2023年正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺.doc

正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺 目 的 ： 优 化 荔 枝 中 总 黄 酮 的 提 取 工 艺 。 方 法 ： 采 用 芦 丁为 对 照 品 ， 利 用 紫 外 分 光 光 度 法 检 测 荔 枝 草 中 总 黄 酮 的 含 量 。 在 单 因 素 试 验 考 察 溶 剂 的 基 础 上 ， 采 用 L 9 〔 3 4 〕 正 交 试 验 法 选 择 荔 枝 草 中 总 黄 酮 的 提 取 工 艺 ， 并 以 溶 剂 浓 度 、 提 取 温 度 、 溶 剂 用 量 和 提 取 时 间 为 考 察 因 素 。 结 果 ： 最 佳 提 取 工 艺 为 ： 添 加 20 倍 量 的 7 0 % C 2 H 5 O H ， 8 0 ℃ 提 取 1 2 0 分 钟 ， 总 黄 酮 提 取 率 为 6 . 8 6 % 。 结 论 ： 优 化 的 提 取 工 艺 简 便 、 准 确 、 重 现 性 好 ， 可 用 于 工 业 生 产 荔 枝 草 总 黄 酮 提 取 。 关键词 荔枝草；正交试验；总黄酮；提取工艺 荔 枝 草 是 唇 形 科 鼠 尾 草 属 植 物 荔 枝 草 S a l v i a p l e b e i a R . B r . 的 全 草 ， 其 主 要 成 分 有 黄 酮 、 酚 类 、 木 质 素 、 甾 醇 和 挥 发 油 等 成 分 [ 1 ] 。 荔 枝 草 性 凉 ， 具 有 清 热 解 毒 ， 凉 血 利 尿 ， 消 除 水 肿 的 作 用 。 可 以 治 疗 乳 腺 炎 、 痔 疮 肿 痛 、 出 血 、 跌 打 损 伤 ， 痈 疮 湿 疹 [ 2 ] ； 临 床 用 于 治 疗 急 性 扁 桃 体 炎 、 阴 道 炎 、 宫 颈 糜 烂 等 [ 3 ] 。 本 文 主 要 通 过 单 因 素 试 验 和 正 交 试 验 ， 对 荔 枝 草 叶 总 黄 酮 的 提 取 工 艺 进 行 了 优 化 。 1 材料 1.1 仪器 试药 荔枝草药品来自广西大明山，芦丁〔中国食品药品检定研究院〕，试剂均为分析纯。 2 方法和结果 总黄酮含量测定[5] 对照品芦丁溶液的制备 精密称取芦丁的标准品10.9 mg，将标准品放入50mL容量瓶中，再在容量瓶中滴加70% C2H5OH，超声将标准品溶解，再用 C2H5OH定容至刻度线，即得0.218 mg/mL的芦丁标准品溶液。 供试品溶液的制备 称取荔枝草全草2g，将荔枝草全草撕碎放入500mL圆底烧瓶中，再在容量瓶中参加70% C2H5OH 20mL，将容量瓶置于水浴锅上连续回流提取2次，每次1.5h，趁热滤过，合并滤液稀释后，倒入100mL容量瓶中，用C2H5OH定容至刻度线，即得样品待测液。 最大吸收波长的选择 将荔枝草提取液、对照品溶液和70% C2H5OH 溶液分别精密吸取一定量并分别放置于三个25mLmL的5％ NaNO2mL 10％的Al(NO3)3mL 4%的NaOH，再用70% C2H5OH溶液至容量瓶刻度线，摇匀后放置15 min。最 后 按 照 紫 外 可 分 光 光 度 法 对 波 长 进 行 试 验 ， 在 4 0 0 ～ 7 0 0 n m 处 ，波 长 范 围 内 扫 描 。结果，荔枝草提取液在500nm波长处存在最大吸收，芦丁溶液502nm处存在最大吸收峰，空白对照品在此处不存在吸收峰，所以确定最大吸收波长是500nm〔图A、B、C〕。 2.1.4 标准曲线的制作 分别精密吸取1、2、4、6、8mL的芦丁对照品溶液，将其滴参加三个25mLmL 5％的NaNO2mL 10％的Al(NO3)3mL 4%的NaOH，再用70% C2H5OH溶液至容量瓶刻度线，摇匀后放置15 min。并采用相应的试剂为空白，可以在500nm波长处检测吸光度〔A〕。以吸光度〔A〕为纵坐标，用质量浓度〔c〕为横坐标，绘制标准曲线，就可以得到回归方程为A=0.0111c+0.0085(R= 0.9991，n=5〕。结果说明，芦丁质量浓度在~69.76μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系。见表1-1，图1-1。 2.1.5 精密度试验 精密吸取芦丁对照品溶液5份，按2.1.3项显色，连续测定5次其吸光度，并记录，RSD=0.4％〔<2%〕，结果见表1-2 。 2.1.6 稳定性试验 精密吸取荔枝草溶液1mL，并将其滴加于25mL容量瓶中，按2.1.3项显色后，存放在室温下，在0，10，20，30，40，50，60min后，测定荔枝草溶液吸光度，RSD＝0.62%〔<2%〕 。结果说明，荔枝草溶液中总黄酮含量在60min内显色稳定，结果见表1-3。 2.1.7 重复性试验 精密称定荔枝草药材样品6份，每份1g，按2.1.2项下方法制备6份，并按2.1.3项显色，测定吸光度6 次，RSD=0.12%〔<2%〕，说明重复性良好，结果见表1-4。 2.1.8 加样回收率试验 采用加样回收法，精密称取含量的荔枝草样品适量，再精密参加芦丁对照品适量，按供试品溶液的制备项下操作，测定样品6份，结果见表1-5。 2.2 单因素法优选总黄酮提取工艺 2.2.1 乙醇浓度对总黄酮含量的影响 在提取温度为80℃，提取时间为1.5h，料液比为1：10条件下，称取8 g荔枝草5份，分别考察50%、60%、70%、80%、90%，不同C2H5OH浓度对荔枝草总黄酮提取率的影响，结果如以下图。当C2H5OH浓度为50%～70％时，总黄酮的提取率会随着乙醇浓度的升高而上升，当C2H5OH浓度>70% 时，总黄酮的提取率会随着乙醇浓度的升高，开始下降，因此，将C2H5OH浓度定为70％进行后续试验，结果见图2-1。 图2-1 乙醇浓度对总黄酮提取率的影响 2.2.2 料液比的影响 在提取时间为1.5 h，提取温度为80℃，C2H5OH浓度为 70％的条件下，称取8g荔枝草5份，撕碎置于容量瓶中，分别参加5、10、15、20、25倍的C2H5OH，考察对荔枝草总黄酮提取率的影响。结果如以下图，料液比在1:5~1:15之间时，总黄酮含量随着溶剂用量的增加，而呈增大趋势；料液比为1:20时，总黄酮含量到达最大；当料液比为25倍时，总黄酮含量随着乙醇用量的增加。而呈现减少趋势，因此选择料液比在20倍进行后续试验。结果见图2-2。 图2-2 料液比的影响 2.2.3 提取温度对总黄酮提取率的影响 在乙醇浓度为70％，提取时间为1.5h，料液比为1：20的条件下，称取8g荔枝草5份，考察50℃、60℃、70℃、80℃、90℃对荔枝叶总黄酮提取率的影响，结果如以下图，当提取温度为50～70℃时，总黄酮提取率随着温度的升高而急速上升，当提取温度为70℃～80℃时，总黄酮提取率随着温度的升高而缓慢上升，当提取温度为80℃～90℃时，总黄酮提取率随着温度的升高而略微下降。因此选择提取温度设为80℃，结果见图2-3 。 图2-3 提取温度对总黄酮提取率的影响 2.2.4 提取时间对荔枝草中总黄酮含量的影响 在料液比为1：20，提取温度为80℃，乙醇浓度为 70％的条件下，称取8g荔枝草5份，将荔枝草全草撕碎，并将其置于容量瓶中，分别考察30、60、90、120、150 min不同提取时间，对荔枝草总黄酮提取率的影响，结果如以下图，当提取时间在0．5~2h区间时，总黄酮的提取率会随着时间的延长，而不断上升，当提取时间在2h时，总黄酮的提取率最大，当提取时间>2h时，总黄酮的提取率趋于平稳，结果见图2-4。 图2-4 提取时间对荔枝草中总黄酮含量的影响 2.3 正交试验法优选荔枝草总黄酮提取工艺 通过正交试验，考察以影响提取荔枝草中总黄酮提取率的主要因素：乙醇浓度(A〕，料液比(B〕，提取温度(C)，提取时间〔D〕，因素水平见表3-1，试验安排及结果见表3-2，方差分析见表3-3。 由表3-2可知，各因素的影响顺序分别为：提取温度>提取时间>料液比>乙醇浓度。乙醇浓度的影响最小，将此列作为误差进行方差分析，由表3-3方差分析，由结果显示提取温度、提取时间有统计学意义(P<0.05)，料液比无显著性差异〔P>0.05〕，从节省角度考虑为10倍，所以最正确条件为A1B1C2D2，即10倍量60%乙醇，温度80℃，提取120 min。 3 讨论 荔枝草是一种常见的民间的中草药，荔枝草经过科学研究发现，其具有很多明显的治疗作用，特别是荔枝草独特具有的抗氧化活性能力，它还可以治疗多种疑难杂症疾病，如痔疮、疖、痈、皮肤瘙痒等疾病。 中药中成分很多，而且各个成分之间有可能相互作用，还有可能生成稳定、亚稳定的复杂化合物，这些情况的发生，都会给中药成分的分析带来困难，在一种待测提取物经常含有相似化学成分的化合物，所以，我们要经过多重的提取、净化的过程，才可以用于检测成分含量，这些提取净化的过程要尽可能的保存待测化学成分，别离出非待测成分，使中药质量的含量尽可能的准确。 对于中药而言，一味中药中含有十几种或者更多种化学成分组成，没有方法对所有的成分进行检测，，在检测化学成分时，首先要测定其主要的有效成分，其次是毒性成分、有害物质。此外，还要注意的是如果有效成分含量特别低的时候，由于仪器分析的局限性，灵敏性，检测限，我们应换一种含量进行检测。 3.3 含量测定方法验证就是为了证明我们检测成分时用的分析方法是否符合检测要求，对于荔枝草的精密度实验，稳定性实验，重复性实验，可以作为分析方法的评估标准。在近几十年来，荔枝草已经进行了深入的研究，对其的化学成分、作用机理、物质根底取得了重要进展，但是，总的来说，研究荔枝草的物质根底比拟欠缺。但是，很难对其中某一成分进行研究，所以，需要大量的实验和实践对其进行研究。 参考文献 [1] 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社，1999：6 193． [2] 喻樊，荔枝草化学成分药理学及其研究进展[J].安徽农学通报，2023，14(22):69—70. [3] 蒋毅，罗思齐，郯民实.荔枝草活性成分的研究[J].中国医药工业杂志，1987，18(8):349. [4] 林华铭,杨梦成,谢飞,黄晓孟,翟锐锐. 正交试验法优选刺芫荽总黄酮提取工艺的研究[J]. 河南化工,2023,34(07):19-21. [5] 周浓,张玉莲,郭冬琴,张采琼,杨晓艳. 滇重楼总黄酮提取工艺的正交试验法优选[J].时珍国医国药,2023,25(03):581-588.