1株白魔芋软腐病病原菌鉴定及其室内药剂筛选_罗林丽.pdf

11期3137收稿日期：2022-02-22基金项目：贵州省科技计划项目（黔科合服企 2019 4009，黔科合服企 2021 11号，黔科合支撑 2021 一般208）通讯作者：周玉锋（1971-），https:/orcid.org/0000-0002-8189-5859，博士，研究员，主要从事植物病虫害及其防控研究工作，E-mail：第一作者：罗林丽（1991-），https:/orcid.org/0000-0002-1016-7547，主要从事植物病虫害及其防控研究工作，E-mail：linli_1株白魔芋软腐病病原菌鉴定及其室内药剂筛选罗林丽1，2，赵兴丽1，周罗娜1，贺圣凌1，刘思睿1，张欣1，罗可1，周玉锋3*（1贵州省农业科学院生物技术研究所,贵州贵阳550006；2贵州省农业生物技术重点实验室，贵州贵阳550006；3贵州省农业科学院茶叶研究所,贵州贵阳550006）摘要：【目的】明确贵州省兴义市安龙县白魔芋软腐病的病原菌种类，并探究杀菌剂对病原菌株的室内抑制活性，以期为白魔芋软腐病田间防治提供理论依据。【方法】利用平板划线分离法对采集自贵州省安龙县白魔芋种植基地具有软腐病典型症状的白魔芋茎部组织进行病原菌分离和纯化，利用柯赫氏法则对分离所得的菌株进行致病性检测，结合形态特征、16S rDNA序列分析及系统发育进化树分析对病原菌株进行分类鉴定。选取13种常见杀菌剂，采用抑菌圈法测定不同杀菌剂对病原菌的室内毒力。【结果】确定引起贵州省安龙县白魔芋软腐病的病原为环状果胶杆菌（Pectobacterium aroidearum），菌株编号XYmy-A1。室内毒力测定结果显示，供试杀菌剂中有7种药剂对菌株XYmy-A1生长有一定的抑制作用，80%乙蒜素乳油、5%氨基寡糖素 20%乙蒜素微乳剂、25%溴菌腈微乳剂、3%中生菌素可溶液剂和0.3%四霉素水剂在供试浓度下对病原菌生长均具有抑制作用，而1.5%噻霉酮水乳剂和1.8%辛菌胺醋酸盐水剂只有在高浓度下对病原菌生长具有抑制作用；其中，0.3%四霉素对菌株XYmy-A1的抑制效果最强，其对病原菌的抑制中浓度（EC50）为0.1980 mg/L，其次是25%溴菌腈微乳剂，其EC50为9.1359 mg/L。【结论】引起贵州省安龙县白魔芋软腐病的病原菌为环状果胶杆菌，可首选0.3%四霉素水剂和25%溴菌腈微乳剂进一步开展田间防效试验，1.5%噻霉酮水乳剂、3%中生菌素可溶液剂、80%乙蒜素乳油和5%氨基寡糖素 20%乙蒜素微乳剂可作为备选药剂。关键词：白魔芋；软腐病；病原；药剂筛选中图分类号：S436.32文献标志码：A文章编号：2095-1191（2022）11-3137-10南方农业学报Journal of Southern Agriculture2022，53（11）：3137-3146ISSN 2095-1191；CODEN NNXAABhttp:/DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2022.11.014Identification of a pathogen causing soft rot on Amorphophallusalbus and laboratory screening for bactericideLUO Lin-li1，2，ZHAO Xing-li1，ZHOU Luo-na1，HE Sheng-ling1，LIU Si-rui1，ZHANG Xin1，LUO Ke1，ZHOU Yu-feng3*（1Institute of Biotechnology，GuizhouAcademy ofAgricultural Sciences，Guiyang，Guizhou 550006，China；2GuizhouKey Laboratory ofAgricultural Biotechnology，Guiyang，Guizhou 550006，China；3Tea Research Institute，GuizhouAcademy ofAgricultural Sciences，Guiyang，Guizhou 550006，China）Abstract：【Objective】In order to provide reference for field bactericide control，this paper identified the pathogenspecies of Amorphophallus albus soft rot in Anlong County，Xingyi City，Guizhou Province，and explored the indoor in-hibitory activity of several bactericides against the pathogenic strain.【Method】The pathogen were isolated and purifiedfrom diseased stalk of A.albus by streak plate method sampled from planting base in Anlong County，Guizhou Province，the pathogenicity of the isolates were detected by Koch s postulate，the pathogen was identified by morphological charac-teristics，16S rDNA sequence analysis and phylogenetic tree analysis.The indoor toxicity of thirteen common agents topathogen were measured by bacteriostatic circle method.【Result】It was confirmed that Pectobacterium aroidearum wasthe causal agent of the A.albus soft rot，which was found in Anlong County，Guizhou Province，and the strain was namedas XYmy-A1.The results of indoor toxicity measurement indicated that there were seven bactericides of experimental pes-ticides had inhibitory effect on the growth of XYmy-A1，80%ethylicin EC，5%oligosaccharins20%ethylicin ME，25%brothermothingonil ME，3%zhongshengmycin SL，0.3%tetramycin AS had inhibitory effects on the growth ofpathogen at the tested concentration，while 1.5%benziothiazolinone EW and 1.8%xinjunan acetate AS had inhibitory53卷南 方 农 业 学 报 31380引言【研究意义】魔芋（Amorphophallus）是天南星科魔芋属多年生草本植物的总称，栽培学上属薯芋类作物，葡甘聚糖型魔芋是目前发现的仅有几种能合成葡甘露聚糖（Konjac glucomannan，KGM）的经济作物之一（刘佩瑛，2004；代雪凤等，2021）。魔芋KGM因独特的理化特性已被广泛用于食品、医疗、日用化工和农业等领域，具有广阔的市场前景（Yuanet al.，2018；Zhang et al.，2018；李嘉欣等，2020；Duet al.，2021；夏玉婷等，2022）。白魔芋（A.albus）为我国特有种，自然分布于四川南部和云南北部的金沙江干热河谷地区（刘佩瑛，2004），与传统种植的花魔芋（A.konjac）和珠芽魔芋（A.bulbifer）相比，白魔芋在KGM含量和品质上更具优势，且因其在耐热性、抗病性、抗褐变等方面强于花魔芋和珠芽魔芋，所以近年来被引种到贵州、湖北、云南、重庆等地（刘二喜，2016）。近年来，随着魔芋市场需求的不断增长，魔芋人工种植呈现规模化，魔芋病害也越来越严重，软腐病、根腐病等多种病害严重制约着魔芋产量的提高，其中以魔芋软腐病最严重。魔芋软腐病是一种细菌性病害，其侵染性强，魔芋整个生活周期均可染病，该病害传播快、防治难，迄今为止尚无特效防治方法（徐佳欣等，2018）。因此，明确魔芋软腐病病原的种类，并针对性地开展药剂筛选，对魔芋软腐病的田间防控具有重要意义。【前人研究进展】已报道的魔芋软腐病病原主要是果胶杆菌属（Pectobac-terium）和迪基氏菌属（Dickyeya）菌株。最早的研究认为魔芋软腐病病原菌为胡萝卜欧文氏菌胡萝卜亚种 Erwinia carotovora subsp.carotovora，后更名为胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种（P.carotovorum subsp.carotovorum），该菌株会因宿主作物的不同而表现出不同强弱的致病力（沈业寿和储苏，2002；刘佩瑛，2004）。随着分子生物学的发展，相关研究在形态和生理生化分析的基础上，结合16S23S rDNA转录间隔区的序列分析鉴定花魔芋软腐病的病原菌主要是胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种和菊果胶杆菌 P.chry-santhemi，后被更名为菊迪基氏菌（D.chrysanthe-mi）2种（修建华等，2006；王健等，2009；Wu et al.，2011；孙苗苗，2019；Sun et al.，2019）。近年又发现了其他的魔芋软腐病病原，魏环宇等（2020）基于形态学观察和生理生化及16S rDNA序列分析，将从云南珠芽魔芋分离到的软腐病致病菌鉴定为环状果胶杆菌（P.aroidearum）；Wei等（2020）首次报道环状果胶杆菌引起花魔芋软腐病；崔双等（2021）从云南魔芋产区的发病植株中分离到3株魔芋软腐病致病菌，通过形态、致病性和分子特征分析鉴定3株菌株均为环状果胶杆菌；李珩珺（2021）分别从患病的珠芽魔芋和花魔芋中分离软腐病菌，经形态学观察和16S rDNA鉴定确定环状果胶杆菌为花魔芋的致病菌，而导致珠芽魔芋患软腐病的是一株未知菌株，尚未确定。在生产实践中，魔芋软腐病的防治存在一定困难，通过合理密植、轮作、间套作等栽培措施，可在一定程度上降低发病率。实际生产中魔芋软腐病防治主要依赖化学药剂，但多选用广谱杀菌剂，存在一定盲目性，常用药剂有各种含铜制剂、异氰尿酸类杀菌剂、噻唑类等（古洪辉等，2018；王红岩等，2019）。李江涛（2014）研究表明72%农用硫酸链霉素灌根处理对魔芋软腐病的防治效果达89%。和积飞（2018）通过田间药效试验发现20%叶枯唑可湿性粉剂和20%噻菌铜悬浮剂对魔芋软腐病的防治效果优于72%硫酸链霉素可溶性粉剂和53.8%氢氧化铜水分散粒剂。【本研究切入点】本课题组在前期的调查中发现贵州省兴义市安龙县白魔芋种植基地出现了一种细菌性病害，而白魔芋一直被认为是抗病性较强的品种，目前未见白魔芋软腐病方面的研究报道，因此有必要开展白魔芋软腐病病原菌鉴定和防治药剂筛选工作。【拟解决的关键问题】采用平板划线分离法对白魔芋软腐病病原菌进行分离纯化，结合形态、致病性和分子生物学分析鉴定病原菌种类，并探究13种杀菌剂对病原菌的室内抑制活性，以期为白魔芋软腐病田间防治提供理论依据。effects on strain only at high concentration.Among them，0.3%tetramycin had the s