effusion;MiNA-21;T-PC胸腔积液是临床上常见的由多种病因引起的胸膜腔内大量液体形成而导致的疾病，分为良性及恶性。恶性胸腔积液主要见于肺癌患者，约 57%的肺癌患者出现胸膜转移，形成恶性胸腔积液1。肺癌患者出现恶性胸腔积液往往预示肿瘤分期较晚及预后较差2，尽管目前治疗手段多样，包括全身化疗，局部胸腔灌注，靶向治疗等，但是其五年生存率仍只有 10%15%3。因此，明确胸腔积液的良恶性对患者至关重要。现阶段恶性胸腔积液常用胸水脱落细胞学诊断，由于单次送检诊断率较低，往往需多次送检提高诊断率，但是敏感度不超过 60%4。胸腔镜胸膜活检无论诊断性还是特异性均较高，但其属于有创操作，临床开展受限。目前，高效、安全、无创的检查手段在恶性肿瘤患者的诊断和预后方面逐渐受到重视，而微小 NA(microNA，miNA)检测正是一种安全、方便、高效的诊断方法。miNA-21 通过调节靶基因对细胞增殖、迁徙和侵袭能力进行调控，成为癌症诊断和预后的标志物5。本研究使用 T-PC技术对胸腔积液中 miNA-21 的表达情况进行检测，探索 miNA-21 在不同病理类型胸腔积液中的表达及临床意义。1资料与方法1 1一般资料选取 2019 年 10 月2022 年 5 月蚌埠市第三人民医院呼吸内科住院的胸腔积液患者421淮海医药2023 年 3 月 第 41 卷 第 2 期J Huaihai Med，March 2023，Vol.41，No.2共 60 例为研究对象，入组标准:(1)通过影像学或胸腔超声检查诊断为胸腔积液的患者;(2)良性胸腔积液患者;(3)依据组织学、细胞学诊断为肺鳞癌、肺腺癌或小细胞肺癌的患者。排除标准:(1)精神障碍或神志不清、言语交流不清的患者;(2)合并有严重心脑血管、肝、肾疾病及内分泌系统疾病的患者;(3)肺外恶性肿瘤造成的转移性胸腔积液患者;(4)具有血液系统疾病的患者。所有患者依据病理类型分为肺鳞癌组、肺腺癌组、小细胞肺癌组及良性组，每组 15 例，其中肺鳞癌组男 8 例，女 7 例;年龄55 82(72.93 7.03)岁。肺腺癌组男 8 例，女 7例;年龄 62 80(73.40 5.94)岁。小细胞肺癌组男 7 例，女 8 例;年龄 48 79(70.93 7.94)岁。良性组男 8 例，女 7 例;年龄 26 78(66.87 13.73)岁。各组患者在性别、年龄方面比较差异无统计学意义(P 0.05)，具有可比性。本研究通过医院伦理委员会审批，所有患者均知情同意。1 2方法12 1标本收集与储存选取经胸水脱落细胞学或组织病理证实的肺鳞癌、肺腺癌、小细胞肺癌及良性胸腔积液患者，经 B 超定位胸腔穿刺引流胸腔积液，每例取 13 mL 新鲜胸水于 15 mL 去核酸酶无菌离心管中，4，3 000 转/分，充分离心 10 min，取上层 10 mL，每 1 mL 放置于去核酸酶灭菌管中，于 70低温冰箱保存待测。1 2 2NA 提取及 cDNA 合成采用德国 BioE-cho 核酸提取试剂盒，严格按照说明书操作步骤提取胸腔积液 miNA，取提取的 NA 2 L 和加样缓冲液按 1 5 的比例混匀，恒压电泳 170V，溴酷蓝前沿迁移至凝胶总长 2/3 处停止电泳，在凝胶成像系统下检测。赛默飞的反转录试剂盒反转录成 cD-NA，逆转录反应体系:选取 miNA1 g，NA5 T缓冲液 5 g，10 mmol/L dNTP0.75 L，40 U/LNA 酶抑制剂 0.25 L，2 000 U/L 逆转录酶 0.2L，加等离子水至 20 L。42 温育 50 min，75 环境下 15 min 逆转录成 cDNA 放置 20 保存备用。1 2 3T-PC 检测采用 T-PC 相对定量法检测胸腔积液 miNA-21 相对表达量，参照 miNAeal-Time PC 使用说明书进行扩增反应，将 T 反应物混合在 T-qPC 仪器中，包括 Taq Man Uni-versalMaster Mix 10 L，TaqmanMicroNA Assay1L，无菌注射用水 4 L，以无菌注射用水 1 1 稀释后的反转录产物 5 L。使用以下反应条件进行:94 预变性 3 min，94 变性 20 s、60 退火 20 s、72延伸 40 s，共 40 个循 环。依据各样品的 T-qPC 曲线计算得到 ct 值，以 U6NA 作为内参。采用 2 Ct法计算胸腔积液 miNA-21 的相对表达量。ct=miNA-21 的 ct 值与内参 U6NA 的 ct 的差值。1 3统计学方法使用 SPSS 17.0 统计学软件分析数据，计量资料用?x s 表示，采用 t 检验，多组间比较采用单因素方差分析，组内比较应用 LSD 法，诊断效能采用受试者工作特征曲线(OC)下面积(AUC)进行评价，以 P 0.05 表示差异有统计学意义。2结果2 1良恶性腔积液中 miNA-21 的表达情况恶性组胸腔积液中 miNA-21 相对表达量(7.46 1.16)高于良性组(6.16 0.60)，差异有统计学意义(t=5.619，P 0.001)，见图 1。图 1良恶性腔积液中 miNA-21 相对表达量2 2不同病理胸腔积液中 miNA-21 的表达情况肺鳞癌组、肺腺癌组、小细胞肺癌组胸腔积液的miNA-21 相对表达量均高于良性组，差异有统计学意义(P 0.05);恶性胸腔积液各组之间两两比较差异无统计学意义(P 0.05)。见表 1。表 1不同病理胸腔积液中 miNA-21 相对表达量(?x s)组别例数miNA-21 相对表达量肺鳞癌组15815 074肺腺癌15808 078小细胞肺癌组15810 066良性组15616 060F 值2920P 值0001注:肺鳞癌组与肺腺癌组，P=0.765;肺鳞癌组与小细胞肺癌组，P=0.841;肺腺癌组与小细胞肺癌组，P=0.921。521淮海医药2023 年 3 月 第 41 卷 第 2 期J Huaihai Med，March 2023，Vol.41，No.22 3OC 曲线评