10%溴虫氟苯双酰胺SC的...PLC-MS_MS分析方法_刘涵菊.pdf

农 药AGROCHEMICALS刘涵菊,逯洲,韦丽萍,等.10%溴虫氟苯双酰胺SC的HPLC-MS/MS分析方法J.农药,2023,62(3):181-183.doi:10.16820/j.nyzz.2023.2036收稿日期：2022-11-23，修返日期：2022-12-05基金项目：吉林省自然科学基金(YDZJ202201ZYTS475)作者简介：刘涵菊(1996)，女(蒙古族)，内蒙古呼伦贝尔市人，硕士，主要从事农药残留分析与环境毒理研究。E-mail：。通讯作者：侯志广(1976)，男，副教授，硕士生导师，主要从事农药残留分析与环境毒理研究。E-mail：。10%溴虫氟苯双酰胺SC的HPLC-MS/MS分析方法刘涵菊，逯 洲，韦丽萍，张雪峰，郑晓东，赵庆慧，张 宁，侯志广(吉林农业大学 植物保护学院，长春 130118)摘要：目的 建立一种高效液相色谱-串联质谱测定溴虫氟苯双酰胺悬浮剂的分析方法。方法 采用AgilentZorbax RRHD Eclipse Plus C18色谱柱，流速0.3 mL/min,柱温30 条件下，以乙腈-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)(体积比7030)作为流动相，ESI离子源，在多反应监测(MRM)模式下进行正离子扫描，测定样品中溴虫氟苯双酰胺的含量。结果方法的线性相关系数为0.9997，标准偏差为0.155，变异系数为1.59%，平均回收率为101.21%。结论该方法线性关系良好，准确度和精密度高，符合溴虫氟苯双酰胺悬浮剂中有效成分的定量分析要求。关键词：溴虫氟苯双酰胺；高效液相色谱-串联质谱；分析中图分类号：TQ450.7文献标志码：A文章编号：1006-0413(2023)03-0181-03HPLC-MS/MS analysis method for broflanilide 10%SCLIU Han-ju,LU Zhou,WEI Li-ping,ZHANG Xue-feng,ZHENG Xiao-dong,ZHAO Qing-hui,ZHANG Ning,HOU Zhi-guang(College of Plant Protection,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China)Abstract:Aims A HPLC-MS/MS method for determination of broflanilide SC was established.Methods ESI ionsource and the positive mode under multiple reaction monitoring(MRM)mode was performed to determine theconcentration of broflanilide in the sample.Agilent Zorbax RRHD Eclipse Plus C18was used at 30,acetonitrile-0.1%formic acid water+5 mol/L ammonium acetate(70:30,by vol)was used as mobile phase with flow rate of 0.3 mL/min.Results The linear correlation coefficient was 0.9997,the standard deviation was 0.155 with the variation coefficientof 1.59%and the average recovery of 101.21%.Conclusions The method has a good linear relationship,highsensitivity,which is suitable for quantitative analysis of broflanilide SC.Key words:broflanilide;HPLC-MS/MS;analysis中国是农业大国，农产品的质量安全问题不容忽视，农药是减少农作物病虫草害，提高农作物产量的重要手段。因为农药制剂产品质量直接关乎着粮食安全、环境安全以及人们的生命健康安全，所以制剂生产问题备受关注。农药的高效利用与制剂产品的质量密不可分1，随着农药行业的发展，制剂的开发逐渐向着绿色、高效、安全、精准的方向发展2，但依然有部分商家盲目追求经济效益，生产劣质产品，为保证农药商品质量安全，建立一种高效简便的制剂分析方法，对保护农作物和环境安全起着至关重要的作用。溴虫氟苯双酰胺(broflanilide)是由巴斯夫和三井化学共同开发的间位双酰胺类杀虫剂3，属于GABA门控氯离子通道别构调节剂，通过胃毒和触杀作用，抑制靶标昆虫的神经传递，导致昆虫兴奋抽搐，最终死亡4-7。因溴虫氟苯双酰胺独特的结构，让其成为一种新颖的杀虫剂，使溴虫氟苯双酰胺能够快速有效地对害虫进行毒杀作用，且对于具有杀虫剂抗性的害虫也具有较好的毒杀效果8，可广泛用于防治虫害，因此测定溴虫氟苯双酰胺制剂的含量具有重要意义。目前关于溴虫氟苯双酰胺悬浮剂的分析方法有气相色谱法(GC)9、高效液相色谱法(HPLC)10，而高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS/MS)尚未见报道。HPLC-MS/MS是普遍用于检测农药制剂中有效成分的方法11-12，与GC和HPLC相比，HPLC-MS/MS具有高选择性、高灵敏度、分析时间短、区分杂质能力强等特点，且能够不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围更广泛。因此，试验建立了检测10%溴虫氟苯双酰胺悬浮剂中有效成分的HPLC-MS/MS分析方法，该方法操作简便、快速高效，第62卷第3期2023年3月Vol.62,No.3Mar.2023农 药 AGROCHEMICALS第卷62可用于溴虫氟苯双酰胺制剂的含量测定。1实验部分1.1仪器及试剂HPLC-MS/MS：Agilent 1260-6470，美国安捷伦科技有限公司；色谱柱：Agilent Zorbax RRHD Eclipse Plus C181.8 mm50 mm，3.0 m；万分之一天平：LE204E型，上海Mettler Toledo公司。溴虫氟苯双酰胺标准品(纯度97%，Toronto ResearchChemicals INC.公司)；100 g/L溴虫氟苯双酰胺悬浮剂(巴斯夫欧洲公司)；乙腈、甲醇(色谱纯，MREDA公司)；甲酸(色谱级，福晨化学试剂有限公司)；乙酸铵(色谱级，Sigma-Alorich集团)。1.2仪器检测条件1.2.1色谱条件色谱柱Agilent Zorbax RRHD Eclipse Plus C18(3.0 mm100 mm，1.8 m)；柱温30；流动相为乙腈-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)(体积比7030)，等度洗脱；流速0.3 mL/min；进样量5 L。1.2.2质谱条件电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI+)；多反应监测(MRM)；毛细管电压4000 V；雾化气为氮气；雾化气压力为0.207 MPa；干燥气温度330；干燥气流速为7 L/min；鞘气温度300；鞘气流速8 L/min。质谱参数见表1。1.3试验内容1.3.1标准溶液的配制准确称取溴虫氟苯双酰胺标准品0.0103 g于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，超声溶解10 min，冷却至室温后，转移至储存瓶中备用。1.3.2试样溶液的配制准确称取100 g/L溴虫氟苯双酰胺悬浮剂0.1000 g于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，超声溶解10 min，冷却至室温后，过0.22 m微孔有机滤膜并转移至储存瓶中备用。1.3.3测定待仪器状态稳定后，连续检测数针标样溶液，直至相邻2针峰面积相对变化小于1.5%时，按照标样、试样、试样、标样的顺序进行上机测定，计算100 g/L溴虫氟苯双酰胺悬浮剂有效成分的含量。溴虫氟苯双酰胺色谱图见图1。1.3.4计算取试样和标样2针的平均峰面积进行计算，试样中溴虫氟苯双酰胺质量分数X(%)按照下式计算。X(%)=A2M1PA1M2式中：X为溴虫氟苯双酰胺的质量分数(%)，A2为试样中溴虫氟苯双酰胺峰面积的平均值，M1为溴虫氟苯双酰胺标准品的质量(g)，P为标样中溴虫氟苯双酰胺标准品的纯度(%)，A1为溴虫氟苯双酰胺标准品峰面积的平均值，M2为溴虫氟苯双酰胺试样称样量(g)。2结果与讨论2.1色谱条件的优化HPLC-MS/MS分析中，流动相是影响峰型和出峰时间的重要因素。试验选择1 mg/L溴虫氟苯双酰胺溶液进行条件优化，以0.3 mL/min的流速，C18色谱柱进行分析，分别比较了甲醇-水、甲醇-水(0.1%甲酸)、甲醇-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)、乙腈-水、乙腈-水(0.1%甲酸)、乙腈-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)6种流动相对溴虫氟苯双酰胺标准品色谱分离的影响。结果如图2所示，当甲醇作为有机相时，溴虫氟苯双酰胺保留时间为13.5 min，出峰时间较晚，峰形展宽且不对称，因此不选择甲醇作为本试验的有机相。被测物母离子(m/z)子离子(m/z)源内碎裂电压/V碰撞气能量/eV溴虫氟苯双酰胺663.3623.5*15048209.315056表1溴虫氟苯双酰胺的质谱参数注：*为定量离子。A为标准品，B为10%悬浮剂，质量浓度为0.5 mg/L图1溴虫氟苯双酰胺色谱图a.甲醇-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)，b.甲醇-水(0.1%甲酸)，c.甲醇-水图2甲醇作为有机相时不同水相组合对溴虫氟苯双酰胺色谱峰的影响182第3期刘涵菊，等：10%溴虫氟苯双酰胺SC的HPLC-MS/MS分析方法当乙腈作为有机相时，结果见图3，溴虫氟苯双酰胺保留时间为5.5 min，峰形尖锐，符合检测要求。当0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵水溶液作为水相时，响应值更高、峰形对称、基线平稳、保留时间适中，因此选择乙腈-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)作为本试验的流动相。2.2质谱条件的优化在全扫描模式下，采用ESI+和ESI-模式对溴虫氟苯双酰胺标准溶液进行扫描，在ESI+模式下获得了丰度较强的母离子M+H+离子峰m/z 663.3，由此确定扫描方式为正离子扫描，然后以SIM模式扫描溴虫氟苯双酰胺子离子，优化碎裂电压和碰撞能，在最优的条件下选择了干扰较少、响应值较高的2个离子m/z 209.3和623.5，作为定性离子和定量离子。在MRM模式下对雾化器压力、干燥器温度等参数进行优化，得到了1.2.2溴虫氟苯双酰胺的质谱参数。2.3方法线性相关性采用外标法进行定量分析，对不同质量浓度的溴虫氟苯双酰胺标准溶液(0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1 mg/L)按照以上确定的仪器条件测定，以进样质量浓度x(mg/L)为横坐标、峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线，得到溴虫氟苯双酰线性方程为y=1.8106x+18 886，R2=0.9997，表明溴虫氟苯双酰胺在0.011 mg/L的质量浓度范围内线性关系良好。2.4分析方法精密度测定从同一10%溴虫氟苯双酰胺悬浮剂试样溶液中准确称取5份样品，待仪器基线平稳后，按照以上液质条件进行连续测定，计算得出溴虫氟苯双酰胺的标准偏差为0.155，变异系数为1.59%(见表2)，表明该分析方法满足检测溴虫氟苯双酰胺的精密度要求。a.乙腈-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)，b.乙腈-水(0.1%甲酸)，c.乙腈-水图3乙腈作为有机相时不同水相组合对溴虫氟苯双酰胺色谱峰的影响表210%溴虫氟苯双酰胺悬浮剂精密度测定质量分数/%标准偏差变异系数/%12345平均值9.789.669.669.6410.019.750.1551.592.5分析方法准确度测定分别准确称取5份同一批次10%溴虫氟苯双酰胺悬浮剂样品，按照试验所建立的方法进行样品检测，以确定分析方法的准确度。