17年陈案被害人衣物检出DNA基因型1例_高金林.pdf

法 医 学 杂 志 2022年 10月 第38卷 第5期17年陈案被害人衣物检出DNA基因型1例高金林，乔伟，徐庆泰州市公安局刑事警察支队，江苏 泰州 225300关键词：法医遗传学；接触性DNA；磁珠法；短串联重复中图分类号：DF795.2 文献标志码：B doi：10.12116/j.issn.1004-5619.2020.500904文章编号：1004-5619（2022）05-0687-031案例1.1 简要案情张某，女，某年3月12日下午失踪，当年4月4日，当地一村民在自家放置杂物的猪圈中发现死者尸体。死者衣着整齐，面朝墙躺于猪圈内侧。由于当时侦破条件有限，本案一直未能获得有效的破案线索，也未获得嫌疑人的 DNA 分型。17 年后，应公安部“云剑2020”行动的要求，对张某被杀案现场检材进行再次检验。1.2 检验方法1.2.1 检材前处理送检检材为 1件尼龙外套、1条帆布牛仔裤、1个黑色皮质双肩包。鉴于检材情况和案件检验要求，将3个检材都分成若干区域，检材的粗糙面用粘取器粘取、光滑面用棉签擦拭的方式采集样本。外套上提取73 份检材、牛仔裤上提取 79 份检材、双肩包上提取106份检材，合计258份。1.2.2 检材DNA提取上述样本均使用微量检材 DNA 提取试剂盒（烟台澳斯邦生物工程有限公司）提取，过夜孵育后，在LET-8-PURE DNA 提取工作站（烟台澳斯邦生物工程有限公司）上进行DNA提取纯化。具体步骤如下：（1）裂解。将检材放入套管，套管放入 2.0 mL微量离心管中，加入 500 L裂解液、15 L蛋白酶 K，混合均匀；56 振荡保温处理混合液，8 h以上过夜孵育。之后 套 管 放 入 PicoTM 17 微 量 离 心 机（美 国 Thermo Fisher Scientific公司），10 000g离心3 min；去掉载体和套管，此时消化液全部在 2.0 mL 微量离心管内。（2）将离心管和相应提取、洗涤、洗脱试剂按照 LET-8-PURE DNA提取工作站要求放置到工作站指定位置，运行工作站。（3）工作站将纳米磁珠、结合液、消化液进行充分混合，按照结合、洗涤、洗脱的步骤自动提取，最终得到提取液。提取液作为模板，进行 STR扩增。1.2.3 STR分型使 用 VeriFilerTM Plus STR 扩 增 试 剂 盒（美 国Thermo Fisher Scientific公司）对258份检材中的23个常染色体 STR 和 2 个性别标记 Amelogenin 和 Y-InDel进行检测。根据常染色体STR检验结果，在样本质量较高的男性 DNA样本中使用 6色荧光检测体系 YfilerTM Plus PCR 扩增试剂盒（美国 Thermo Fisher Scientific公司）进行 Y-STR检测，扩增体系为 10 L，均按照试剂盒说明书推荐流程操作。扩增反应在 9700型 PCR仪（美国 Applied Biosystems 公司）上进行，扩增产物在3500型基因分析仪（美国Applied Biosystems公司）上进行毛细管电泳分离，并利用 GeneMapper ID-X v1.4软件（美国 Thermo Fisher Scientific公司）进行分型判读。1.3 检测结果1.3.1 常染色体STR检验结果经检验，在外套衣领、外套正面左侧、牛仔裤右裤腿正面、牛仔裤左裤腿反面、牛仔裤正面左口袋、双肩包左包带正面、黑色皮质双肩包背带上的皮扣等29份检材中检测出常染色体 STR 有效分型（表 1）。其余检材中，部分提取物获得混合常染色体 STR 分型结果，部分提取物未获得常染色体STR分型结果。案例报道 作者简介：高金林（1976），男，警务技术副高级任职资格，主要从事法医物证检验及研究；E-mail：引用格式：高金林，乔伟，徐庆.17年陈案被害人衣物检出DNA基因型1例J.法医学杂志，2022，38（5）：687-689.To cite：GAO J L，QIAO W，XU Q.DNA genotype detected from the clothes of the victim in the 17 year old case：A case reportJ.Fayixue Zazhi，2022，38（5）：687-689.687Journal of Forensic Medicine,October 2022,Vol.38,No.5表1 29份检材VeriFilerTM Plus扩增试剂盒分型结果Tab.1Genotypes generated from VeriFilerTM Plus PCR amplification kit of 29 samplesSTR基因座D3S1358vWAD16S539CSF1POD6S1043AmelogeninD8S1179D21S11D18S51D5S818D2S441D19S433FGAD10S1248D22S1045D1S1656D13S317D7S820Penta EPenta DTH01D12S391D2S1338TPOX外套衣领16/1717/189/129/1113/20X11/1229/31.213/1413/1411/1413.2/14.222/2413/1515/1715/16108/1115/1610/126/919/2019/258/12外套正面左侧15/16/1717/189/11/129/10/11/1211/12X/Y11/12/1429/30/31.213/14/16/1810/13/1411/1413.2/14.2/15/15.221/22/23/2413/15/1615/16/1714/15/168/108/10/11/1213/179/10/126/7/9/9.319/2019/22/24/258/9/12牛仔裤右裤腿正面16/1717/189/129/1113/20X11/1229/31.213/1413/1411/1413.2/14.222/2413/1515/1715/16108/1115/1610/126/919/2019/258/12牛仔裤左裤腿反面15/16/1716/17/189/1110/11/12/1311/12/14/18X/Y10/11/13/1429/3014/15/16/1810/1311/1414.2/15/15.221/22/2315/1615/1614/15/168/10/1110/1212/179/127/8/9.318/19/2022/248/9牛仔裤正面左口袋15/16/1716/17/189/11/129/10/11/1211/12/13/20X/Y11/12/1429/30/31.213/1413/1411/1413.2/14.2/15/15.221/22/23/2415/1615/161714/15/168/9/108/10/11/1212/15/16/179/10/126/7/9/9.319/2019/22/24/258/12双肩包左包带正面15/1617-X/Y11/1430-11/1415/15.221/23-15/1614/158/10-97/9.319/20-双肩包背带上的皮扣16/1717/189/129/1113/20X11/1229/31.213/1413/1411/1413.2/14.222/2413/1515/1715/16108/1115/1610/126/919/2019/258/12注：“-”表示未检出。1.3.2 Y染色体STR检验结果运用YfilerTM Plus PCR扩增试剂盒对258份检材中经常染色体 STR 检验后疑似含有 Y 染色体的检材进行 Y-STR 检测，包括尼龙外套、帆布牛仔裤、黑色皮质双肩包等共32份检材提取液。Y-STR检验结果显示，在牛仔裤左裤腿反面2份检材获得了同样的有效分型（表 2），28 份获得混合 Y-STR 分型，2 份未获得Y-STR分型。双肩包左包带正面检出 1名男性个体的 13个常染色体STR分型结果。外套正面左侧、牛仔裤左裤腿反面、牛仔裤正面左口袋上均检出2名个体的常染色体STR混合分型结果，结合女性常染色体STR分型结果进行拆分，综合考虑色谱峰的峰高与数目等情况，得到 1 名男性个体的 VeriFilerTM Plus 试剂盒 23 个常染色体STR分型结果，并与黑色皮质双肩包左包带正面检出基因座上的分型结果一致。在牛仔裤左裤腿反面 2份检材中检出同一名男性个体的 Y-STR 分型结果。将黑色皮质双肩包左包带正面的常染色体STR 结果入库比对，比中多地 DNA 数据库中的同一嫌疑人徐某。经审查，嫌疑人对其抢劫、强奸（未遂）杀害受害人的犯罪事实供认不讳。2讨论随着 DNA 检验技术灵敏度的提高，接触性生物表2 牛仔裤检材YFilerTM Plus PCR扩增试剂盒分型结果Tab.2Genotypes generated from YFilerTM Plus PCR amplification kit of samples on jeansY-STR基因座DYS576DYS389DYS635DYS389DYS627DYS460DYS458DYS19Y GATA H4DYS448DYS391DYS456DYS390牛仔裤左裤腿反面1912202818918151220101524Y-STR基因座DYS438DYS392DYS518DYS570DYS437DYS385DYS449DYS393DYS439DYS481DYF387S1DYS533牛仔裤左裤腿反面111435171512/173012132436/3811 688法 医 学 杂 志 2022年 10月 第38卷 第5期检材中 DNA 分型被成功解析的可能性逐渐增加，其在案件中发挥的作用也越来越大。此次在17年前的受害人衣物上检出嫌疑人的 Y-STR单一分型结果和可拆分的 2名个体的常染色体 STR混合分型，彰显了DNA检验技术的快速发展。此次检验中检材取样位点多，工作量大，自动化DNA提取设备及其配套提取试剂的应用为检验工作提供了便利，最终在受害人的衣物上成功检出嫌疑人的STR分型。本案使用 LET-8-PURE DNA 提取工作站和微量检材 DNA 提取试剂盒进行 DNA 提取，其中微量检材 DNA提取试剂盒中包含悬浮性好且捕获率高的纳米磁珠和微量 DNA回收效率高且去抑制能力强的配套试剂，是陈旧性微量检材 DNA 提取的关键。本案中，由于检材陈旧且量微，在裂解过程中适当延长时间，并适当增加微量检材 DNA 提取试剂盒中的结合缓冲液促进 DNA 和磁珠结合，纯化过程采用原位移除废液的方式减少磁珠损失，最终从陈旧的微量检材中获取到足够的 DNA 模板。总体来讲，检验灵敏度的提高对案件检验至关重要，但也对实验室的防污染提出了更高的要求。为了尽最大可能避免外源性DNA 污染，实验室根据条件应建立 3条检测线，即人员样本检测线、常量检材检测线、微量检材检测线，同时，各检测线之间的仪器尽量不通用且实验室内部空间必须设置缓冲区。衣物类检材由于接触人体皮肤，长期摩擦会遗留人体脱落的上皮细胞，如衣领、拉链、袖口、腋下等部位为有可能留下生物检材的常见部位1，这为进行DNA 检测提供了可能。然而，衣物类检材属于接触类检材，所含DNA属于低拷贝模板，实践中也存在多人穿同一件衣服或者衣服与他人皮肤摩擦的可能，所以衣物检材检出混合 DNA 也较为常见。综合来看，该类检材存在以下特点：（1）数量较少的脱落表皮细胞几乎散在分布于较大面积的载体上，这给实际搜集脱落细胞带来困难2；（2）当载体表面较为粗糙、结构较为松散时，其与脱落细胞和污物结合紧密，此时脱落细胞可能难以洗脱3；（3）脱落细胞多为角化的上皮细胞，由于保存时间较长或者其所处的环境中包含各种洗涤剂、灰尘、细菌等不利条件的影响，后续提取到的 DNA 量微或已降解4，这将增大 DNA 的提取与富集难度。此外