第33卷第1期2023年2月生物技术Biotechnology33(1):121Feb.,2023收稿日期:2022-01-26作者简介:纪海姣(1989-),女,河北省石家庄人,硕士,工程师,研究方向:细胞株筛选与评价,发表中文核刊论文1篇,申请发明专利1项,参与创新药项目获得中国、美国临床试验许可各1项,参与完成国家“十二五”重大专项1项,E-mail:2272228935@qq.com。∗通讯作者:王鹏银(1983-),男,河南省南阳人,硕士,高级工程师,研究方向:生物制品研究开发和质量控制,负责创新药项目获得中国和美国临床试验许可各1项,参与完成国家重大专项1项,E-mail:wangpengyin@tasly.com。CHO细胞高密度流加工艺参数优化纪海姣,于妍,杨金龙,王鹏银∗(天士力生物医药股份有限公司上游技术研究室,天津300400)摘要:[目的]优化细胞接种密度、培养基、细胞培养温度等参数,提高生产细胞株PCSK9蛋白表达滴度。[方法]试验分四步进行,①探讨几款市售培养基优化组合后对CHO细胞株蛋白表达滴度的影响;②探讨10.0×106、15.0×106、50.0×106cells/mL高密度接种流加过程培养基、降温时间等对CHO细胞蛋白滴度的影响;③在②实验数据基础上继续优化,通过更换培养基继续探讨高密度流加工艺的可行性;④在反应器对实验数据进行工艺验证。[结果]①CHO细胞PCSK9蛋白滴度提升至2.6g/L,蛋白滴度成倍增长;②15.0×106cells/mL接种,30.0×106cells/mL降温至34℃,继续优化培养基1#、2#配比,蛋白滴度提升至4.5g/L,反应器工艺验证,细胞生长状态稳定,蛋白滴度突破3.8g/L;③继续筛选市售培养基,成功实现80.0×106cells/mL高密度流加接种,蛋白滴度提升至7.5g/L。[结论]以贝谙基Eden-B600、Eden-400S培养基能够实现CHO细胞80.0×106cells/mL的高密度接种,流加培养D15蛋白滴度突破7.5g/L。在细胞流加培养过程可以通过培养基成分优化、提高接种细胞密度等改善高密度流加工艺细胞株生长状态,提高目标蛋白产量。以国产培养基替换进口SigmaEX-CELLAdvancedCHOFed-BatchMedium极大地降低了生产成本。关键词:重组全人源PCSK9;高密度流加;CHO细胞;培养基优化;蛋白滴度中图分类号:Q784文献标识码:ADOI:10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.01.0018OptimizationofparametersforCHOcellshighdensityfedbatchJIHai-jiao,YUYan,YANGJing-long,WANGPeng-yin∗(UpstreamTechnologyResearchOffice,TianshiliBiomedicalCo.,Ltd,Tianjin300400,China)Abstract:[Objective]ToimprovethetiterofPCSK9thatprocessedbychinesehamsterovarycells(CHO)throughoptimiza-ti...
