HILIC-MS_MS法检...营养品中9种抗病毒药物残留_郭巍.pdf

作者简介:郭巍(),男,焦作大学讲师.E m a i l:b i t a c h u n c o m收稿日期:改回日期:D O I:/j s p j x 文章编号 ()H I L I C M S/M S法检测动物源运动营养品中种抗病毒药物残留D e t e r m i n a t i o no f t h er e s i d u e so f k i n d so f a n t i v i r a l d r u g s i na n i m a l d e r i v e ds p o r t sn u t r i t i o nb yH I L I C M S/M S郭巍G U O W e i(焦作大学,河南 焦作 )(J i a o z u oU n i v e r s i t y,J i a o z u o,H e n a n ,C h i n a)摘要:目的:加强动物源性运动营养品中抗病毒药物残留的监控.方法:建立一种亲水交互作用色谱串联质谱测定动物源运动营养品中种抗病毒药物组分的方法.样品前处理采用乙酸乙腈提取,经P R i MEHL B小柱净化后检测.采用乙腈 mm o l/L乙酸铵溶液(含甲 酸)流 动 相 体 系,在 梯 度 洗 脱 模 式 下,经S i e l cO b e l i s cR柱分离,实现种目标物组分的分离.结果:种抗病毒药物组分在 n g/m L质量浓度范围内线性良好,检出限为g/k g,定量限为g/k g,加标回收率达 ,相对标准偏差为(n).结论:试验方法可以满足动物源运动营养品中种抗病毒药物残留的检测需求.关键词:固相萃取;亲水色谱;动物源;运动营养品;抗病毒类药物A b s t r a c t:O b j e c t i v e:T h i s s t u d ya i m e dt oh e l pw i t hs t r e n g t h e n i n gt h em o n i t o r i n go f a n t i v i r a l d r u gr e s i d u e s i na n i m a l d e r i v e ds p o r t sn u t r i t i o n p r o d u c t s M e t h o d s:A m e t h o df o r d e t e r m i n i n g t h er e s i d u e so fk i n d so fa n t i v i r a ld r u g si na n i m a l d e r i v e ds p o r t sn u t r i t i o n w a s e s t a b l i s h e d,b y u s i n g h y d r o p h i l i c i n t e r a c t i o nc h r o m a t o g r a p h yt a n d e m m a s ss p e c t r o m e t r y T h es a m p l e sw e r ee x t r a c t e db y a c e t i ca c i d a c e t o n i t r i l ea n dp u r i f i e db yP R i MEHL Bc o l u m n T h em o b i l ep h a s es y s t e mo fa c e t o n i t r i l e mm o l/La mm o n i u ma c e t a t es o l u t i o n(c o n t a i n i n g f o r m i ca c i d)w a ss e p a r a t e db yS i e l cO b e l i s cRc o l u m ni ng r a d i e n te l u t i o nm o d et oa c h i e v e t h es e p a r a t i o no fn i n e t a r g e tc o m p o n e n t s R e s u l t s:T h ek i n d so fa n t i v i r a ld r u g sf r a c t i o n sh a dg o o dl i n e a r i t yi nt h em a s sc o n c e n t r a t i o nr a n g eo f n g/m L,a n dt h el i m i to fd e t e c t i o nw a sg/k g,w i t ht h e l i m i to fq u a n t i f i c a t i o no fg/k ga n dt h es p i k e dr e c o v e r yo f ,a n dt h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n w a s (n)C o n c l u s i o n:T h e t e s tm e t h o dc a nm e e t t h ed e t e c t i o nr e q u i r e m e n t so f t h er e s i d u e so f k i n d so f a n t i v i r a ld r u g s i nt h ea n i m a l d e r i v e ds p o r t sn u t r i t i o n K e y w o r d s:s o l i dp h a s ee x t r a c t i o n(S P E);H I L I C;a n i m a l d e r i v e d;s p o r t sn u t r i t i o n;r e s i d u e so f a n t i v i r a l d r u g抗病毒药物是一类用于预防和治疗人和动物病毒感染的药物,常用的有阿昔洛韦、奥司他美金刚、奈韦拉平等.由于抗病毒药物对畜禽的病毒性流感有一定的预防和治疗作用,且价格低廉,所以也常被用于畜禽养殖业.但因缺乏相应的科学规范以及安全可靠的数据支持,将人用抗病毒药物移作兽用,会在动物体内造成药物残留,还 可 能 会 使 病 毒 菌 株 发 生 变 异,危 害 人 类 健康.但是对抗病毒药物多组分的检测方 法 尚不 完善,为了防止通过食物链引起中毒,尤其是动物源性运动营养品这类特殊食品,有必要建立一种快速检测这些目标组分的方法,加强动物源性运动营养品中抗病毒药物残留的监控.运动营养品对产品的安全性要求较高,市场上以动物源为基质的运动营养品品种繁多,所占市场份额也越来越大.近年来,食品中兽药残留事件频频曝光,所以人们对这类特殊食品中的药物残留越来越重视,而抗病毒药物残留是研究的热点.目前食品中抗病毒药物残留的检测方法主要有酶联免疫法 、高效液相色谱法 、液相色谱串联质谱法 等.酶联免疫法由于仪器精度所限,检测灵敏度较低;高效液相色谱法较为常用,但是对于极性组分相近的物质,分离度较差;高效液相色谱串联质谱法流动相中要使用离子对试剂,存在系统稳定性差以及抑 制 待 组 分 电 离 的 问 题.亲 水 交 互 作 用 色 谱F OO D&MA CH I N E R Y第 卷第期 总第 期|年月|(H y d r o p h i l i c i n t e r a c t i o nc h r o m a t g r a p h y,H I L I C)是一种组分分离模式介于正相色谱和反相色谱之间的色谱技术,适用于分析强亲水性和强极性化合物,可解决样品中多种强极性组分分离难的问题 .目前,亲水交互作用色谱法在农产品抗病毒药物检测方面的应用较多,而对运动营养品中抗病毒药物检测方面的研究较少.研究拟通过固相萃取净化技术,结合亲水色谱分离技术对强极性较难分离的种抗病毒药物组分进行提取,通过亲水交互作用色谱串联质谱法(H I L I C M S/M S)检测动物源运动营养品中种抗病毒药物组分的残留,以期为动物源运动营养品中抗病毒药物残留的分析和监控提供依据.材料与方法材料与仪器高效液 相 色 谱串 联 质 谱 仪:X e v oT Q S型,Z I C H I L I C色谱柱(mm mm,m),美国W a t e r s公司;I n e r t S u s t a i n Am i d e色 谱 柱(mm mm,m)、T S K g e lAm i d e 色谱柱(mm mm,m):日本岛津有限公司;O b e l i s cR色 谱 柱:mm mm,m,美 国S i e l c科技公司;奈韦 拉 平()、泛 昔 洛 韦()、阿 比 多()、阿昔洛韦()、咪喹莫德()、美金刚()、金刚烷胺()、奥司他韦()、吗啉胍()标准品:上海安谱实验科学科技有限公司;乙酸铵:分析纯,国药集团化学试剂有限公司;甲醇:色谱纯,德国M e r c k公司;MC X、MA X以 及P R i ME HL B固 相 萃 取 小 柱:m g/m L,美国W a t e r s公司;动物源运动营养品(鸡胸肉源蛋白棒、牛肉源蛋白棒、乳清蛋白棒、鸡胸肉运动代餐粉、牛肉运动代餐粉、蛋白运动能量棒):市售.试验方法色谱条件优化参照文献 ,选择种色谱柱Z I C H I L I C色 谱 柱(键 合 相 为 硅 胶)、I n e r t S u s t a i nAm i d e色谱柱(键合相为酰胺基)、T S K g e lAm i d e 色谱柱(键合相为酰胺基)以及S i e l cO b e l i s cR色谱柱(键合相为含电荷的极性和非极性混合基团),比较种抗病毒药物组分的分离效果.质谱条件采用正离子电离模式扫描;监测模式为多反应监测模式;离子源温度 ;脱溶剂气流量 L/m i n;锥孔气流量L/m i n.仪器条件O b e l i s cR色谱柱,流速m L/m i n,柱温,进样量L;流动相A为 mm o l/L乙酸铵溶液(含甲酸),流动相B为乙腈,按表进行梯度洗脱.表流动相梯度洗脱步骤T a b l eM o b i l ep h a s eg r a d i e n t e l u t i o ns t e p时间/m i n流动相A/流动相B/样品前处理称取混合均匀的样品(固体样品预先粉碎)g,加入 m L提取液(分别比较乙酸铵缓冲溶液、三氯乙酸溶液,偏磷酸甲醇溶液,乙酸乙腈溶液种提取液),涡旋 s,使样品与提取液混合均匀,超声 m i n,r/m i n离心m i n,过滤,取m L滤液上样,选 择种 固 相 小 柱(MC X、MA X以 及P R i MEHL B),固相萃取过程按照固相小柱操作步骤分别经活化、上样、淋洗、洗脱后收集滤液,过 m滤膜后上机检测.标准曲线绘制称取适量的种抗病毒药物组分标准品,用甲醇超声溶解并配制成 n g/m L的储备液,检测前以流动相配制成 n g/m L质量浓度范围的标准混合溶液,经仪器进行分析,绘制标准曲线.提取溶液的选择参照文献 ,提取含 g/k g阳性样品的目标组分,比较提取溶液:g/L乙酸铵溶液,提取溶液:乙酸溶液,提取溶液:乙酸甲醇溶液(V乙酸V甲醇为),提取溶液:乙酸乙腈溶液(V乙酸V乙腈为)对种组分提取的影响.固相萃取柱的选择采用固相萃取法进行净化提取液,比较HL B、MC X、MA X种小柱对提取液的净化效果,以各组分加标回收的峰面积为比较依据.结果与讨论色谱条件优化由图可知,Z I CH I L I C柱分离种抗病毒药物组分效果不理想,目标组分出峰重叠,分离度较差;而T S K g e lAm i d e 柱在乙腈甲酸为流动相梯度洗脱模式下,可以实现部 分抗 病毒 药 物 组 分 的 分 离;在I n e r t