DNA倍体联合宫颈脱落细胞...鳞状上皮细胞病变的诊断价值_徐燕.pdf

DNA 倍体联合宫颈脱落细胞 p16INK4a 对不典型鳞状上皮细胞病变的诊断价值徐燕徐小晶王远航孙勃作者单位:473000河南南阳南阳市中心医院妇产科 摘要 目的探讨 DNA 倍体定量法联合宫颈脱落细胞 p16INK4a 对不典型鳞状上皮细胞病变(ASC)的诊断价值。方法回顾性分析 2021 年 6 月至 2022 年 5 月南阳市中心医院参加宫颈癌液基薄层细胞学筛查的 608 例妇女资料，比较无上皮内病变或恶性病变(NILM)与 ASC 患者的 DNA 倍体定量分析结果、宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测结果。结果ASC 患者异倍体细胞数目3 个的检出率为 21 05%，NILM 异倍体细胞数目3 个的检出率为 0，检出率差异有统计学意义(P 0 05)。ASC 患者p16INK4a 阳性率为 30 08%，NILM 的 p16INK4a 阳性率为 7 02%，检出率差异有统计学意义(P 0 05)。DNA 倍体定量联合p16INK4a 检测对 ASC 的诊断灵敏度为 95 11%，特异度为 70 18%，准确率为 81 09%。结论DNA 倍体定量法联合宫颈脱落细胞p16INK4a 检测对早期诊断 ASC 具有良好价值，可及早筛查有癌前病变的病例。关键词 DNA 倍体定量法;不典型鳞状上皮细胞病变;诊断doi:10.3969/j.issn.1000 0399.2023.01.018不典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cell，ASC)是指子宫颈发生了有别于良性宫颈柱状上皮的病理改变，提示宫颈有鳞状细胞，但意义不能明确，部分 ASC 可能具有宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithe-lial neoplasia，CIN)癌前病变特点1 2。由于 ASC 病理改变多样化，临床结局各不相同，如何早期筛查并确定其病理性质对于今后选择合适的治疗方案尤为重要。近年来，DNA 倍体定量法开始应用于临床宫颈癌筛查，多篇文献3 4 报道 DNA 倍体定量法可较好地鉴别宫颈癌与无恶性病变宫颈细胞，DNA 倍体检测结果值越大、癌变风险也越高。但 DNA 倍体定量法能否用于ASC 的筛查以及后续病理性质的鉴定仍未可知，还需进一步探讨。p16INK4a 是一种肿瘤抑制基因，若p16INK4a 发生甲基化、缺失等突变情况，易引起宫颈细胞癌变5。宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测是目前新兴的检查技术6，多篇文献7 8 报道 p16INK4a 在宫颈病变组织中高表达，对宫颈癌筛查有着较高的灵敏度，但 ASC 患 者 的 p16INK4a 表 达 特 点 尚 不 明 确，p16INK4a 能否评估宫颈病变的严重程度、对 ASC 早期诊断价值有待分析。本研究探讨 DNA 倍体定量法联合宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测在早期诊断 ASC 的应用价值，报道如下。1资料与方法1 1一般资料回顾性分析2021 年6 月至2022 年5月南阳市中心医院参加宫颈癌液基薄层细胞学筛查的608 例妇女临床资料。年龄 24 64 岁，平均年龄(45 29 6 12)岁;已绝经妇女 172 例;孕次 1 6 次，平均孕次(3 72 0 93)次;产次 0 3 次，平均产次(1 96 0 52)次;有宫颈癌家族史 83 例。其中，经液基薄层细胞学诊断为无上皮内病变或恶性病变(no in-traepithelial or malignant lesions，NILM)的妇女 342 例，诊断为 ASC 的患者 266 例。ASC 患者经宫颈组织学病理检查确诊为慢性炎症192 例、CIN 级 46 例、CIN 级 18例、CIN级10 例。CIN 级相当于轻度不典型增生，CIN 级相当于中度不典型增生，CIN级相当于重度不典型增生或原位癌 9。本研究通过南阳市中心医院伦理委员会批准(伦理审查批号:AP2020037)。1 2纳入与排除标准纳入标准:年龄 21 65 岁，有性生活史的女性;液基薄层细胞学、DNA 倍体定量分析、宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测资料齐全。排除标准:既往子宫手术史;恶性肿瘤病史。1 3方法13 1液基薄层细胞学检查嘱咐受检者避开经期采样，一般建议在月经干净后 3 7 天检查，绝经以后的女性在任何时期都可以检查。采样前 3 天禁止性生活，禁止使用阴道药膏，禁止盆浴。对研究对象进行液基薄层细胞学检查及细胞病理诊断10。由 2 名中级职称以上医师进行细胞病理学诊断，若有分歧，请主任医师诊断。88安徽医学第 44 卷第 1 期Anhui Medical Journal2023 年 1 月1 3 2DNA 倍体定量分析常规宫颈细胞采样，方法同上。5 000 r/min 离心 5 min，弃上清，获取宫颈细胞。使用 FACS Canto II 流式细胞仪(美国 BD 公司)检测，打开仪器专用校准软件进行校准，在数据获取分析 Cell Quest 软件调整荧光变异值，标准荧光微球检测的线性荧光 2%提示仪器状态好，否则重新校准仪器。在 Cell Quest 软件中画出 FSC/SSC 散点图、FL2 W/FL2 A 散点图、FL2 A 直方图。调节电压，在FSC/SSC 散点图中找到淋巴细胞，调节 FL2 W/FL2 A 电压通过设门，去除聚集细胞。在 FL2 A 直方图显示 1 中的相比荧光峰，将二倍体荧光峰调至荧光通道为200 道处，得到 DNA 指数。DNA 指数表示细胞核 DNA 含量。诊断标准:阴性:异倍体细胞数 0 个;可疑:异倍体细胞数 1 2 个;阳性:异倍体细胞数3 个10。1 3 3宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测常规宫颈细胞采样并制作细胞图片，具体步骤参考相关文献11。采用免疫组化染色法，p16INK4a 试剂盒(菲尔科生物公司)。首先加入试剂 A，4孵育过夜，后冲洗。加入试剂 B，37孵育45 min，后冲洗。加入试剂 C，37孵育 45 min，后冲洗。加入试剂 D，室温孵育 15 min，终止反应。诊断标准:阳性细胞被染色为棕黄色，阳性细胞数目 10%为 p16INK4a 检测阳性。1 4统计学方法使用 SPSS 22 0 软件进行数据分析。计数资料以例和率表示，组间比较采用 2检验。两种检查方法检出率的比较采用 Mc Nemar s 检验(配对 2检验)。某种方法与金标准的一致性分析采用 Kappa 检验，计算各种检查方法的灵敏度、特异度、准确率。P 0 05 表示差异有统计学意义。2结果2 1NILM 与 ASC 患者的 DNA 倍体定量分析结果比较NILM 与 ASC 患者的 DNA 倍体定量分析的异倍体细胞数目分布差异有统计学意义(2=298 808，P 0 001)。见表 1。表1NILM 与 ASC 患者的 DNA 倍体定量分析结果比较 例(%)宫颈细胞病变类型例数DNA 倍体定量分析的异倍体细胞数目0 个1 2 个3 个NILM342276(80 70)66(19 30)0(0)ASC26631(1165)179(6730)56(2105)注:NILM 为无上皮内病变或恶性病变，ASC 为不典型鳞状上皮细胞。2 2NILM 与 ASC 患者的宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测结果比较ASC 患者宫颈脱落细胞 p16INK4a 阳性率高于 NILM 患者，差异有统计学意义(2=56 102，P 0 001)，见表 2。表 2NILM 与 ASC 患者的宫颈脱落细胞 p16INK4a检测结果比较 例(%)宫颈细胞病变类型例数p16INK4a阴性阳性NILM342318(92 98)24(7 02)ASC266186(69 92)80(30 08)注:NILM 为无上皮内病变或恶性病变，ASC 为不典型鳞状上皮细胞。2 3DNA 倍体定量分析与宫颈脱落细胞 p16INK4a检测对 ASC 的阳性检出率比较配对 2检验显示，DNA 倍体定量分析与宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测对ASC 的阳性检出率比较，差异有统计学意义(2=28 800，P 0 001)。见表 3。表 3DNA 倍体定量与宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测结果比较DNA 倍体p16INK4a阳性阴性合计阳性401656阴性64488552合计1045046082值28 800P 值0 0012 4不同组织学病理 ASC 患者 DNA 倍体定量分析结果慢性炎症患者 DNA 倍体定量分析的异倍体细胞数目3 个的检出率均低于 CIN、CIN、CIN(2=132 741、137 880、166 580，P 均 0 001);CIN、CIN、CIN两两比较差异无统计学意义(2=0 950，P=0 330;2=4 870，P=0 027;2=2 593，P=0 107)。见表 4。表4不同组织学病理 ASC 患者 DNA 倍体定量分析结果 例(%)组织学病理例数DNA 倍体定量分析的异倍体细胞数目0 个1 2 个3 个慢性炎症19231(1615)159(82 81)2(104)CIN460(000)16(3478)30(65 22)CIN180(000)4(22 22)14(77 78)CIN100(000)0(000)10(100 00)2值174464P 值0 001注:CIN 为宫颈上皮内瘤变。2 5不同组织学病理 ASC 患者 p16INK4a 检测结果慢性炎症患者宫颈脱落细胞 p16INK4a 阳性率低于CIN、CIN(2=20 893、29 577，P 均 0 001);CIN患者宫颈脱落细胞 p16INK4a 阳性率低于 CIN、98第 44 卷第 1 期安徽医学2023 年 1 月Anhui Medical JournalCIN(2=9 263，P=0 002;2=16 232，P 0 001);慢性炎症与 CIN比较差异无统计学意义(2=1317，P=0 251);CIN与 CIN比较差异无统计学意义(2=3 382，P=0 066)。见表 5。2 6DNA 倍体定量联合宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测对 ASC 的诊断价值DNA 倍体定量联合宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测对 ASC 的诊断灵敏度为 95 11%，特异度为 70 18%，准确率为 81 09%。见表 6。表 5不同组织学病理 ASC 患者 p16INK4a 检测结果 例(%)组织学病理例数p16INK4a阴性阳性慢性炎症192149(7760)43(2240)CIN4632(6957)14(3043)CIN185(2778)13(7222)CIN100(000)10(100 00)合计266186(6992)80(3008)2值43841P 值0001注:CIN 为宫颈上皮内瘤变。表 6DNA 倍体定量联合宫颈脱落细胞 p16INK4a 检测对 ASC 的诊断价值诊断方式灵敏度(%)特异度(%)阳性预测率(%)阴性预测率(%)准确率(%)Kappa 值DNA 倍体定量88 3580 7078 0789 9084 050 681p16INK4a30 0892 9876 9263 1065 460 247联合诊断95 1170 1871 2794 8681 090 629注:ASC 为不典型鳞状上皮细胞。联合诊断:DNA 倍体定量或者 p16INK4a 有任意一项阳性即为联合诊断阳性。3讨论ASC 是临床宫颈癌筛查中最常见的一种宫颈细胞病变，文献12 13 报道 ASC 患者中存在宫颈恶变的风险约为 10%。在宫颈病变普查中，进行宫颈阴道镜检查和组织病理学活检明显增加临床负担，不符合实际。故而寻找一种可靠的辅助筛查方式鉴别诊断 ASC 与无上皮内病变具有重要意义。本研究分析 DNA 倍体定量法对 ASC 的早期诊断价值，结果显示，NILM 与ASC 患者的 DNA 倍体定量分析结果的异倍体细胞数目分布比较差异有统计学意义，ASC 患者异倍体细胞数目 3 个的检出率明显高于 NILM 患者。分析原因:NILM 患