UHPLC-MS_MS测定...哌唑浓度及其生物等效性研究_李莎.pdf

494 Chin J Mod Appl Pharm,2023 February,Vol.40 No.4 中国现代应用药学 2023 年 2 月第 40 卷第 4 期 UHPLC-MS/MS 测定人血浆中依匹哌唑浓度及其生物等效性研究 李莎，宋佩颖，李鑫鑫，吴强，魏伯平，袁军，曾实*(四川省药品检验研究院生物样本检测中心，药物制剂体内外相关性技术研究国家药监局重点实验室，成都 611731)摘要：目的 建立简便灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，UHPLC-MS/MS)测定人血浆中依匹哌唑浓度，并应用于 2 种片剂的生物等效性研究。方法 采用 Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm50 mm，1.7 m)，以 0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈-甲醇(5050，含 0.1%甲酸)(B)梯度洗脱，流速 0.4 mLmin1，进样量为 2 L，柱温 40，以正离子 MRM 模式测定依匹哌唑(m/z 434.2273.2)的浓度，依匹哌唑-d8(m/z 442.4281.3)作为内标，离子源为 ESI 源。血浆样本加入内标，加入甲醇后进行蛋白沉淀，取上清液稀释后进样检测。结果 依匹哌唑在 0.250 ngmL1呈线性关系，定量下限为 0.2 ngmL1，质控样品批内、批间精密度 CV5.0%，准确度相对偏差在标示值1.7%5.5%内，提取回收率、专属性、基质效应、稳定性等各项指标均符合国家药品监督管理局的技术指导原则。本法被成功应用于健康受试者单剂口服 2 mg 依匹哌唑口崩片的生物等效性研究，参比制剂空腹及餐后给药状态下平均 Cmax分别为 19.62 和 20.83 ngmL1，受试制剂空腹及餐后给药状态下平均 Cmax分别为 21.68 和19.74 ngmL1。结论 该方法具有前处理过程简单,灵敏度高,色谱峰形好的优点。受试制剂依匹哌唑口崩片与其参比制剂相比，具有生物等效性。关键词：依匹哌唑；抗精神病药；血浆浓度；生物等效性；超高效液相色谱-串联质谱法 中图分类号：R917 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2023)04-0494-06 DOI:10.13748/ki.issn1007-7693.2023.04.010 引用本文：李莎,宋佩颖,李鑫鑫,等.UHPLC-MS/MS 测定人血浆中依匹哌唑浓度及其生物等效性研究J.中国现代应用药学,2023,40(4):494-499.Determination of Brexpiprazole Concentration in Human Plasma by UHPLC-MS/MS and Its Bioequivalence Study LI Sha,SONG Peiying,LI Xinxin,WU Qiang,WEI Boping,YUAN Jun,ZENG Shi*(Bioanalytical Service Center of Sichuan Institute for Drug Control,NMPA Key Laboratory for Technical Research on Drug Products in Vitro and in Vivo Correlation,Chengdu 611731,China)ABSTRACT:OBJECTIVE To establish a fast and sensitive UHPLC-MS/MS method for determination of brexpiprazole in human plasma and to investigate the bioequivalence between 2 formulations of tablets.METHODS Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm50 mm,1.7 m)column was used with the mobile phase consisting of 0.1%formic acid water(A)and acetonitrile-methanol(5050,containing 0.1%formic acid)(B)in gradient elution.The flow rate was controlled at 0.4 mLmin1 with the injection volume of 2 L and the column temperature was set at 40.A mass spectrometer equipped with electrospray ionization source was used and brexpiprazole(m/z 434.2273.2)was monitored in positive ion MRM mode,with brexpiprazole-d8(m/z 442.4281.3)as internal standard,ion source was ESI source.After addition of internal standard,plasma protein was precipitated by methanol,and supernatants were detected after dilution.RESULTS Brexpiprazole was linear in the range of 0.250 ngmL1 and the lower limit of quantification was 0.2 ngmL1.The intra-day and inter-day precision CV of quality-control samples was 5.0%,and the accuracy was in the range of 1.7%5.5%in terms of relative error.Recovery rate,specificity,matrix effect and stability met the guiding principles and criteria of NMPA.The method was successfully applied to a bioequivalence study of brexpiprazole orally disintegrating tablets containing 2 mg in healthy volunteers.The average Cmax under fasting and fed condition of the reference tablet were 19.62 and 20.83 ngmL1.The average Cmax under fasting and fed condition of the test tablet were 21.68 and 19.74 ngmL1.CONCLUSION The method is sensitive and simple in process,and can produce well chromatographic performance.The test brexpiprazole orally disintegrating tablet is bioequivalent to the reference tablets.KEYWORDS:brexpiprazole;antipsychotics;plasma concentration;bioequivalence;UHPLC-MS/MS 作者简介：李莎，女，硕士，主管药师 E-mail:sha.liscsyjs.org *通信作者：曾实，男，博士，工程师 E-mail:shi.zengscsyjs.org 依匹哌唑一种非典型的抗精神病药，于 2015年 7 月获 FDA 批准上市，用于精神分裂症以及重度抑郁症的辅助治疗1。该药治疗精神分裂症或抑郁症确切的机制尚不十分清楚，可能是通过 5-中国现代应用药学 2023 年 2 月第 40 卷第 4 期 Chin J Mod Appl Pharm,2023 February,Vol.40 No.4 495 HT1A 受体和多巴胺 D2 受体的部分激动作用，以及对 5-HT2A 受体和去甲肾上腺素 1B和 2C受体的拮抗作用共同发挥治疗效应2-3。与典型抗精神病药相比，依匹哌唑疗效显著，具有良好的安全性和耐受性，且长期服用对代谢参数、心血管系统及泌乳素影响较小4。因此，依匹哌唑具有广泛的临床应用前景。关于依匹哌唑的生物分析方法报道较少，已有的文献中血浆样品前处理取样量较大，达到0.10.3 mL，采用操作繁琐的液液萃取法或固相萃取法提取分析物，且最低定量下限较高，不能很好地满足体内分析要求3,5-6。本研究拟建立并验证一种新的血浆取用量更少、操作更简便、方法灵敏度更高的 UHPLC-MS/MS 方法测定依匹哌唑的血浆浓度，并用于依匹哌唑口崩片受试制剂和参比制剂的生物等效性研究。1 材料与方法 1.1 药品与试剂 依匹哌唑对照品(批号：1827-059A1；含量：99.4%)和依匹哌唑-d8(批号：2056-061A5；HPLC纯度：92.6%；同位素纯度：98.7%)均购自 TLC Pharmaceutical Standards 公司。受试制剂依匹哌唑口崩片(成都康弘药业集团股份有限公司，批号：20002；规格：每片 2 mg)；参比制剂 Rexulti(日本大冢制药公司，批号：BMS01519A；规格：每片 2 mg)。实验用甲醇、乙腈均为 HPLC 级，甲酸为质谱级，纯水为 Milli-Q 型超纯水仪制备的超纯水。1.2 仪器 LC-30A 系列超高效液相色谱仪(日本岛津公司)；TQ6500+三重四极杆串联质谱仪、Analyst 采集工作站 1.63(美国应用生物系统公司)；Sorvall ST 8R 低温离心机(美国 Thermo 公司)；XR6TUD5 百万分之一电子分析天平(Mettler Toledo 公司)。1.3 试验设计、给药及血样采集 本研究为单中心、随机、开放、单次给药、两制剂、两周期、两交叉设计，考察受试制剂依匹哌唑口崩片和参比制剂依匹哌唑片在健康人体空腹/餐后状态下生物等效性试验，其中空腹和餐后给药试验各 24 例。试验获长沙市第一医院临床试验伦理委员会批准实施(伦理批准号：20200723 CSSY00304)。受试者签署知情同意书后参加筛选体检，合格的健康受试者进入试验，随机分为 2组，交叉给予受试制剂 1 次或参比制剂 1 次，清洗期为 28 d。在每周期第 1 天，受试者至少禁食10 h，空腹试验组按照随机表空腹服用相应受试制剂 1 片或参比制剂 1 片；餐后试验组需在 30 min内将高脂餐(8001 000 kcal)全部吃完，再按照随机表餐后服用相应受试制剂 1 片或参比制剂 1 片。分别在每个周期的给药 0 h(给药前 1 h 内)和给药后 0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，10.0，12.0，24.0，36.0，48.0，60.0，72.0 h共 18 个时间点采集静脉血。每个时间点采血 4 mL，置于预冷的含 EDTA-K2抗凝剂的真空采血管中，随即 28 离心(1 750 g，10 min)分离血浆，离心后的血浆于6090 冰箱存放待分析。1.4 血浆样品分析测定 1.4.1 色谱条件 采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm50 mm，1.7 m)，柱温