中国牛业科学2023，49(1):25-29ChinaCattleScience科学试验CAＲT基因启动子双荧光素酶重组载体构建高艳萍1，任静2，李鹏飞2*(1．山西省忻州市繁峙县农业农村局，山西繁峙034300;2．山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801)摘要:可卡因—苯丙胺调节转录肽(cocaine-andamphetamineregulatedtranscriptpeptides，CAＲT)是一种内源性神经肽，广泛分布于中枢神经和外周神经系统。CAＲT具有多种不同的生理功能，在牛繁殖机能研究中发现，CAＲT还可以通过影响雌激素分泌抑制卵泡发育。这一发现为深入分析牛卵泡闭锁以及提高母畜繁殖率提供理论依据。然而CAＲT基因转录调控机制尚不明确。研究利用pGL3系列萤火虫荧光素酶表达载体，MluI、XhoI双酶切割牛CAＲT基因启动子－475bp～+22bp区域，成功构建重组质粒，转染293T细胞，检测相对荧光活性，为后续筛选CAＲT基因核心启动子活性片段创造条件，进而为CAＲT转录调控分子机制的探究奠定基础。关键词:CAＲT;双荧光素酶报告基因;启动子;转录调控中图分类号:Q782文献标识码:A文章编号:1001-9111(2023)01-0025-05收稿日期:2022-10-14修回日期:2022-12-10基金项目:山西省应用基础研究计划面上项目(20210302123380);山西农业大学校地合作项目(2021HX23，2022HX010);山西省现代农业产业技术体系建设专项作者简介:高艳萍(1990—)，女，本科，农艺师，主要从事农业服务工作。*通讯作者:李鹏飞(1978—)，男，博士，教授，主要从事动物生殖生理方面的研究。可卡因—苯丙胺调节转录肽(cocaine-andam-phetamineregulatedtranscriptpeptides，CAＲT)是一种广泛分布于中枢神经系统与外周神经系统的内源性神经肽。目前鼠、牛、绵羊和人的CAＲT基因已经研究的较为深入，它们均由3个外显子和2个内含子组成，CAＲT基因在各物种间高度保守。牛的CAＲT基因与大鼠的CAＲT基因核苷酸序列同源性为85%，氨基酸相似度达86%;而与人的CAＲT基因度为90%，氨基酸序列同源性更是高达97%［1］。CAＲT参与摄食和体重调节、激素内分泌调节、感觉处理以及药物成瘾等相关生理功能;课题组前期研究发现，CAＲT作为一种下丘脑分泌的神经肽，通过抑制雌激素分泌，在牛卵泡发育中发挥重要负调控作用。而转录是基因表达核心步骤，ＲNA聚合酶识别启动子序列并与启动子、DNA双链特异性结合，启动子附近的DNA双链解旋并解链，促使底物核糖核苷酸与模板DNA碱基互补配对;之后进行延伸，直到转录终止位点转录终止［2］。转录的起始是基因表达的重要阶段，Ｒ...
