HPLC法测定苦柏洗剂中盐...、蛇床子素和盐酸小檗碱含量_卢向红.pdf

作者简介:卢向红(1984)，女，汉族，本科，副主任药师，研究方向为药品检验及标准研究。E mail:290826552 通信作者:佘林立(1989)，男，汉族，本科，制药工程师，研究方向为药物分析。E mail:329638049 HPLC 法测定苦柏洗剂中盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱含量卢向红1刘利辉1汪霞1佘林立2*1 湖南省娄底市食品药品检验检测所，湖南娄底417100;2 岳阳新华达制药有限公司，湖南岳阳414000【摘要】目的:建立以高效液相色谱法同时测定苦柏洗剂中盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱含量的方法。方法:采用高效液相色谱法，以盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱作为指标成分，采用 Zafex Acutfex PA C18(4.6 mm 250 mm，5 m)色谱柱，柱温:25，流动相:0.1%磷酸溶液(含 15%乙腈和 0.2%十二烷基硫酸钠)乙腈(6337)，流速:1.0 mLmin1，PDA 检测器，检测波长:322nm。结果:盐酸巴马汀在 0.6530 9.7955 gmL1范围内线性关系良好，r=0.9999，方法的平均回收率为 97.13%，SD 为0.89%(n=6)。蛇床子素在 0.3260 4.8903 gmL1范围内线性关系良好，r=0.9998，方法的平均回收率为 95.86%，SD 为 0.69%(n=6)。盐酸小檗碱在 16.3554 245.3304gmL1范围内线性关系良好，r=0.9999，方法的平均回收率为 98.81%，SD 为 0.80%(n=6)。结论:建立的苦柏洗剂中盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱的含量测定方法，结果准确，重复性和分离度好，可用于同时测定苦柏洗剂中盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱的含量，为更好地控制苦柏洗剂质量稳定和可靠提供科学依据。【关键词】苦柏洗剂;盐酸巴马汀;蛇床子素;盐酸小檗碱;高效液相色谱法【中图分类号】917【文献标志码】A【文章编号】1007 8517(2023)01 0028 04Determination of Palmatine Hydrochloride，Osthol and Berberine Hydrochloride in Kubo Lotion By HPLCLU Xianghong1LIU Lihui1WANG Xia1SHE Linli2*1 Loudi Institute for Food and Drug Inspection Testing，Loudi 417000，China;2 Yueyang Xinhuada Pharmaceutical Co Ltd，Yueyang 414000，ChinaAbstract:Objective To establish a HPLC method for the simultaneous determination of Palmatine hydrochloride、Osthol andBerberine hydrochloride in Kubo LotionMethod With Palmatine hydrochloride、Osthol and Berberine hydrochloride as the indexcomponents，HPLC was used Zafex Acutfex PA C18column(4.6 mm 250 mm，5 m)，column temperature of 25，a mobilephase composed of 0.1%phosphoric acid solution(containing 15%acetonitrile and 0.2%sodium dodecyl sulfate)acetonitrile(6337)were adopted Flow rate:1.00 mLmin1 PDA detector，detection wavelength:322nm esult The linear range of Palma-tine hydrochloride was 0.6530 9.7955 gmL1(r=0.9999)The average recovery of the method was 97.13%with SD of0.89%(n=6)The linear range of Osthol was 0.3260 4.8903 gmL1(r=0.9998)The average recovery was 95.86%withSD of 0.69%(n=6)The linear range of Berberine hydrochloride was 16.3554 245.3304 gmL1(r=0.9999)The aver-age recovery of the method was 98.81%with SD of 0.80%(n=6)Conclusion The established method for the determination ofPalmatine hydrochloride、Osthol and Berberine hydrochloride in Kubo lotion was accurate，repeatable and had good separation degreeIt could be used for the simultaneous determination of Palmatine hydrochloride、Osthol and Berberine hydrochloride in Kubo lotion，and provided a scientific basis for better quality control of Kubo lotionKey words:Kubo lotion;Palmatine Hydrochloride;Osthol;Berberine Hydrochloride;HPLC苦柏洗剂是由岳阳市第二人民医院制剂室委托岳阳新华达制药有限公司生产的中药制剂，其处方组成为苦参、鸦胆子、黄柏、丁香、蛇床子、海马、白鲜皮、薄荷素油和艾叶。具有清热解毒，燥湿杀虫，祛风止痒的功效，临床主要用于真菌性阴道炎、滴虫性阴道炎、老年性阴道炎、宫颈糜烂、湿疹及阴部瘙痒等症属湿热者1。处方中君药黄柏的主要活性成分为生物碱，其中盐酸小檗碱是含量最高的生物碱，可达 1.4%5.8%2，体外研究3 5 表明，盐酸巴马汀和盐酸小檗碱均具有较强的抗炎作用和抗菌能力以及广泛的抗菌谱。臣药蛇床子主要成分是香豆素类化合物，如蛇床子素等，蛇床子素具有抑制炎症发生、抗过敏等作用 6 7。这三个成分是该药发挥临床疗效的主要化学成分，原标准中未对这三个成分进行质量控制，使得制剂质量难以得到有效控制。本文采用高效液82中国民族民间医药2023 年1 月第32 卷第1 期Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2023，Vol.32，No.1相色谱法同时测定苦柏洗剂中盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱的含量，制定了与临床疗效相关成分的含量控制方法，对增强药品质量可控性，保证临床用药安全性，具有十分重要的意义，为进一步提高和完善药品质量标准提供科学依据。1仪器与材料1.1仪器Thermo Fisher HPLC 色谱仪(U3000)Chromeleon 色谱工作站;梅特勒托利多 XSE205DU 电子天平(十万分之一);超声波清洗仪 KQ 300DE1.2试剂水为 I 级纯化水，乙腈(HoneyWell，批号:T8FA1H)为色谱纯，磷酸(国药集团化学试剂有限公司，批号:20190301)为优级纯、十二烷基硫酸钠(国药集团化学试剂有限公司，批号:20160413)为分析纯。盐酸巴马汀对照品购自中国食品药品检定研究院(批号:110732 201913，含量 85.7%);蛇床子素对照品购自中国食品药品检定研究院(批号:110822 202111，含量 99.7%);盐酸小檗碱对照品购自中国食品药品检定研究院(批号:110713 202015，含量 85.9%)。苦柏洗剂由受委托生产企业岳阳新华达制药有限公司生产，批号为200701、201201、210301、210701。2试验方法与结果2.1色谱条件色谱柱:Zafex Acutfex PA C18柱(4.6 mm 250 mm，5 m)，柱温:25，0.1%磷酸溶液(含 15%乙腈和 0.2%十二烷基硫酸钠)乙腈(6337)，流速:1.0 mLmin1，PDA 检测器，检测波长:322 nm。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取盐酸巴马汀对照品 15.24 mg，蛇床子素对照品 16.35 mg，盐酸小檗碱对照品 23.80 mg，分别加甲醇制成每 1mL 含盐酸巴马汀 32.65 g mL1，蛇床子素16.30 gmL1，盐酸小檗碱 817.77 gmL1的溶液，作为储备液备用。2.2.2 供试品溶液的制备取本品 3 瓶内容物混匀，离心，精密取上清液 10 mL，置 20 mL 量瓶中，加甲醇 8 mL，超声处理(功率 500 W，频率40 kHz)20 min，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀。2.2.3阴性对照溶液的制备按苦柏洗剂的处方和制备工艺，分别制备缺黄柏和蛇床子的阴性样品，再按 2.2.2 供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。(A)混合对照品(B)苦柏洗剂样品(C)缺黄柏阴性样品(D)缺蛇床子阴性样品1.盐酸巴马汀;2.蛇床子素;3.盐酸小檗碱图 1HPLC 色谱图92中国民族民间医药2023 年1 月第32 卷第1 期Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2023，Vol.32，No.12.3专属性试验分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液进样 12 L，色谱图如图 1。峰形对称尖锐，基线平稳，各峰之间的分离度为 2.17、3.54，达到基线分离，阴性样品在三个主峰位置无干扰峰，如图 1 所示。2.4线性关系考察精密吸取 2.2.1 项下各对照品储 备 液 适 量，稀 释 成 含 盐 酸 巴 马 汀 0.6530gmL1、1.3061 gmL1、1.6326 gmL1、3.2652 g mL1、6.5303 g mL1、9.7955gmL1，蛇床子素 0.3260 g mL1、0.6520gmL1、0.8150 gmL1、1.6301 gmL1、3.2602 gmL1、4.8903 gmL1，盐酸小檗碱 16.3554g mL1、32.7107g mL1、40.8884g mL1、81.7768g mL1、163.5536 gmL1、245.3304 gmL1的混合标准溶液，进样体积为 10 L，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以各对照品的浓度为横坐标，进行线性回归。结果见表 1。2.5精密度试验取对照品溶液连续进样 6 次，每次 12 L，计算得到盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱峰面积 SD 分别为:0.29%、1.01%和0.37%，表明仪器精密度良好。2.6重复性试验取同一批号(210301)样品 6份，按 2.2.2 项下供试品液制备方法制备，依法测定，结果盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱含量 SD 分别为:1.17%、1.23%和 1.79%，表明本法重复性好。2.7稳定性试验取同一样品溶液(批号:210301)在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h 分别进样12 L，依法测定，盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱峰面积 SD 分别为:0.72%、0.71%和0.34%，表明样品溶液在24 h 内稳定。表 1苦柏洗剂中盐酸巴马汀、蛇床子素和盐酸小檗碱的线性关系考察结果成分回归方程r线性范围/gmL1盐