3株广西麻雀源H9N2亚型...流感病毒对SPF鸡的致病性_李孟.pdf

11期3257收稿日期：2022-02-23基金项目：广西重点研发计划项目（桂科AB21076004）；广西自然科学基金项目（2021GXNSFBA196031）；国家万人计划科技创新领军人才专项（W02060083）；广西八桂学者岗位专项（2019-79）通讯作者：谢芝勋（1963-），https:/orcid.org/0000-0002-1924-9952，研究员，主要从事动物传染病防控技术研究工作，E-mail：xie-第一作者：李孟（1981-），https:/orcid.org/0000-0002-6184-8887，副研究员，主要从事家禽传染病防控技术研究工作，E-mail：3株广西麻雀源H9N2亚型禽流感病毒对SPF鸡的致病性李孟，李丹，谢芝勋*，罗思思，谢丽基，张民秀，黄娇玲，邓显文，曾婷婷，阮志华（广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室，广西南宁530001）摘要：【目的】明确麻雀源H9N2亚型禽流感病毒（AIV）对鸡群的致病性，既有利于了解麻雀在H9N2亚型AIV传播生态链中的作用，对科学防控H9N2亚型AIV的暴发流行也具有重要意义。【方法】选取3株HA基因处于不同进化分支的广西麻雀源H9N2亚型AIV进行SPF鸡致病性试验，将84羽4周龄SPF鸡随机均分为4组（空白对照组和3个感染组）。感染组每组以100 L稀释至106EID50/100 L的病毒液经鼻腔感染16羽SPF鸡，于病毒感染24 h后分别在各感染组放入剩余的5羽SPF鸡作为空白接触组，感染后观察鸡群的临床症状及剖检病理变化，在不同时间点采集器官组织制作病理切片并检测不同器官中的病毒滴度及分布情况。【结果】3株麻雀源H9N2亚型AIV在HA蛋白裂解位点处不存在多个碱性氨基酸插入现象，表现为RSSR GLF，符合低致病性AIV（LPAIV）的典型分子特征；对鸡胚的半数感染量（EID50）在10-6.0/0.2 mL10-6.8/0.2 mL，半数致死量（ELD50）在10-6.8/0.2 mL10-7.2/0.2 mL。3株H9N2亚型AIV均可直接感染SPF鸡，且病毒在不同器官中的滴度及分布存在一定差异；感染SPF鸡后均未表现出明显的临床症状和死亡现象，但在上呼吸道的气管及肺脏出现一定程度的充血和出血、气管纤毛脱落及炎性淋巴细胞浸润等病变。3株麻雀源H9N2亚型AIV感染SPF鸡后的排毒期主要介于第17 d，且能不经体内适应而直接感染鸡群并排毒；3株麻雀源H9N2亚型AIV在SPF鸡各器官中的复制能力存在一定差异，可在气管和肺脏中进行有效复制，而在肝脏、脑、胰腺、胸腺、心脏、盲肠扁桃体及法氏囊中均未检测到对应的病毒。【结论】麻雀源H9N2亚型AIV可直接感染鸡群且具有在鸡群间水平传播的潜在风险，提示在家禽饲养、运输及销售等环节要做好相关的防护措施，切断AIV在野鸟与家禽间的传播途径，减少禽流感暴发造成的经济损失。关键词：禽流感病毒（AIV）；麻雀源；H9N2亚型；HA基因；致病性中图分类号：S852.659.5文献标志码：A文章编号：2095-1191（2022）11-3257-09南方农业学报Journal of Southern Agriculture2022，53（11）：3257-3265ISSN 2095-1191；CODEN NNXAABhttp:/DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2022.11.027Pathogenicity of three H9N2 avian influenza viruses ofGuangxi sparrow origin to SPF chickensLI Meng，LI Dan，XIE Zhi-xun*，LUO Si-si，XIE Li-ji，ZHANG Min-xiu，HUANG Jiao-ling，DENG Xian-wen，ZENG Ting-ting，RUAN Zhi-hua（Guangxi Veterinary Research Institute/Guangxi Key Laboratory of Veterinary Biotechnology，Nanning，Guangxi 530001，China）Abstract：【Objective】To clarify the pathogenicity of H9N2 avian influenza virus（AIV）of sparrow origin to chickens，which was helpful to understand the role of sparrows in the ecological chain of H9N2 subtype AIV transmission，and italso had important significance for scientific prevention and control of the outbreak of H9N2 subtype AIV.【Method】ThreeGuangxi H9N2 AIV virus of sparrow origin with HA genes belonging to different evolutionary branches were selected forSPF chicken pathogenicity test.A total of 84 4-week SPF chickens were randomly divided into 4 groups（blank controlgroup and 3 infection groups）.In each infection group，16 SPF chickens were infected nasally with 100 L virus which53卷南 方 农 业 学 报 32580引言【研究意义】禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）是一种具有囊膜的单股负链RNA病毒，其基因组由8个不同的独立片段组成，遗传不稳定且易发生基因重组和突变（Gu et al.，2017）。近年来，AIV不仅给养禽业造成巨大经济损失，还跨种传播引发越来越严重的公共卫生问题，已引起人们的广泛关注（王秀荣和陈化兰，2015）。野鸟被认为是AIV的天然储存宿主，从家禽体内分离获得的AIV均直接或间接来源于野鸟。因此，开展麻雀源H9N2亚型AIV对家禽的感染风险及致病性研究，对科学有效防控禽流感具有重要意义。【前人研究进展】依据病毒表面抗原的不同可将流感病毒划分为18个HA亚型和11个NA亚型，其中，H1H16亚型可在野鸟和水禽中分离获得，而H17N10和H18N11只在南美的蝙蝠体内检测到（Tong et al.，2013；谭伟和谢芝勋，2015）。H9N2亚型AIV感染鸡群主要引起呼吸道、消化道和生殖系统疾病，进而造成鸡群生长缓慢及产蛋率下降等不良影响，是目前影响我国养禽业健康发展的主要亚型之一（顾敏等，2015；Li et al.，2017）。此外，H9N2亚型AIV直接感染人类的病例不断出现，对公共卫生安全已造成一定威胁（Sun et al.，2020）。H9N2亚型AIV于1966年首次分离于美国威斯康星州的火鸡群，我国于1994年在广东省首次报道（陈伯伦等，1994），随后在国内多个省份暴发流行。王冬冬等（2016）于20102014年从山东省发病鸡群中分离到1200多株H9N2亚型AIV，其中2013年的病毒分离率高达42.30%；丁园（2019）在20162018年从江苏及周边地区规模鸡场发病鸡群中分离获得50多株H9N2亚型AIV。可见，H9N2亚型AIV已给家禽养殖带来巨大的经济损失（顾敏等，2015；Zhu et al.，2018；Li et al.，2019；孙华鹏等，2021）。H9N2亚型AIV在自然界中的宿主范围十分广泛（Wang et al.，2016；Ma et al.，2019；Zhang et al.，2020），在野鸟中一般呈隐性感染，且可随其迁徙及停留在不同国家和地区间进行传播（蒋文明等，2017；Na et al.，2021）。刘晶（2019）对从不同湿地多种雁形目水鸟中分离获得的AIV进行遗传进化分析，结果发现分离株基因与不同迁徙路线上的病毒存在一定程度的基因交流；李玉磊（2020）对从我国主要野鸟栖息地分离到的AIV进行分析，发现其基因来源于北美等候鸟迁徙路线上的多个国家和地区。【本研究切入点】麻雀是一种常见的鸟类，在世界上许多国家广泛分布，通常成群出现在城市或乡村的林木上，有时也飞入鸡舍等动物饲养场所进行觅食（兰敏敏等，2018；贾碧云，2019）。麻雀可感染并携带AIV，且其群体和数量很大，活动范围十分广泛（Han et al.，2012；Broomandet al.，2019），广西处于候鸟迁徙路线上（Peng et al.，2013；Luo et al.，2017），加之特殊的开放式家禽饲养模式，给麻雀与家禽间创造了更多的接触机会，进而造成AIV在不同的禽鸟间进行传播。【拟解决的关键问题】明确麻雀源H9N2亚型AIV对鸡群的致病性，既有利于了解麻雀在H9N2亚has been diluted to 106EID50/100 L，the remaining 5 SPF chickens were placed in each infection group as blank contactgroup after 24 h of infection.Clinical symptoms and pathological changes of the chickens were observed after infection.Tissues were collected at different time points to make pathological sections，virus titers and distribution in different organswere detected.【Result】Three H9N2 subtype AIV of sparrow origindid not have multiple basic amino acid insertions atthe cleavage site of HA protein，showing RSSR GLF，which was consistent with the typical molecular characteris-tics of low pathogenicityAIV（LPAIV）.The median infective dose（EID50）of chicken embryos ranged from 10-6.0/0.2 mLto10-6.8/0.2 mL，and median lethal dose（ELD50）ranged from 10-6.8/0.2 mL to 10-7.2/0.2 mL.All the three H9N2 AIV could di-rectly infect SPF chickens，and there were some differences in the virus titer and distribution of the virus in differentorgans.The SPF chickens did not show any obvious clinical symptoms and death，but there was a certain degree of con-gestion and bleeding in the trachea and lung of the upper respiratory tract