·论著·［收稿日期］２０２２－０３－１０［基金项目］新疆维吾尔自治区自然科学基金（２０１９Ｄ０１Ｃ００６）［作者简介］任杰（１９８７－），男，安徽阜阳人，新疆维吾尔自治区喀什地区第一人民医院副主任医师，医学硕士，从事呼吸与危重系统疾病诊治研究。＊通信作者。Ｅ－ｍａｉｌ：８１１３４６８７６＠ｑｑ．ｃｏｍＣＯＰＤ中ＭｉｃＲＮＡ－３２０ｃ－５ｐ调节ＳＥＲＰＩＮＡ１基因表达的研究任杰，祖力皮喀尔·阿卜杜热合曼，弓慧，钟雪梅，郑爱芳，李黎＊（新疆维吾尔自治区喀什地区第一人民医院呼吸与危重症医学科，新疆喀什８４４０００）［摘要］目的通过双荧光素酶报告系统验证ｍｉＲ－３２０ｃ－５ｐ对ＳＥＲＰＩＮＡ１基因的靶向调控关系。方法从人正常肺上皮细胞基因组库中获取ＳＥＲＰＩＮＡ１基因的３′ＵＴＲ序列，并通过序列匹配拟定候选ｍｉＲＮＡ。利用３％香烟烟雾提取物（ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅｅｘｔｒａｃｔ，ＣＳＥ）诱导人支气管上皮细胞（ＢＥＡＳ－２ｂ细胞）建立慢性阻塞性肺疾病（ｃｈｒｏｎｉｃｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｅａｓｅ，ＣＯＰＤ）细胞模型作为实验组，正常培养的ＢＥＡＳ－２ｂ细胞作为对照组，使用实时荧光定量聚合酶链反应（ｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｒｏｃｅｎｔｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ｑＰＣＲ）法检测两组ＳＥＲＰＩＮＡ１和候选ｍｉＲＮＡ的表达水平。构建野生型及突变型双荧光素酶报告基因载体，分别将双荧光素酶报告质粒（ｐｓｉＣＨＥＣＫ－２－ＳＥＲＰＩＮＡ１－３′ＵＴＲ和ｐｓｉＣＨＥＣＫ－２－ＳＥＲＰＩＮＡ１－３′ＵＴＲｍｕｔ）和ｍｉＲＮＡ质粒（ｍｉＲ－３２０－５ｐｍｉｍｉｃ）共转染到２９３Ｔ细胞，进行荧光活性测定。结果通过序列匹配，拟候选ｍｉＲ－２６、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－３２０ｃ和ｍｉＲ－９６为目标ｍｉＲＮＡ。与对照组相比，实验组ＳＥＲＰＩＮＡ１基因ｍＲＮＡ表达水平显著上调（Ｐ＜０．０５），四个候选ｍｉＲＮＡ表达水平均显著下调（Ｐ＜０．０１），其中ｍｉＲ－３２０ｃ和ｍｉＲ－９６更为显著（Ｐ＜０．００１），基于文献ｍｉＲ－３２０ｃ与ＣＯＰＤ的预后相关，挑选ｍｉＲ－３２０ｃ用于后续双荧光素酶实验。携带ｍｉｃＲ－３２０ｃ－５ｐｍｉｍｉｃ和ＳＥＲＰＩＮＡ１野生型３，ＵＴＲ的构建体的相对荧光素酶活性明显下降（Ｐ＜０．００１），ＳＥＲＰ...
