HPLC-DAD法同时测定...配方颗粒中10个标志性成分_陈叶青.pdf

1246 2022 Volume 24 No.12(Serial No.230)基金项目嘉兴市科技计划项目项目编号:2020AY10035;项目名称:以延胡索(元胡)为例对中药配方颗粒质量一致性评价的探索性研究;浙江省中医药科技计划项目(项目编号:2020ZB255;项目名称:天灸药物白芥子散药效物质基础的探索性研究及其潜在质量标志物辨识);浙江省基础公益计划项目(项目编号:LGC21H300003;项目名称:基于 UPLC-Q-TOF-MS 及固相萃取技术对白芥子散在豚鼠体内代谢的研究)作者简介陈叶青，女，副主任中药师，研究方向:中药质量标准研究。E-mail:75432833 *通讯作者张纯，女，主管药师，研究方向:中药质量标准研究。E-mail:zhangchun_检验检测HPLC-DAD 法同时测定延胡索配方颗粒中 10 个标志性成分陈叶青1，范晓良2，张纯1*(1 浙江省嘉兴市食品药品与产品质量检验检测院，浙江 嘉兴 314053;2 浙江中医药大学附属嘉兴中医院，浙江 嘉兴 314001)摘要 目的:建立同时测定延胡索配方颗粒中四氢非洲防己碱、D-四氢药根碱、原阿片碱、延胡索乙素、黄连碱、四氢小檗碱、延胡索甲素、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、去氢延胡索甲素 10 个生物碱成分含量的高效液相色谱测定方法。方法:采用 AgilentZOBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm 250 mm，5 m)，以乙腈-0.1%磷酸溶液(含 0.08%三乙胺)为流动相，梯度洗脱，检测波长 280nm，流速 1.0 mLmin1，柱温 30。结果:10 个成分在上述条件下均达到基线分离，线性关系良好(r 0.999 5，n=5);平均加样回收率为 96.90%100.05%，SD 为 0.7%1.9%(n=6)，8 批延胡索配方颗粒样品中上述 10 个标志性成分的平均含量分别为 0.740、0.488、0.973、7.227、1.242、1.599、1.513、0.720、0.218、4.479 mgg1。结论:本方法操作简便、准确、重复性好，可用于延胡索配方颗粒多成分含量的同时测定，为延胡索配方颗粒质量标准提升提供参考依据。关键词 延胡索配方颗粒;标志性成分;含量测定;高效液相色谱-二极管阵列检测法 中图分类号 917;286 文献标志码 A 文章编号 1009 0959(2022)12 1246 07Simultaneous Determination of Ten Marked Components in YanhusuoFormula Granules by HPLC-DADCHEN Yeqing1，FAN Xiaoliang2，ZHANG Chun1*(1 Jiaxing Institute for Food，Drug and Product Quality Control，Zhejiang Jiaxing 314053，China;2 Jiaxing TCM Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang Jiaxing 314001，China)Abstract Objective:To establish the HPLC method for simultaneous determination of the content of tetrahydrocolumbamine，coryp-almine，protopine，tetrahydropalmatine，coptisine，tetrahydroberberine，corydaline，palmatine hydrochloride，berberine hydrochloride，dehydrocorydaline in yanhusuo fomula granules.Methods:The analysis was performed on Agilent ZOBAX SB-C18column(4.6 mm 250 mm，5 m)by gradient elution of acetonitrile-0.1%phosphoric acid(containing 0.08%triethylamine).The UV detection wave-length was set at 280 nm，and the flow rate was 1.0 mLmin1.The column temperature was 30 esults:The 10 componentsreached baseline separation under the above conditions，and the linear relationship was good(r 0.999 5，n=5).The average recover-ies(n=6)were 96.90%100.05%(SD=0.7%1.9%).The average contents of the 10 components in 8 batches of yanhusuoformula granules were 0.740，0.488，0.973，7.227，1.242，1.599，1.513，0.720，0.218，4.479 mg g1，respectively.Conclusion:The method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the determination of multiple components in yanhusuofomula granules，which can provide reference for the comprehensive evaluation of the quality Key Words Yanhusuo formula granules;Marked components;Content determination;HPLC-DAD延胡索为罂粟科植物延胡索(Corydalis yan-husuo W.T.Wang)的干燥块茎，味辛、苦，性温，具有活血、行气、止痛的功效，可用于治疗胸胁脘腹疼痛、胸痹心痛、经闭痛经、产后瘀阻、跌扑肿痛等 1247 2022 年第 24 卷第 12 期(总第 230 期)病症1，为我省“浙八味”药材之一。目前研究表明延胡索中含有生物碱类、有机酸类、甾体类、糖类、挥发油等多种化学成分，其中活性成分主要为生物碱，如原小檗碱类、阿朴菲类、原阿片碱类、异喹啉类等，以原小檗碱类生物碱居多2。现代药理研究表明此类成分具有止痛3、抗心肌缺血4、抗药物依赖性5、抗肿瘤6、抗血小板聚集7、抗溃疡8、抗抑郁9等药理作用。延胡索配方颗粒是在延胡索饮片基础上直接发展而来，市场需求量大，目前由于延胡索配方颗粒质量控制标准简单，仍存在着企业投料质量有差异、生产工艺不统一等问题，虽然国家药典委员会公示了其质量试行标准，增加了特征图谱检查项，但其定量指标仍为延胡索乙素单一成分，尚不足以全面反映其药效物质基础。为进一步全面反映该配方颗粒质量，本试验通过高效液相色谱结合二极管阵列检测器(highperformance liquid chromatography-diode array detec-tion，HPLC-DAD)对延胡索配方颗粒中四氢非洲防己碱、D-四氢药根碱、原阿片碱、延胡索乙素、黄连碱、四氢小檗碱、延胡索甲素、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、去氢延胡索甲素 10 个标志性成分进行定量分析，建立了同时测定这 10 个成分的方法，为完善延胡索配方颗粒质量控制方法提供实验依据。1仪器与试药1.1仪器Waters e 2695/2998 型高效液相色谱仪，二极管阵列检测器(美国 Waters 公司);XS205DU 电子天平(Met-tler Toledo 公司);Milli-Q eference 超纯水系统(Milli-pore 公司);1-14 高速离心机(德国 Sigma 公司);USC-502 型超声波清洗器(上海波龙电子设备有限公司)。1.2试药对照品四氢非洲防己碱(批号 TD13-240129，纯度 98.0%)、D-四氢药根碱(批号 AF200527-07，纯度 98.0%)、四氢小檗碱(批号 TD-333629，纯度98.0%)、延 胡 索 甲 素(批 号 AF200519-10，纯 度98.0%)、去氢延胡索甲素(批号 AF200415-17，纯度 98.0%)，均购自湖南旭瑞中领生物科技有限公司;对照品原阿片碱(批号 110853-201805，纯度99.6%)、延胡索乙素(批号 110726-201516，纯度99.8%)、黄 连 碱(批 号 112026-201802，纯 度94.0%)、盐酸巴马汀(批号 110732-201309，纯度86.6%)、盐酸小檗碱(批号 110713-201212，纯度86.7%)，均购自中国食品药品检定研究院。水为超纯水，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。延胡索配方颗粒(1 g 相当于饮片 11.1 g)共8 批，其中 6 批为广东一方制药有限公司生产，批号分别为 9100443、9101833、9101843、9101853、9122313、0055213，另 2 批为浙江惠松制药有限公司生产，批号分别为 191101、200501，样品依次编号为 N01 N08。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为 Agilent ZOBAX SB-C18(4.6 mm 250mm，5 m);流动相 A 为乙腈，流动相 B 为0.1%磷酸溶液(含0.08%三乙胺)，梯度洗脱(0 10 min，90%B87%B;10 65 min，87%B75%B;65 66 min，75%B15%B;66 80 min，15%B);检测波长 280 nm;流速1.0 mLmin1;柱温 30;进样量 10 L。在上述色谱条件下10 个成分与其他共有峰得到较好分离，分离度均大于1.5，理论板数均大于3000。2.2溶液的制备2.2.1混合对照品溶液精密称取四氢非洲防己碱、D-四氢药根碱、原阿片碱、延胡索乙素、黄连碱、四氢小檗碱、延胡索甲素、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、去氢延胡索甲素对照品各适量置 25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液，精密吸取 1 mL 置 20 mL量瓶中，加甲醇稀释制成浓度分别为 6.34，4.22，8.43，48.01，13.33，5.53，12.39，6.68，1.73，34.97gmL-1的混合对照品溶液。2.2.2供试品溶液取延胡索配方颗粒适量，研细，精密称取 0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 25 mL，称定重量，超声处理(功率 250 W，频率 25 kHz)25 min，取出，放冷至室温，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，离心，即得。2.2.3阴性样品溶液取制备配方颗粒的辅料为阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。2.3系统适用性试验在“2.1”项下“色谱条件”下，精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液及阴性样品溶液各 10 L，进样测定。结果表明各组分与相邻峰分离完全(见图 1)，分离度均大于 1.5，10 个组分色谱峰对称性良好，对称因子在 0.95 1.05，理论板数以各成分计均大于 3000。1248 2022 Volume 24 No.12(Serial No.230)注:1:四氢非洲防己碱;2:D-四氢药根碱;3:原阿片碱;4:延胡索乙素;5:黄连碱;6:四氢小檗碱;7:延胡索甲素;8:盐酸巴马汀;9:盐酸小檗碱;10:去氢延胡索甲素A:对照品;B:样品;C:阴性样品图 1混合对照品溶液和供试品溶液色谱图2.4线性关系考察精