HPLC法同时测定美洲大蠊标准汤剂中6种成分含量_吴津丽.pdf

基金项目:基 于 标 准 汤 剂 的 云 南 省 特 色 中 药 配 方 颗 粒 生 产 工 艺、质 量 体 系 及 等 效 性 研 究(项 目 编 号:202102AA310027)。作者简介:吴津丽(1998)，女，汉族，工艺管理员，研究方向为配方颗粒工艺规程与质量标准。E mail:通信作者:孙福仁(1990)，男，汉族，硕士，工程师，研究方向为配方颗粒工艺规程与质量标准。E mail:HPLC 法同时测定美洲大蠊标准汤剂中 6 种成分含量吴津丽1高晗1曾永祯1吴清雨1陈博涛1李军山1，2，3王亚涛1董博宇1张睿智1孙福仁1*1 神威药业集团有限公司，河北石家庄051430;2 楚雄神威施普瑞药物研究有限公司，云南楚雄675000;3 云南省中药配方颗粒工程研究中心，云南楚雄675000【摘要】目的:建立 HPLC 法同时测定美洲大蠊标准汤剂中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、原儿茶酸的含有量。方法:采用 WATES Symmetry Shield C18色谱柱(250 mm 4.6 mm，5 m);甲醇 0.1%磷酸水作为流动相，梯度洗脱;体积流量0.6 mL/min;检测波长254 nm;柱温20。结果:测定显示尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、原儿茶酸分别在0.041 0.341 g(r=0.9994)、0.097 0.810 g(r=0.9994)、0.020 0.168 g(r=0.9999)、0.277 2.308 g(r=0.9999)、0.016 0.135 g(r=0.9997)、0.131 1.096 g(r=0.9998)范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为99.93%(SD=1.18%)、98.03%(SD=1.05%)、97.17%(SD=1.29%)、100.19%(SD=1.91%)、98.94%(SD=1.11%)、100.70%(SD=1.05%)。十批美洲大蠊标准汤剂各成分含量范围分别为:尿嘧啶 0.14 0.21 mg/g、次黄嘌呤0.22 0.36 mg/g、尿苷0.06 0.08 mg/g、肌苷2.17 3.15 mg/g、鸟苷0.03 0.07 mg/g、原儿茶酸0.35 0.56 mg/g，处于均值的 30%范围内。结论:美洲大蠊标准汤剂含量测定方法准确、可靠，可用于美洲大蠊配方颗粒的质量参考。【关键词】美洲大蠊;尿嘧啶;次黄嘌呤;尿苷;肌苷;鸟苷;原儿茶酸【中图分类号】284.1【文献标志码】A【文章编号】1007 8517(2023)01 0032 05Simultaneous Determination of Six Constituents in Standard Decotion of Periplaneta americana by HPLCWU Jinli1GAOHan1ZENG Yongzhen1WU Qingyu1CHEN Botao1LI Junshan1，2，3WANG Yatao1DONG Boyu1ZHANG uizhi1SUN Furen1*1 Shineway Pharmaceutical Group Ltd，Shijiazhuang 051430，China;2 Chuxiong Shineway Shipurui Pharmaceutical esearch Company Limited，Chuxiong 675000，China;3.TCM Formula Granule Engineering esearch Center of Yunnan Province，Chuxiong 675000，ChinaAbstract:Objective To establish the HPLC method for simultaneously determining the contents of uracil，hypoxanthine，uri-dine，inosine，guanosine，protocatechuic acid in standard decoction of Periplaneta americana Methods The analysis was performedon WATES Symmetry Shield C18column(250 mm 4.6 mm，5 m)The chromatograhic separation was gradient by methanal 0.1%phosphoric acid;The flow rate was 0.6mL/min The column temperature was 20 and the detection wavelength was set at254 nm esults The results showed that Uracil，hypoxanthine，uridine，inosine，guanosine，protocatechuic acid showed good line-ar relationships within the ranges of 0.041 0.341 g(r=0.9994)，0.097 0.810 g(r=0.9994)，0.020 0.168 g(r=0.9999)，0.277 2.308 g(r=0.9999)，0.016 0.135 g(r=0.9997)，0.131 1.096 g(r=0.9998)and their averagerecoveries were 99.93%(SD=1.18%)、98.03%(SD=1.05%)、97.17%(SD=1.29%)、100.19%(SD=1.91%)、98.94%(SD=1.11%)、100.70%(SD=1.05%)，respectively The content ranges of each component in ten bat-ches of Standard Decotion of Periplaneta americana were as follows:0.14 0.21 mg/g of uracil，0.22 0.36 mg/g of hypoxanthine，0.06 0.08 mg/g of uridine，2.17 3.15 mg/g of inosine，0.03 0.07 mg/g of guanosine，0.35 0.56 mg/g of protocatechuicacid The content ranges were in the range of the mean 30%Conclusion The method is simple and accurate，which can be usedfor the quality control of Periplaneta americana dispensing granulesKey words:Periplaneta americana;Uracil;Hypoxanthine;Uridine;Inosine;Guanosine;Protocatechuic Acid美洲大蠊为蜚蠊科昆虫美洲蜚蠊 Periplaneta a-mericana(Linnaeus)的干燥全体。本品味咸，性寒，入心、肝、脾、肾经。具有健脾消疳，活血通脉，利水消肿，敛疮生肌的功效。内用治疗胁痛、癥瘕、疳积、心悸、气喘、水肿;外用治疗水火烫伤、各种创伤及溃疡 1。美洲大蠊药材分布广泛 2。其富23中国民族民间医药2023 年1 月第32 卷第1 期Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2023，Vol.32，No.1含蛋白质、脂肪酸、核苷类、多糖、昆虫神经肽、异黄酮、油脂等多种化学成分 3 8。核苷类物质是构成 NA 和 DNA 的前体物质，也是抗肿瘤和抗病毒药物的中间体 8。核苷类物质检测是美洲大蠊药材及加工品检测的主要指标，温慧敏等 9 采用 HPLC 法测定美洲大蠊饮片中尿嘧啶、肌苷的含量;黄博等 10 利用 HPLC 法同时测定美洲大蠊药材中尿嘧啶、肌苷、次黄嘌呤三种成分;赵从琪等 11 对美洲大蠊药材脱脂处理并测定 5 种核苷类成分;马雪伟等 12 建立 HPLC 法测定美洲大蠊提取物冻干粉中 9 种核苷类成分。上述文献的研究对象集中于美洲大蠊药材及其提取物，尚未有关于美洲大蠊标准汤剂的相关报道。本文以不同产地的美洲大蠊饮片为原料，制备了 10 批美洲大蠊标准汤剂。采用 HPLC 法同时测定尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、原儿茶酸 6 种成分含量，为美洲大蠊配方颗粒质量控制提供参考。1仪器与材料1.1仪器WATES Symmetry Shield C18色谱柱(250 mm 4.6 mm，5 m);岛津高效液相色谱仪:LC 20AT 泵，SPD M20A 型检测器，SIL 20A 自动进样器，CTO 20AC 柱温箱，岛津 LabSolutions色谱工作站;CPA225D 型电子分析天平(北京赛多利斯);JM A5002 型电子天平(余姚市纪铭称重校验设备有限公司);KH 7200DE 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);DHG 9140A 型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);502B 旋转蒸发仪(上海申科生物技术有限公司);LGJ 12 压盖型真空冷冻干燥机(河南兄弟仪器设备有限公司);荣事达养生药膳壶(合肥荣事达小家电有限公司);0.45 m 有机系/水系针头式滤器(ASC，AMEICAN SCIENTIFIC);1.2对照品尿嘧啶(上海源叶生物科技有限公司，批号:T14A8X33880，纯度98%);尿苷(中国食品药品检定研究院，批号:110887 202104，纯度为99.6%);鸟苷(中国食品药品检定研究院，批号:111977 201501，纯度为 93.6%);次黄嘌呤(乐美天医药/德思特生物，批号:DST200305，纯度98%);肌苷(中国食品药品检定研究院，批号:140669 202007，纯度为 99.2%);原儿茶酸(中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院，批 号:110809 201906，纯 度 为 97.7%)。甲 醇(MeOH)、乙 腈(ACN)均为 HPLC 级(美国 ACS 公司);水为纯化水;其他试剂均为分析纯。1.3药材来源及标准汤剂制备方法1.3.1药材10 批美洲大蠊饮片来源于云南、四川、安徽、山东 4 个产区，经原河北省药品检验所孙宝惠老师鉴定，为蜚蠊科昆虫美洲蜚蠊 Peripla-neta americana(Linnaeus)的干燥全体。1.3.2标准汤剂根据 中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求(征求意见稿)中相关规定，确定美洲大蠊标准汤剂制备工艺为:取饮片100 g，加水煎煮二次，一煎加 8 倍水，浸泡 30min，煮沸，保持微沸煎煮 30 min，200 目筛网过滤，立即冷却至室温;二煎加 6 倍水，煮沸，保持微沸煎煮 20 min，200 目筛网过滤，合并两次煎液，立即冷却至室温，低温真空浓缩，浓缩液冷冻干燥，密封包装，即得。2方法与结果2.1色谱条件WATES Symmetry Shield C18(柱长为250 mm，内径为4.6 mm，粒径为5.0 m);以甲醇为流动相 A，0.1%磷酸水为流动相 B，梯度洗脱(0 9 min，0%0%A;9 10 min，0%2%A;10 15 min，2%2%A;15 20 min，2%5%A;20 35 min，5%6%A;35 55 min，6%10%A;55 60 min，10%11%A);柱温 20;体积流速 0.6 mL/min;进样量 10 L;检测波长为254 nm。理论板数按肌苷峰计算应不低于10000。2.2对照品溶液的制备精密称取尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟