不同厂家川贝清肺糖浆中防腐剂测定方法的建立及考察_林娟.pdf

张婷，王文彤，陈玲.同时测定心安宁胶囊中的 种药效成分.中国现代应用药学，（）：.邓俊杰，谢浙裕，何丽娜.法同时测定杞菊地黄丸（浓缩丸）中 种成分的含量.西北药学杂志，（）：.刘文静，王子健，马杰，等.测定清热凉血方中 种成分的含量.中药材，（）：.关皎，马莹慧，刘娇，等.法同时测定五味子中 个活性成分的含量.中药新药与临床药理，（）：.崔悦，高兴，韩丽琴，等.法同时测定黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量.中药新药与临床药理，（）：.不同厂家川贝清肺糖浆中防腐剂测定方法的建立及考察林 娟（三明市检验检测中心，福建三明）摘要：目的 建立川贝清肺糖浆中防腐剂的含量测定方法，以考察该品种防腐剂的添加情况。方法采用 柱（.，），以甲醇.乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱，检测波长 和，用 检测器，流速为，柱温 。结果 防腐剂苯甲酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯在相应质量浓度范围内线性关系均良好，回收率均满意；个不同厂家均能准确测出所添加的防腐剂含量。结论 建立的方法准确、高效，可用于考察不同厂家川贝清肺糖浆中各种防腐剂的添加情况。关键词：川贝清肺糖浆；防腐剂；高效液相色谱；含量测定中图分类号：文献标识码：文章编号：（）作者简介：林 娟，女。职称：主管药师。主要从事药品检验工作。（，）：，.（.，）；.；.，；.，.：；川贝清肺糖浆由枇杷叶、苦杏仁、川贝母、麦冬、地黄、甘草、桔梗、薄荷等 味药组成，具有清肺润燥、止咳化痰功效，临床上用于风热感冒引起的燥咳，咽干，咽痛。现行标准为卫生部药品标准，只要求性状、相对密度及糖浆剂通则项检查。对于多剂量灌装的糖浆剂为防止贮存期间发霉、酸败或者变质等问题可根据需要加入防腐剂，若用量不足难以达到抑制微生物生长繁殖的效果，摄入量过大则会对人体造成危害。有相关文献对该品种主药或者辅料蔗糖进行含量测定，但未见有对其中添加的防腐剂的研究报道。本次监督性抽验的 个厂家样品中主要添加了苯甲酸（钠）和羟苯酯类（羟苯乙酯、羟苯丙酯），中国药典 年版四部糖浆剂仅规定苯甲酸的用量不得过.（其钠盐的用量按酸计），羟苯酯类的用量不得过.，为了考察不同厂家川贝清肺糖浆中防腐剂的添加种类及含量，保证用药 .安全，笔者筛选出 种防腐剂作为检测目标，参考相关文献，建立了一种高效准确的方法，利于该品种的质量控制及安全监管。实验仪器与材料.仪器与设备 型高效液相色谱仪，配置 型 检测器（美国安捷伦科技有限公司）；电子分析天平（）；型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。.药品与试剂 川贝清肺糖浆均为监督性抽验样品，分别为葵花药业（襄阳）隆中有限公司、漳州片仔癀药业股份有限公司等 个不同厂家。对照品苯甲酸（批号，含量.），羟苯甲酯（批号，含量.），羟苯乙酯（批号，含量），羟苯丙酯（批号，含量.），羟苯丁酯（批号，含量），所有对照品来源均为中国食品药品检定研究院，流动相甲醇为色谱纯（广东光华科技股份有限公司），其他甲醇和乙酸铵为分析纯，水为超纯水。测定方法与结果.色谱条件色谱柱：柱（.，）；流动相：以甲醇（）.乙酸铵溶液（过.水系微孔滤膜抽滤，超声 ，）按照表 梯度洗脱；流速：；柱温：，检测波长：苯甲酸 ，羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯均为 ，进样体积：。表 高效液相色谱梯度洗脱条件时间（）甲醇（）乙酸铵溶液（）.溶液的制备.对照品溶液的制备：取苯甲酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯对照品适量，精密称定，加 甲醇溶解并定量稀释制成每 含苯甲酸 、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯均为 的混标溶液，即得。.供试品溶液的制备：用内容量移液管精密吸取样品，置 容量瓶中，用 甲醇清洗移液管内壁，洗液并入容量瓶中，加 甲醇适量，超声 ，放冷并定容至刻度，摇匀，滤过，续滤液用.有机系微孔滤膜滤过，即得。.阴性对照溶液的制备：按照川贝清肺糖浆标准 的处方比例及制法，制备不含防腐剂的阴性样品，按照“.”项下方法制备得到阴性对照溶液。.方法学考察.专属性考察：取混标溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按“.”项色谱条件进样检测分析，考察样品中是否有干扰待测成分的色谱峰及目标峰的分离度。结果显示（见图），样品中主药成分及其他辅料不干扰防腐剂的测定且目标峰峰形及分离度良好，理论塔板数均。图 川贝清肺糖浆 色谱图.混合对照品液；.阴性对照溶液；.模拟阳性供试品；.苯甲酸；.羟苯甲酯；.羟苯乙酯；.羟苯丙酯；.羟苯丁酯.线性关系考察及检出限：精密称取对照品羟苯甲酯.、羟苯乙酯.、羟苯丙酯.、羟苯丁酯.，置同一 容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为羟苯酯类储备液；再精密称取苯甲酸对照品.置 容量瓶中，精密吸取羟苯酯类储备液 加入到同一容量瓶，加 甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀，作为线性 号液；精密吸取线性 号液 置 容量瓶中，加 甲醇稀释至刻度，摇匀，作为线性 号液；之后同线性 号液稀释倍数，逐级稀释得到线性 号、号、号、号液。精密吸取上述一系列线性溶液，按“.”项色谱条件进样测定，记录色谱图。以对照品质量为横坐标（），对应峰面积（）为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程。以检测色谱峰信噪比 时对应量为检测限，结果见表。.精密度试验：取“.”项下混标溶液，按“.”项色谱条件连续进样 次，根据色谱峰面积计算。结果苯甲海峡药学 年 第 卷 第 期酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯峰面积的（）分别为.、.、.、.、.，表明精密度良好。表 线性关系表名称回归方程相关系数线性范围（）检测限（）苯甲酸.羟苯甲酯 .羟苯乙酯 .羟苯丙酯 .羟苯丁酯 .表 回收率测定结果（）名称取样量（）样品中含量（）对照品加入量（）测得量（）回收率（）平均值（）（）苯甲酸.羟苯甲酯.羟苯乙酯.羟苯丙酯.羟苯丁酯.重复性试验：取川贝清肺糖浆样品（葵花药业集团（襄阳）隆中有限公司，批号），按照“.”项下方法平行配制 份供试品液，按“.”项色谱条件进样分析，测得苯甲酸、羟苯乙酯含量平均值分别为.、.，（）分别为.，.，在本样品中加入羟苯甲酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯对照品适量作为测定所有成分的重复性试验模拟阳性样品，按照“.”项下方法平行配制 份模拟阳性供试品液，按“.”项色谱条件进样分析，测得苯甲酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯含量平均值分别为.、.、.、.、.，（）分别为.，.、.、.、.，说明本方法的重复性较好。.稳定性试验：取.项下川贝清肺糖浆模拟阳性样品，按照“.”项下方法制备供试品液，分别在室温下放置、进样测定，计算苯甲酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯色谱峰峰面积的（）分别为.，.，.，.，.，说明供试品溶液在 内稳定性较好。.加样回收率试验：取.项下川贝清肺糖浆模拟阳性样品，精密吸取.置 容量瓶中，平行吸取 份，精密加入苯甲酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯对照品适量，照“.”项下方法同法处理，得加样供试品液。进样测定，结果见表。.样品的测定 用本文建立的方法对抽检的 个不同厂家生产的川贝清肺糖浆样品进样测定，计算不同防腐剂的含量（外标法），结果见表。表 不同厂家防腐剂含量测定结果生产企业名称苯甲酸（）羟苯甲酯（）羟苯乙酯（）羟苯丙酯（）羟苯丁酯（）葵花药业（襄阳）隆中.漳州片仔癀.广西葛洪堂.湖北金太子.葵花药业湖北武当.江西铜鼓仁和.武汉鑫瑞.广西大力神.湖北诺得胜.注：“”为未检出 讨论与结论.检测波长的确定 通过 检测器对苯甲酸进行全波长扫描，一般选取最大吸收时的波长，最终确定苯甲酸的检测波长为，羟苯酯类检测波长参考中国药典 年版四部药用辅料项下其含量测定，确定为 。因此最终选用分时段切换波长法对 种防腐剂进行同时测定。.色谱条件的优化对于同时测定 种防腐剂的色谱条件，在流动相选择上分别对甲醇水、甲醇.磷酸，乙腈.磷酸以及甲醇.乙酸铵做了预实验，以甲醇水或者甲醇 .磷酸为流动相时分离度和峰形无法满足要求，以乙腈.磷酸和甲醇.乙酸铵为流动相时分离度和峰形较好，因乙腈毒性相对较大且成本较高，最终以甲醇.乙酸铵作为本实验的流动相。在梯度洗脱条件上，曾尝试流动相甲醇（）乙酸铵（），（），（），.（），（），（），（），（），（），结果是羟苯丁酯与相邻峰不能完全分开，更换色谱柱亦是如此，不进样梯度洗脱此峰仍然存在，固在此洗脱程序上微调，分别考察了在、时间内流动相甲醇（）乙酸铵（），（），（），结果在 内完成梯度变化时羟苯丁酯与其分离效果最佳，其余各目标峰的分离度也符合要求，因此最终选择“.”项下梯度洗脱条件。.提取溶剂的选择 预实验时分别选用甲醇、甲醇水溶液、乙醇对川贝清肺糖浆进行提取，发现选用甲醇提取效果优于乙醇，而 甲醇水溶液和甲醇提取效果无显著差别，固选取 甲醇为提取溶剂。.样品检测的结果讨论通过本文建立的方法测得 个厂家防腐剂的用量均符合要求。羟苯酯类又称尼泊金类，本次实验发现有一厂家的说明书中标明含有苯甲酸、尼泊金，未具体说明是尼泊金类中的哪一防腐剂，通过本文所建立的方法检测出为羟苯乙酯；还有另一厂家说明书辅料项下列出了其他辅料但未标明有添加防腐剂，同样通过此方法检测出其中含有苯甲酸和羟苯乙酯，建议应当加强对企业标签说明书的管理。.结论 本方法准确、高效，适用于川贝清肺糖浆中苯甲酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯的含量测定，可作为川贝清肺糖浆质量控制的分析方法，用于同时考察不同厂家川贝清肺糖浆中各种防腐剂的添加情况，为药品的安全监管提供有力可靠的支撑。参考文献龚雪媛，赵静芳，沈子博，等.基于 技术检测川贝清肺糖浆中掺伪山麦冬的研究.海峡药学，（）：.卫生部药品标准中药成方制剂.第二册，.陈建琴.川贝清肺糖浆中苦杏仁苷、甘草苷和甘草酸的双波长 法测定.中国医药工业杂志，（）：.谢莹莹，粟贵，赵勇，等.法测定川贝清肺糖浆种蔗糖的含量研究.海峡药学，（）：.国家药典委员会编.中国药典（年版四部）.北京：中国医药科技出版社，：.尕藏卓玛，杨丽琼，达娃卓玛.测定小儿清热止咳口服液中苯甲酸的含量.中国民族民间医药，（）：.蔡锦雄，庞赛，梁爱仙，等.高效液相色谱法测定复方氨酚美沙糖浆中抑菌剂含量.药品评价，（）：.张艳，杨颖.高效液相色谱法测定诺氟沙星滴眼液中羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯含量.中国药业，（）：.国家药典委员会编.中国药典（年版四部）.北京：中国医药科技出版社，：.响应面法优化灯盏花乙素的提取工艺郑小力（宁德市食品药品检验检测中心，福建宁德）摘要：目的 采用响应面法优化灯盏花乙素的提取工艺。方法 基于单因素试验结果，采用回流提取方法，以甲醇浓度、提取时间、料液比为自变量，设计灯盏花乙素提取工艺的响应面试验，确定最佳提取条件。结果 最终确定灯盏花乙素的最佳提取工艺是：甲醇浓度，加热回流提取时间.，料液比，灯盏花乙素提取率理论值与实际验证值分别为.、.，相对误差为.。结论 模型理论值与实验值接近，表明通过响应面法建立的模型可行性较好，建立的灯盏花乙素最佳提取工艺稳定可行。关键词：灯盏花；灯盏花乙素；提取；单因素试验；响应面试验中图分类号：文献标识码：文章编号：（）（，）：.，.：，.海峡药学 年 第 卷 第 期