UPLC-MS_MS法同时...测定消渴丸中3种成分的含量_蔡振世.pdf

蔡秉昌，赖宏亮.台湾香檬果皮成分分析、抗氧化及抑制氧化氮活性之研究.作物、环境与生物资讯，（）：.谷乐，刘韶松，何丽娟，等.台湾香檬果皮川陈皮素分离制备及其抗肿瘤活性研究.亚热带植物科学，（）：.侯春宁，张雪松，李国林.川陈皮素对口腔鳞状细胞癌细胞 增殖、迁移和侵袭的影响.口腔医学，（）：.张阳，姜华茂.川陈皮素对人前列腺癌 细胞生长的抑制作用及其机制.吉林大学学报（医学版），（）：.，.，（）：.，.，.，（）：.，.，（）.，：.，.（）.，：.，.，（）.梁奕尧，陈柏忠，杨玉华，等.中国药典 版陈皮质量标准修订的研究.中国医院药学杂志，（）：.赖瑞云，黄珺梅，林建忠，等.台湾香檬在厦门地区的引种初报.亚热带植物科学，（）：.承晨，李莉.法同时测定代代花中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的含量.药学与临床研究，（）：.法同时快速测定消渴丸中 种成分的含量蔡振世（泉州市食品药品检验所，福建泉州）摘要：目的 建立一种 法同时快速测定消渴丸中葛根素、格列本脲、五味子酯甲含量的方法。方法 采用 柱（.），以.甲酸水溶液（含 乙酸铵）乙腈为流动相梯度洗脱，流速：.，柱温，进样量 。质谱采用（电喷雾离子源），以正离子多反应监测模式定量分析。结果 葛根素、格列本脲、五味子酯甲的线性范围分别为.、.、.（为.），平均加标回收率分别为.、.、.，为.、.、.（）。结论 该方法操作方便、快捷、灵敏度高、准确度好，可一次性实现多个不同成分的检测。关键词：；消渴丸；葛根素；格列本脲；五味子酯甲中图分类号：文献标识码：文章编号：（）作者简介：蔡振世。学历：硕士。职称：主管药师。（，）：，.（.）（.）；.，.（），.，.，.，.（.）；.，.，.；.，.，.（），.，.：；海峡药学 年 第 卷 第 期 消渴丸现行标准收载于中国药典 年版（一部）中，是一款中西药复方制剂，由葛根、地黄等 味中药及格列本脲组成。标准中采用 种不同的高效液相色谱法分别对葛根素及格列本脲进行含量测定及相应的含量均匀度检查，操作步骤较为繁琐，不利于快速检验。同时仅采用薄层色谱法以南五味子对照药材、五味子甲素对照品对南五味子组分进行鉴别，无法进行含量测定。中国药典 年版（一部）中，采用高效液相色谱法测定南五味子中的五味子酯甲含量，表明五味子酯甲的含量测定对于南五味子的质量控制至关重要。因此本研究选取消渴丸中含有的 种中药成分（葛根素及五味子酯甲）及功效确切的化学药（格列本脲）进行含量测定，建立一种 法同时快速测定这 种成分，更快速、更方便、更全面地对消渴丸进行质量控制。报道如下。材料和方法实验.试药葛根素（批号：）、五味子酯甲（批号：）、格列本脲（批号：），均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈均为色谱纯（品牌：）；甲酸为色谱纯（品牌：）；乙酸铵为色谱纯（品牌：）；氯化钠为分析纯（品牌：上海国药）；水为超纯水（实验室纯水仪自制）。.样品 消渴丸，广州白云山中一药业有限公司生产，批号为：，。.仪器 超高效液相色谱串联质谱仪（美国 公司，），多样品组织研磨仪（上海净信实业发展有限公司，）。.色谱与质谱条件.色谱条件：色谱柱：（.）；流动相：相，.甲酸水溶液（含 乙酸铵）；相，乙腈；梯度洗脱（见表）；柱温：；流速：.；进样量：。表 梯度洗脱时间（）流动相（）流动相（）.质谱条件：离子源：（电喷雾离子源），正离子模式；扫描方式：多反应监测；气帘气（）：；离子化电压（）：；温度（）：；喷雾气（）：；辅助加热气（）：；进样开始后切换进废液，后切换进质谱进行检测。各化合物质谱参数见表。表 消渴丸中 种成分的质谱参数名称母离子（）定量离子（）碰撞能量（）定性离子（）碰撞能量（）去簇电压（）葛根素.格列本脲.五味子酯甲.混合对照品溶液的制备精取 种对照品分别置 个 量瓶中，加入乙腈，超声处理 后，放冷，用乙腈定容至刻度，摇匀，即得各对照品溶液。分别精取葛根素对照品溶液.、格列本脲对照品溶液.、五味子酯甲对照品溶液.，置同一 量瓶中，用纯水定容至刻度，摇匀，配制成混合对照品溶液，混合对照品溶液各化合物浓度见表。表 混合对照品溶液各化合物浓度名称对照品溶液浓度（）混合对照品溶液浓度（）葛根素.格列本脲.五味子酯甲.供试品溶液的制备取消渴丸 丸，精密称定，研细，取约.（平均丸重），精密称定，置 具塞离心管中，加入 氯化钠及 纯水，涡旋振荡 ，再精密加入 乙腈，称量，置多样品组织研磨仪中，振荡 ，超声处理 ，放冷，称量，用乙腈补足损失，摇匀，离心，精取上清液，置 量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，滤过，即得。实验结果.专属性试验 精密移取混合对照品溶液 置 量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，滤过，即得系统适用性对照品溶液。分别取系统适用性对照品溶液、供试品溶液，按“.”项下测定，记录结果（见图）。结果显示供试品与对照品中各组分色谱峰保留时间一致，且各组分间无干扰，表明专属性良好。.线性关系试验分别精密移取混合对照品溶液.、.、.、置 量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，滤过，即得系列对照品溶液。按“.”项下测定，记录结果。以对照品浓度（）为横坐标，各成分峰面积（）为纵坐标，进行线性回归，分别计算得到 种成分的线性方程。结果见表，表明 种成分在各自的线性浓度范围内呈现良好的线性关系。表 珍菊降压片中 种成分的标准曲线名称回归方程线性范围（）相关系数（）葛根素.格列本脲.五味子酯甲.表 消渴丸中 种成分的重复性试验名称平均含量（丸）（）（）葛根素.格列本脲.五味子酯甲.重复性试验 取批号为 的供试品，按“.”项下方法平行制备 份，并按“.”项下测定，记录色谱峰面积，计算，同时代入“.”项下线性回归方程中计算平均 .含量，结果见表，表明该方法的重复性符合分析方法验证指导原则。.供试品溶液稳定性试验取“.”项下其中一份供试品溶液，并于制备后、分别按“.”项下条件测定，记录色谱峰面积并计算 个时间点各个成分的。结果葛根素、格列本脲、五味子酯甲色谱峰面积的 分别为.、.、.（），表明该方法制备的供试品溶液中 种成分在 内的稳定性较好。.加样回收率试验 精密称定批号为 的供试品粉末 份，每份约.，分别置 具塞离心管中，添加按“.”项下测得的平均含量的 的对照品，并按“.”项下方法制备，按“.”项下测定，计算得平均加标回收率。结果见表，表明该方法的准确性符合分析方法验证指导原则。图 消渴丸对照品溶液（）、供试品溶液（）提取离子流色谱图注：.葛根素；.格列本脲；.五味子酯甲表 消渴丸中 种成分的平均加标回收率及 名称平均加标回收率（）（）（）葛根素.格列本脲.五味子酯甲.供试品中 种成分的含量测定取 个不同批次供试品，按“.”项下供试品溶液的制备，分别制得供试品溶液，并按“.”项下测定，同批次平行测定 份，外标法计算含量，结果见表。表 消渴丸中 种成分的含量测定（丸）批号葛根素格列本脲五味子酯甲.供试品溶液制备条件的选择提取试剂分别考察 甲醇、甲醇、乙腈、乙腈，提取条件分别考察超声提取时间（、）及研磨仪提取时间（、），正交试验结果表明，采用乙腈溶剂提取，依次经过研磨仪提取 ，超声提取 ，即可以较短时间提取到含量最高的 种成分。.稀释溶剂的选择分别考察了以甲醇、乙腈、水为稀释溶剂进行对照品及样品的稀释定容，实验中发现稀释溶剂为甲醇或乙腈时，当进样量增加，则葛根素的色谱峰会出现分叉及出峰时间前移的现象，存在溶剂效应，因此选择水为稀释定容溶剂，同时进样量设定为 。.质谱条件的选择查阅文献，葛根素的质谱条件选择：离子源为（电喷雾离子源），负离子模式，定量离子对为.，或.。实验中发现葛根素在负离子模式及正离子模式中均有响应，且灵敏度均良好。考虑到本研究中其它 种成分均为正离子模式，若葛根素选择负离子模式建立检测方法同时进行正负离子模式切换检测对仪器寿命影响较大，因此葛根素与其它两种成分均选择正离子模式选择定量及定性离子对建立检测方法，实验结果表明葛根素色谱峰丰度良好，结果准确可靠，正离子模式同样适用于葛根素的检测。结论目前，消渴丸的检验标准中分别采用 种不同的高效液相方法测定葛根素及格列本脲，检测方法操作繁琐、步骤繁多，耗时长，且对五味子酯甲无含量检测项目。本研究采用 法同时对消渴丸中的 种成分进行快速含量测定，方法操作方便、快捷、灵敏度高、准确度好，可一次性实现多个不同成分的检测，结果准确可靠，可以作为消渴丸质量控制的重要参考。参考文献国家药典委员会编.中国药典（一部）.北京：中国医药科技出版社，：，.国家药典委员会编.中国药典（四部）.北京：中国医药科技出版社，：.汤丹丹，张焦，王帆，等.法同时测定小鼠生物样品中葛根素和梓醇的浓度.药物分析杂志，（）：.海峡药学 年 第 卷 第 期张婷，王文彤，陈玲.同时测定心安宁胶囊中的 种药效成分.中国现代应用药学，（）：.邓俊杰，谢浙裕，何丽娜.法同时测定杞菊地黄丸（浓缩丸）中 种成分的含量.西北药学杂志，（）：.刘文静，王子健，马杰，等.测定清热凉血方中 种成分的含量.中药材，（）：.关皎，马莹慧，刘娇，等.法同时测定五味子中 个活性成分的含量.中药新药与临床药理，（）：.崔悦，高兴，韩丽琴，等.法同时测定黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量.中药新药与临床药理，（）：.不同厂家川贝清肺糖浆中防腐剂测定方法的建立及考察林 娟（三明市检验检测中心，福建三明）摘要：目的 建立川贝清肺糖浆中防腐剂的含量测定方法，以考察该品种防腐剂的添加情况。方法采用 柱（.，），以甲醇.乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱，检测波长 和，用 检测器，流速为，柱温 。结果 防腐剂苯甲酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯在相应质量浓度范围内线性关系均良好，回收率均满意；个不同厂家均能准确测出所添加的防腐剂含量。结论 建立的方法准确、高效，可用于考察不同厂家川贝清肺糖浆中各种防腐剂的添加情况。关键词：川贝清肺糖浆；防腐剂；高效液相色谱；含量测定中图分类号：文献标识码：文章编号：（）作者简介：林 娟，女。职称：主管药师。主要从事药品检验工作。（，）：，.（.，）；.；.，；.，.：；川贝清肺糖浆由枇杷叶、苦杏仁、川贝母、麦冬、地黄、甘草、桔梗、薄荷等 味药组成，具有清肺润燥、止咳化痰功效，临床上用于风热感冒引起的燥咳，咽干，咽痛。现行标准为卫生部药品标准，只要求性状、相对密度及糖浆剂通则项检查。对于多剂量灌装的糖浆剂为防止贮存期间发霉、酸败或者变质等问题可根据需要加入防腐剂，若用量不足难以达到抑制微生物生长繁殖的效果，摄入量过大则会对人体造成危害。有相关文献对该品种主药或者辅料蔗糖进行含量测定，但未见有对其中添加的防腐剂的研究报道。本次监督性抽验的 个厂家样品中主要添加了苯甲酸（钠）和羟苯酯类（羟苯乙酯、羟苯丙酯），中国药典 年版四部糖浆剂仅规定苯甲酸的用量不得过.（其钠盐的用量按酸计），羟苯酯类的用量不得过.，为了考察不同厂家川贝清肺糖浆中防腐剂的添加种类及含量，保证用药 .