Beclin1在大鼠糖尿病溃疡创面组织中表达变化_麻华胆.pdf

临床疗效观察 J 现代生物医学进展，2020;20(1):148-52.5张晓杰，郭爱红，李雁君.普罗布考对脑梗死患者血液流变学及凝血相关指标的影响 J 河北医学，2020;26(4):609-15.6王景景，陈华，王婉，等.丁苯酞软胶囊联合依达拉奉对急性脑梗死患者神经功能缺损及血浆纤维蛋白原的影响 J 西部医学，2019;31(6):889-93，899.7张普娟，魏经化，凡鑫.半夏白术天麻汤加减对急性脑梗死的疗效及其对 VEGF、Ang-2 和 NSE 水平的影响 J 贵州医药，2020;44(8):1289-90.8叶建宇，孙自玉，胡薇薇 星形胶质细胞在脑梗死中的作用及相关治疗策略 J 浙江大学学报(医学版)，2018;47(5):493-8.9张烨斐，童娅玲，陈乃云，等.联合检测 D-二聚体和心锚重复蛋白在心房颤动合并急性脑梗死中的诊断价值 J 中华危重症医学杂志(电子版)，2020;13(2):113-7.10刘媛，戴太铖，石鹏.乙酰谷酰胺联合依达拉奉治疗脑梗死的疗效及机制分析 J 河北医学，2019;25(1):86-90.11Sun W，Li G，Zeng X，et al Clinical and imaging characteristics ofcerebral infarction in patients with nonvalvular atrial fibrillation com-bined with cerebral artery stenosis J J Atheroscler Thromb，2018;25(8):720-32.12黎希年，洪荣庆，曾纪超，等.降纤酶治疗急性脑梗死对患者脑血流动力学和神经功能影响 J 四川医学，2019;40(5):500-3.13范亚妮，范维亚，林赫，等.叶酸治疗对老年脑梗死患者认知功能及血清 Hcy 水平的影响 J 海南医学，2020;31(1):13-5.14段卉，杨铁骊，谷云鹏，等.胡黄连苷调控 PAP-1 基因对叶绿素光敏剂诱导脑梗死大鼠脑 TH1/TH2 细胞失衡的影响 J 毒理学杂志，2019;33(4):278-82，288.15杨东娜，张涤，于佳佳.丁苯酞注射液联合依达拉奉对老年急性脑梗死患者细胞因子、血管内皮功能和氧化应激的影响 J 中国老年学杂志，2021;41(3):477-80.16陈峰，吴曦，穆迎涛，等.血府逐瘀汤联合常规治疗对急性脑梗死患者炎症反应、氧化应激、内皮及相关因子的影响 J 海南医学院学报，2019;25(10):762-5，770.17郭忠伟，岳媛媛，邹哲华，等.急性脑梗死患者急性期血清骨桥蛋白和氧化应激指标水平与患者神经损伤和预后的相关性探讨J 临床和实验医学杂志，2020;19(12):1307-10.18雷琦，朱婷鸽，刘蕊.急性脑梗死患者外周血 T 细胞变化与神经损害、炎症及应激反应的相关性 J 海南医学院学报，2019;25(9):654-7.19闰振文，郑眉光，李梅.益气活血通络方对急性脑梗死大鼠炎症因子、氧化应激指标及神经细胞凋亡的影响J 中国中医急症，2020;29(6):957-61.20于晓岚，李光楠，赵婷.葛根素对脑梗死大鼠神经功能神经细胞凋亡及 Jak2/STAT3 信号传送途径的影响 J 山西医药杂志，2020;49(3):243-6.21孙炎，邹玉安，薛茜，等.丁苯酞通过抑制 JNK/p38MAPK 信号通路减少脑梗死大鼠神经细胞的凋亡J 海南医学院学报，2020;26(8):566-70.22徐祖清，王诗洋，王枭，等.橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及 JNK/p38MAPK 信号通路的影响 J 中国老年学杂志，2021;41(2):334-8.2021-12-21 修回(编辑王一涵)Beclin1 在大鼠糖尿病溃疡创面组织中表达变化麻华胆1，2黄庆1，2郑爱甜1，2刘贤彬1，2李政1，2王琳1，2曾娜1，2吴标良1(右江民族医学院1 附属医院内分泌科，广西百色533000;2 研究生学院)摘要 目的观察自噬相关蛋白(Beclin)1 在糖尿病大鼠溃疡创面愈合中的变化，初步探讨 Beclin1 与糖尿病慢性创面愈合的关系。方法SPF 级 Wistar 雄性大鼠 18 只，随机分为对照组、模型组各 9 只。对照组建立常规创面模型，模型组建立糖尿病创面模型。两组分别于模型建立后第 1 天、第 11 天、第 18 天观察创面愈合情况、组织苏木素-伊红(HE)染色病理改变、Beclin1 蛋白及其磷酸化水平、Beclin1 基因表达。结果对照组创面愈合效率、组织病理改善均优于模型组(P0.05);对照组 Beclin1、p-Beclin1 蛋白及 Beclin1 mNA 在创面愈合早期的表达高于模型组，而在愈合晚期的表达低于模型组，差异均有统计学意义(P0.05)。结论Beclin1 在糖尿病慢性创面组织中低表达，可能是糖尿病溃疡创面愈合不良的机制之一。关键词 自噬相关蛋白(Beclin)1;糖尿病;溃疡创面;细胞自噬;细胞凋亡中图分类号 587.1 文献标识码 A 文章编号 1005-9202(2023)03-0611-04;doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2023.03.028基金项目:国家自然科学基金(81960875，81660797);广西自然科学基金(2018GXNSFAA281124)通信作者:吴标良(1978-)，男，博士，主任医师，博士生导师，主要从事糖尿病基础与临床研究。第一作者:麻华胆(1984-)，男，硕士，主治医师，主要从事糖尿病基础与临床研究。Changes of Beclin1 expression in diabetic ulcer wound tissues in ratsMA Hua-Dan，HUANG Qing，ZHENG Ai-Tian，et al116麻华胆等Beclin1 在大鼠糖尿病溃疡创面组织中表达变化第 3 期Department of Endocrinology，Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，Guangxi，China【Abstract】ObjectiveTo observe the changes of autophagy associated protein(Beclin)1 in the process of wound healing indiabetic rats，and to preliminarily study on the relationship between Beclin1 and chronic wound healing in diabetes mellitus MethodsEighteen male SPF-grade Wistar rats were randomly divided into control group and model group，with 9 rats in each group Conven-tional wound model was established in the control group while diabetic wound model was established in the model group The woundhealing，histopathological changes under htoxylin eosin(HE)staining，Beclin1 protein and its phosphorylation level and Beclin1 geneexpression were observed on day 1，11 and 18 in two groups after the model were established esultsThe wound healing efficiencyand histopathological improvement in the control group were better than those in the model group(P0 05)The expressions of Bec-lin1，p-Beclin1 protein and Beclin1 mNA in the control group in the early stage of wound healing were higher than those in the modelgroup，while the expressions in the late stage of wound healing were lower than those in the model group，the differences were statisti-cally significant(P0 05)ConclusionsThe low expression of Beclin1 in diabetic chronic wound tissues may be one of the mecha-nisms of poor wound healing in diabetic ulcer【Key words】Autophagy associated protein(Beclin)1;Diabetes;Ulcer wound;Autophagy;Apoptosis糖尿病溃疡创面为糖尿病常见的并发症，其中糖尿病足溃疡是非外伤性低位截肢的主要原因1，给家庭与社会带来严重的医疗负担。糖尿病溃疡创面属慢性难愈性创面，愈合机制复杂，其潜在机制尚未完全阐明。细胞自噬是一个保守的细胞降解过程，在维持体内平衡和预防营养、代谢和感染介导的应激中起重要作用，自噬与凋亡之间存在错综复杂的关系，在糖尿病溃疡创面的发生发展中扮演重要角色。自噬相关蛋白(Beclin)1 可单独或以 Beclin1-B 细胞淋巴瘤(Bcl)-2 复合物的形式参与自噬和凋亡的调节2。本实验通过观察糖尿病创面愈合过程中 Beclin1 表达的变化，探讨糖尿病溃疡创面愈合不良的机制。1材料与方法1.1实验动物SPF 级 Wistar 雄性大鼠 18 只，体重 230 260 g，由长沙市天勤生物技术有限公司提供。该 实 验 经 右 江 民 族 医 学 院 动 物 伦 理 委 员会批准。1.2主要试剂链脲佐菌素(STZ)北京华越洋生物科技有限公司生产;Beclin1、p-Beclin1(phos Ser14)抗体:Abcam 公司生产;二抗、-actin 抗体:北京中杉金桥生物技术有限公司生产;Beclin1、-actin引物:上海捷瑞生物工程有限公司合成;总 NA 提取试剂盒、cDNA 第一链合成试剂盒、SYB Green 荧光定量检测试剂盒:天根生化科技(北京)有限公司生产。1.3动物分组及创面模型建立大鼠予适应性喂养 1 w 后随机分为对照组、模型组各 9 只。对照组不建立糖尿病模型，在背部备皮后即行全层皮肤切除(面积约 2.5 cm2.5 cm);模型组给予 STZ 诱导建立糖尿病模型，模型复制成功后进行全层皮肤切除，即完成糖尿病创面大鼠模型的建立3。1.4标本采集与处理各组分别于皮肤切除后第1 天、第 11 天、第 18 天各随机取 3 只大鼠，麻醉后剪取创面组织，分别用于制作苏木素-伊红(HE)染色切片及行实时荧光定量-聚合酶链反应(qT-PC)和 Western 印迹检测。1.5HE 染色观察创面组织病理改变创面组织予 10%甲醛溶液固定48 h 后依次用乙醇梯度脱水、二甲苯透明、浸蜡包埋、切片、HE 染色制片，光学显微镜下观察炎症细胞浸润、血管形成及再上皮化情况。1.6Western 印迹检测 Becl