HPLC-DAD法测定复方鲜竹沥液中9种防腐剂含量_刘艳梅.pdf

1301药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）HPLC-DAD 法测定复方鲜竹沥液中 9 种防腐剂含量刘艳梅，许妍，张静，洪挺江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029摘要目的：建立高效液相色谱-二极管阵列检测器法（HPLC-DAD）同时测定复方鲜竹沥液中 9 种防腐剂的含量。方法：选择 C18 色谱柱，以甲醇为流动相 A，以 0.02 mol/L 乙酸铵溶液为流动相 B，梯度洗脱；苯甲酸和脱氢乙酸检测波长为 230 nm，山梨酸和羟苯酯类检测波长为 256 nm；柱温为 30。结果：9 种防腐剂成分分离效果良好，在考察浓度范围呈良好线性关系（r 0.999 9）；加样回收率（n=6）为 92.2%100.8%，RSD 为 0.2%1.3%；102 批样品的防腐剂使用均符合标准规定。结论：该方法准确可靠，重复性、耐用性较好，可用于复方鲜竹沥液中防腐剂的筛查和定量测定。关键词防腐剂,药物；高效液相色谱-二极管阵列检测器法；复方鲜竹沥液；筛查与含量测定DOI:10.19939/ki.1672-2809.2022.21.06Determination of 9 Preservatives in Fufang Xianzhuli Ye by HPLC-DADLIU Yanmei,XU Yan,ZHANG Jing,HONG TingJiangxi Institute for Drug Control,NMPA Key Laboratory of Quality Evaluation of Traditional Chinese Patent Medicine,Jiangxi Province Engineering Research Center of Drug and Medical Device Quality,Nanchang Jiangxi 330029,China.Abstract Objective:To establish a HPLC-DAD detection method for simultaneous determination of nine preservatives in fufang xianzhuli ye.Methods:C18 column was selected,with methanol as mobile phase A and 0.02 mol/L ammonium acetate solution as mobile phase B,and gradient elution was performed;the detection wavelength of benzoic acid and dehydroacetic acid was 230 nm,and the detection wavelength of sorbic acid and hydroxyphenyl esters was 256 nm;column temperature was 30 .Results:Nine preservatives were well separated and showed a good linear relationship in their respective concentration ranges(r 0.999 9);the recovery rate(n=6)was 92.2%-100.8%,RSD was 0.2%-1.3%;the use of preservatives in 102 batches of samples met the standard requirements.Conclusion:The method is accurate,reliable,repeatable and durable,and can be used for screening and quantitative determination of preservatives in fufang xianzhuli ye.Key Words Preservatives,medicine;HPLC-DAD;Fufang xianzhuli ye;Screening and content determination基金项目：江西省药品监督管理局科研项目（2020JS18）作者简介：刘艳梅，硕士，主管中药师。研究方向：中药质量控制与评价。E-mail:通信作者：洪挺，硕士，副主任药师。研究方向：中药质量控制与评价。E-mail:本品每片含冰片（以龙脑、异龙脑总量计）不得少于 2.41 mg/片。不同企业、相同企业不同批次生产的消栓通络片中冰片含量差异较大，26 批次样品中低于拟定限度（2.41 mg/片）的有 10 批次，合格率为 61.5%，提示部分企业冰片原料质量、投料量可能存在问题，或制剂在生产、储存过程中冰片挥发而导致龙脑和异龙脑含量偏低。建议法定检验标准中增加消栓通络片中冰片的含量测定项；生产企业按规定优化工艺，如将冰片进行包合后再入药，以及改进包衣辅料、包装材料等，以保证其临床用药的有效性。参考文献1 张冉,戴瑛,程新锐,等.消栓通络方有效成分组抗血栓作用及其机制研究 J.中成药,2006,28(10):1479-1481.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2020 年版 一部 S.北京:中国医药科技出版社,2020.1538-1539.3 赵洋洋,郭玉洪,黄汕梅,等.冰片引经作用的探讨及其分子机制研究进展 J.南京中医药大学学报,2021,37(1):150-155.4 刘龙标.“芳香开窍法”的理论研究D.昆明：云南中医药大学,2021.5 陈怡君.基于血脑屏障 Claudins 基因调控的冰片、麝香酮“开窍”机制研究及安全性评价 D.北京:民解放军医学院,2014.6 寇宗奭.本草衍义 M.北京:中国医药科技出版社,2012:91.7 吴雯琰,祝婧,钟凌云,等.中药质量标志物在饮片质量评价及质量标准研究中的应用及探讨 J.江西中医药大学学报,2022,34(3):115-119,124.8 查祎凡,聂黎行,于健东,等.基于对照制剂的牛黄清胃丸中冰片的质量评价 J.中成药,2019,41(11):2753-2756.9 尹雪,焦阳,梅桂雪,等.GC 法比较不同企业脑立清制剂中 3种挥发性成分含量 J.食品与药品,2021,23(6):481-488.收稿日期：2022-08-19 定稿日期：2022-10-271302药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）复方鲜竹沥液为甲类非处方药，由鲜竹沥、鱼腥草等七味中药组成，临床用于痰热咳嗽、痰黄黏稠的治疗1。全国生产该制剂的生产企业共计十家，其中江西企业占据八家，属于江西特色中药制剂。复方鲜竹沥液为液体制剂，液体制剂多以水为溶媒，易被微生物污染而发霉变质，尤其制法中加入矫味剂蔗糖或甜菊素，更易引起微生物的滋生与繁殖。复方鲜竹沥液制法中加入0.3%的苯甲酸钠作为防腐剂，但有关资料显示 pH 值对苯甲酸及其钠盐的抑菌效果影响很大，苯甲酸的最佳抑菌 pH 值为 2.04.0，一般以 5.0 为宜，苯甲酸钠的最适 pH 值为 42-5，而复方鲜竹沥液的 pH 值为 4.86.01。为考察企业是否规范使用防腐剂，本实验选择了中药液体制剂中常用的防腐剂苯甲酸、山梨酸、尼泊金酯类防腐剂（羟苯酯类）以及脱氢乙酸共计 9 种进行考察，建立了HPLC-DAD 法同时测定复方鲜竹沥液中 9 种防腐剂含量,并对 6 家企业共计 94 批样品和 8 批次鲜竹沥原料药进行防腐剂的筛查和定量测定,以期为该制剂的质量控制提供参考。1 材料1.1 仪器Agilent 1260 lnfinity 高效液相色谱仪，DAD检测器，OpenLAB CDS 化学工作站（美国安捷伦公司）；Secura125-1CN 电子天平（德国赛托利斯公司）。1.2 试药苯甲酸（批号：100419-201302，含量：100%），山梨酸（批号：190126-201501，含量：99.6%），羟苯甲酯（批号：100278-201404，含量：100%），羟苯乙酯（批号：100847-201203，含量：100%），羟苯丙酯（批号：100444-201403，含量：99.6%），羟苯丁酯（批号：110792-200503，含量：100%）购自中国食品药品检定研究院。脱氢乙酸（批号：BCBF0386V，含量：98.0%）购自 ALDRICH。羟苯异丙酯（批号 25192，含量：99.4%），羟苯异丁酯（批号 41110，含量：99.7%）购自 AccuStandard。复方鲜竹沥液共 94 批，来源于国家药品抽检计划抽样；鲜竹沥原料药 8 批，由生产企业提供。乙酸铵为分析纯，甲醇为色谱纯，水为超纯水。2 方法与结果2.1 色谱条件及系统适用性试验6-10色谱柱：资生堂 CAPCELL PAK C18（4.6 mm 250 mm，5 m）；流 动 相：甲 醇（A）-0.02 mol/L乙酸铵溶液（B），梯度洗脱（023 min，5%A；2365 min，55%A）；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm（苯甲酸、脱氢乙酸），256 nm（山梨酸、羟苯酯类）；柱温：30 ；进样量：20 L。在上述色谱条件下，9 种防腐剂的理论板数均大于 3 000，分离度均大于 1.5，拖尾因子在 0.951.05。2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备 分别取苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯、羟苯异丙酯和羟苯异丁酯对照品适量，精密称定，加水制成每 1 mL 各含 16 g 的混合对照品溶液，即得。2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取样品 1 mL，置100 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3 方法学验证2.3.1 专属性试验 按处方取各味药材，按制法制备不含防腐剂的阴性样品，再按“2.2.2”项下方法制得阴性样品溶液。取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液分别按“2.1”项下色谱条件进样分析，结果显示阴性无干扰，图谱见图 1。2.3.2 线性关系考察 取各对照品适量，精密称定，加水分别制成 6 个质量浓度的系列溶液，分别精密吸取 20 L，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件分析。以各防腐剂成分浓度（g/mL）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），拟合标准曲线并进行回归分析。结果显示，各防腐剂成分在各自浓度范围内线性关系良好。结果详见表 1。表1 防腐剂线性关系防腐剂回归方程r线性范围/（g/mL）苯甲酸Y=67.977 8X+6.482 41.000 01.51075.52山梨酸Y=254.838 8X-0.826 41.000 01.60080.00脱氢乙酸Y=123.922 2X-32.548 51.000 01.55777.84羟苯甲酯Y=116.127 9X+1.437 81.000 01.58279.08羟苯乙酯Y=110.114 1X-19.053 4 0.999 91.60280.10羟苯异丙酯Y=96.516 4X-14.101 61.000 01.58179.03羟苯丙酯Y=97.292 1X+20.394 21.000 01.56578.24羟苯异丁酯Y=89.193 6X-12.355 91.000 01.61080.50羟苯丁酯Y=91.289 3X-12.029 91.000 01.58679.302.3.3 重复性试验 取样品（批号 B190708），平行精密量取 6 份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，测得苯甲酸平均含量为 0.29%，RSD 为 0.6%，其余 8 种防腐剂均未检出，表明