2020—2021年珠海地区淋球菌药物敏感性分析_沈守星.pdf

作者单位 珠海市第三人民医院，广东 珠海 519000 通信作者 沈守星，E-mail:649708763 qq com 中图分类号 759 2 文献标识码 A 文章编号 2096 4382(2023)01 0129 042023 年 2 月第 40 卷第 1 期Feb.2023，Vol.40，No.1Dermatology Bulletin129http:/pfxbxzz paperopen com性传播疾病20202021 年珠海地区淋球菌药物敏感性分析沈守星，魏秋姣，方舒 摘要 目的监测珠海地区淋球菌对 7 种抗菌药物的药物敏感性情况。方法两年间共收集淋球菌株 216 株，采用改良微量稀释法测定淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、头孢克肟和阿奇霉素最低抑菌浓度(MIC)，用纸片酸度法测定产-内酰胺酶淋球菌(PPNG)。结果青霉素、四环素、环丙沙星和阿奇霉素总耐药率分别为 72.22%(156/216)、85.65%(185/216)、97.22%(210/216)和6.94%(15/216)。未检出对大观霉素、头孢曲松和头孢克肟耐药菌株，但对头孢曲松和头孢克肟总低敏率分别为 4.17%(9/216)和16.67%(36/216)。结论珠海地区淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星处于高耐药率状态，头孢曲松、头孢克肟和大观霉素仍可推荐为治疗淋病的首选药物，但需定期监测其耐药性变化。关键词 淋球菌;耐药性监测;最低抑菌浓度;PPNG;TNGAnalysis of Neisseria Gonorrhoeae Antimicrobial esistance，Zhuhai area，China，20202021SHEN Shouxing，WEI Qiujiao，FANG Shu(Laboratory of the Third Peoples Hospital of Zhuhai City，Zhuhai 528447，China)Corresponding author SHEN Shouxing，E-mail:649708763 qq com Abstract ObjectiveTo investigate the antimicrobial resistance of Neisseria gonorrhoeae to 7antimi-crobial agents MethodsA total of 216 gonococcal clinical isolates werecollected in two years.An improved microdilution method was performed to determinetheminimuminhibitoryconcentration(MIC)ofpenicillin、Tetracycline、ciprofloxacin、spectinomycin、ceftriaxone、cefixime and azithromycin.Penicillinase-http:/pfxbxzz paperopen comproducing N.gonorrhoeae(PPNG)was detected by the paper acidity method esultsThe resistant rate of penicillin、ciprofloxacin、tetracycline and azithromycin were72.22%(156/216)、85.65%(185/216)、97.22%(210/216)and 6.94%(15/216)，respectivelyAllisolatesweresusceptibletospectinomycin.Decreasedsusceptibilities to ceftriaxone(4.63%)and cefixime(12.96%)were found，althoughno strain was resistant toboth antibiotics ConclusionGonococcal clinical isolateswere highly resistant to penicillin，tetracyclineandciprofloxacininZhuhaiCeftriaxone，cefixime and spectinomycin can still be used as the first-line drugs forthe treatment of Neisseria gonorrhoeae，but the change of drug resistance should bemonitored regularly.Key words Neisseria gonorrhoeae;Antimicrobial resistance;Minimum inhibitory concentration;PPNG;TNG淋病是由淋球菌感染引起的性传播疾病，是我国法定的乙类传染病，由于抗菌药物使用不规范，淋球菌耐药性日益严重，近年来已有对头孢曲松和阿奇霉素双重耐药的报道1，监测淋球菌对抗菌药物的敏感性对指导临床用药具有重要作用。为了了解本地区淋球菌耐药变化趋势，本研究收集 2020-2021年珠海市性病监测点 216 株淋球菌临床分离株，采用改良微量稀释法进行耐药性检测，测定最低抑菌浓度(MIC)2，现将结果报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1菌株来源收集 2020 2021 年珠海地区性病监测哨点分离培养并经鉴定为淋球菌的菌株，共216 株，均源自男性尿道分泌物和女性宫颈分泌物，于-70 低 温 冰 箱 中 冻 存 备 用。世 界 卫 生 组 织(WHO)标准淋球菌菌株 D、G、J、L 株由广东省皮肤性病防治中心提供，其中 D、G、L 株为 PPNG 阴性菌株，J 株为 PPNG 阳性菌株。1.1.2培养基淋球菌选择培养基(TM)购于江门凯林贸易有限公司。1.1.3抗生素青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、头孢克肟和阿奇霉素 7 种抗生素按倍比稀释后加于 96 孔测试板形成不同药物浓度梯度。淋球菌药物 MIC 测试板、MH 肉汤培养基均由广东省皮肤性病防治中心提供。1.2方法1.2.1菌悬液制备实验菌株和标准菌株用 TM平板培养 16 20h 后，用生理盐水配制 0.5 麦氏浊度的菌悬液。1.2.2MIC 测定吸取 150ul 菌悬液至 MH 肉汤培养基内混匀，将 100ul 混匀液分别加入 96 孔药敏板，同时在对照孔内加入未加菌液的肉汤 100ul 作为空白对照，加入含待测菌的肉汤 100ul 作为阳性对照，于 35CO2培养箱中培养 24 小时，结果判读标准参考 WHO 西太区淋球菌耐药监测规划推荐标准。1.2.3PPNG 和 TNG 测定PPNG 测定采用纸片酸度法，以颜色变为黄色为 PPNG 阳性菌株。TNG测定根据规划推荐标准，当四环素 MIC16g/ml，判为 TNG 阳性菌株。1.3统计学分析采用 SPSS19.0 进 行 统 计 学 分 析，PPNG 和TNG 检出率及淋球菌对药物耐药率的比较采用 2检验，P 0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1PPNG、TNG 检出结果及流行变化趋势216 株淋球菌检出 PPNG 株 92 株，阳性率为43.81%;TNG 株 83 株，阳性率为 38.43%，PPNG和 TNG 流行变化均无统计学差异(P 0.05)。详见表 1。2.2淋球菌对7 种抗生素 MIC 检测结果分布216 株 淋 球 菌 中 青 霉 素 耐 药 株 156 株(72.22%)，四环素耐药株 185 株(85.65%)，环丙031皮肤科学通报 2023 年 2 月第 40 卷第 1 期http:/pfxbxzz paperopen com沙星耐药株 210 株(97.22%)，青霉素、四环素和环丙沙星的 MIC50和 MIC90均已超过耐药标准(1g/ml)。未检出对大观霉素、头孢曲松和头孢克肟耐药菌株，但对头孢曲松和头孢克肟低敏株分别为9 株(4.17%)和 36 株(16.67%)，大观霉素和头孢曲松的 MIC50和 MIC90均在敏感范围，头孢克肟的MIC90为 0.25g/ml，超出其敏感范围(0.125g/ml)。阿奇霉素敏感株 201 株(93.06%)，耐药株 15株(6.94%)，MIC50和 MIC90均 在 敏 感 范 围(0.5g/ml)。详见表 2、3。表 1216 株质粒介导的淋球菌耐药结果株(%)2020(n=120)2021(n=96)total(n=216)2PPPNG46(38.33%)46(47.92%)92(43.81%)2.003P 0.05TNG49(40.83%)34(35.42%)83(38.43%)0.661P 0.05表 2216 株淋球菌耐药性监测结果株(%)DrugSensitiveIntermediateesistantpenicillin3(1.39)57(26.39)156(72.22)Tetracycline31(14.35)185(85.65)Ciprofloxacin1(0.47)5(2.31)210(97.22)spectinomycin216(100)ceftriaxone211(97.69)9(4.17)cefixime180(83.33)36(16.67)Azithromycin201(93.06)15(6.94)表 3216 株淋球菌 MIC 分布株MIC(g/ml)PNCTCNCIPSPECOCMAZM0.0005000.001200.002210.00413200.00832900.015001782020.03300644990.0631001647300.1256000452810.259510024450.53925404534146489117821847334143449201843731575166213734327962906401280MIC50(g/ml)22880.0150.060.125MIC90(g/ml)323216160.060.250.5Note:PNC indicated penicillin、TCN indicated Tetracycline、CIP indicated ciprofloxacin、SPE indicated spectinomycin、CO indicated ceftriaxone、CM in-dicated cefixim、AZM indicatede azithromycin131皮肤科学通报 2023 年 2 月第 40 卷第 1 期http:/pfxbxzz paperopen com3讨论近年来由于临床上抗生素的滥用和不规则治疗，淋球菌的耐药率逐年上升，特别是对头孢曲松高度耐药的超级淋球菌的出现，引起了全世界的关注。2012 年 WHO 颁布了“控制淋球菌耐药流行与影响的全球行动计划”，WHO 西太区淋球菌耐药性检测规划协作小组建议使用琼脂稀释法检测淋球菌MIC，由于该法操作繁琐，比较适合于回顾性监测和批量检测。Wu 等2 报道采用改良微量稀释法和琼脂稀释法进行了淋球菌药敏实验的方法学比较，两者的基本符合率为 96%以上，药敏符合率 95%-100%，重大误差和极重大误差分别为 0-3%和 0，表明微量稀释法和琼脂稀释法对淋球菌的药物敏感性试验具有良好的一致性。微量稀释法具有操作简单、结果易判读、无需特殊仪器等优点，能够实时对单个菌株进行耐药性检测，提高检测时效性，故本研究采用微量稀释法进行。本次研究显示 PPNG 阳性率为 43.81%，TNG阳性率为 38.43%，两年之间的阳性率变化无统计学 差 异，但 与 本 地 区3 20152016年PPNG27.96%、TNG25.81%比