QuEChERS-液相色谱...质谱法测定谷物中噻霉酮残留_叶慧娟.pdf

食品工业 2023 年第44卷第 1 期 285 分析检测QuEChERS-液相色谱-串联质谱法测定谷物中噻霉酮残留叶慧娟*，黄象金，杨建涛肇庆市食品检验所（肇庆 526040）摘要建立谷物中噻霉酮残留的液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法。谷物样品经水浸泡后用乙腈提取,利用QuEChERS方法进行净化。以乙腈和0.1%甲酸水作为流动相梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式检测。噻霉酮在0.150.0 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999;方法检出限0.03 g/kg,定量限0.1 g/kg,在0.1,10.0和50.0 g/kg添加水平下的平均回收率为84.8%94.2%,相对标准偏差(n=6)为1.5%3.4%。该方法简便快速,准确灵敏,适用于谷物中噻霉酮的测定。关键词液相色谱-串联质谱法;QuEChERS;谷物;噻霉酮;残留Determination of Benziothiazolinone Residue in Cereal by QuEChERS-Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometryYE Huijuan*,HUANG Xiangjin,YANG JiantaoZhaoqing Institute for Food Control(Zhaoqing 526040)Abstract A method for the determination of benziothiazolinone residue in cereal was established by liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS).The cereal samples were soaked with water and then extracted with acetonitrile before purified by the QuEChERS method.The analyte was separated with the mobile phases of acetonitrile and water(containing 0.1%formic acid),and detected by MS/MS with positive electrospray ionization(ESI+)in multiple reaction monitoring(multiple reaction monitoring,MRM)mode.There was a good linear relationship with the mass spectrometric response,and the correlation coefficients were all greater than 0.999 in the concentration of 0.1-50.0 ng/mL.The limits of detection and quantitation were 0.03 g/kg and 0.1 g/kg.The recoveries from spiked samples were 84.8%-94.2%,with relative standard deviation of 1.5%-3.4%.The method was easy,fast,accurate and sensitive,which was suitable for the determination of benziothiazolinon in cereal.Keywords liquid chromatography-tandem mass spectrometry;QuEChERS;cereal;benziothiazolinone;residue噻霉酮（benziothiazolinone）化学名称为1,2-苯并异噻唑啉-3-酮，是一种由我国独立研发的新型噻唑类有机杂环类杀菌剂，具有内吸性能好、传导性强、剂型先进、低毒和安全等特点，被广泛应用于农23 李乔敏,张毅,吕金燕,等.利用主成分分析法分析乳腺癌术后患者的血清表面增强拉曼光谱J.激光生物学报,2012,21(3):257-262.24 BAI H,LI H Y,HAN Z B,et al.Label-free assessment of replicative senescence in mesenchymal stem cells by Raman microspectroscopyJ.Biomedical Optics Express,2015,6(11):4493.25 MLLER C,DAVID L,CHI V,et al.Detection of thiabendazole applied on citrus fruits and bananas using surface enhanced Raman scatteringJ.Food Chemistry,2014,145:814-820.26 BICHARA L C,ALVAREZ P E,et al.Structural and spectroscopic study of a pectin isolated from citrus peel by using FTIR and FT-Raman spectra and DFT calculationsJ.Infrared Physics and Technology,2016,76:315-327.27 周鸿昆.基于SERS技术的中药成分检测D.天津:天津大学,2016.28 陈秋媚.基于表面增强拉曼光谱技术的狼疮号方配伍规律研究D.广州:广州中医药大学,2021.29 彭艳,张丽颖,金阳,等.山药及麸炒山药拉曼指纹图谱分析J.中成药,2021,43(12):3403-3408.30 俞允,何雁,陈荣,等.基于拉曼光谱的不同产地黄芪鉴别研究J.江西中医药大学学报,2015,27(3):57-60.31 XU Y M.Raman spectroscopy in application of structure bioligyM.Beijing:Chemical Industry Press,2005:3.32 DOLLISH F R,FATELEY W G,BENTLEY F F.Characterist Raman frequency of organic compoundsM.Beijing:Chinese Chemistry Society,1980.33 刘影,汪晓娟,刘龙.拉曼光谱在三七中药识别中应用J.海峡药学,2020,32(8):60-62.34 董晶晶,陈娟,戈延茹,等.激光拉曼光谱法无损鉴别三七及其伪品J.激光与光电子学进展,2014,51(5):204-208.食品工业 2023 年第44卷第 1 期 286 分析检测作物细菌性和真菌性病害的预防和治疗，可有效防治黄瓜霜霉病、梨黑星病、苹果疮痂病、柑橘炭疽病、葡萄黑痘病等1-3。但过量使用会导致食品中残留噻霉酮，危害人体健康。已报道的噻霉酮残留检测方法主要是液相色谱法。于福利等4对黄瓜和土壤分别用丙酮和二氯甲烷提取，经固相萃取净化，液相色谱法测定噻霉酮的最低检出质量分数是0.01 mg/kg。赵子丹等5对小麦及土壤分别用丙酮和乙腈提取，液相色谱法测定噻霉酮的最低检测质量分数是4.010-3 mg/kg。陈国珍等3通过高效液相色谱-紫外-可见分光光度法对制剂中的噻霉酮有效成分进行定量分析，噻霉酮的最低检出量为2.5106 g。但液相色谱法的灵敏度低、选择性差，而且为了排除杂质峰的干扰，样品预处理耗时复杂，有机溶剂成本高、毒性大。因此，开发快速、简单、科学、准确的噻霉酮检测技术具有广阔的应用前景。QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged and Safe）是一种快速的样品前处理技术，具有安全、回收率高、分析速度快等特点，被广泛使用于农产品和食品中农药残留的检测分析6-14。已报道仅有粟有志等6采用改良的QuEChERS方法测定果蔬中及其制品中噻霉酮残留，尚缺乏谷物中噻霉酮残留分析方法的报道。试验采用QuEChERS技术提取谷物中的噻霉酮，建立液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）测定谷物中噻霉酮残留的方法。国内关于食品中噻霉酮残留的检测方法还没有相应的国家及部颁标准，国外也未见报道，因此对国家标准或行业标准中噻霉酮的分析检测具有一定参考价值。1材料与方法1.1材料与试剂噻霉酮标准物质（纯度99%，Fiut standand公司）；C18、乙二胺-N-丙基硅烷（primary secondary amine，PSA，美国Aglient公司）；氯化钠、无水硫酸钠（均为分析纯，广州化学试剂厂）；乙腈（质谱级，德国Merck公司）。1.2仪器与设备Acquity H-class/X evo TQD超高效液相色谱-串联四极杆质谱联用仪（沃特世公司）；Fotector p氮吹仪（美国Reeko公司）；UMV-3多管漩涡混合器（北京优晟联合科技有限公司）；高速台式冷冻离心机H1750R（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；GM200刀式混合研磨仪（德国Retsch公司）。1.3方法1.3.1样品前处理谷物样品经粉碎后，准确称取5.000 g置于50 mL离心管中，加入10 mL水浸泡30 min后，加入10 mL乙腈，涡旋振荡2 min；加入1 g氯化钠，4 g无水硫酸钠，涡旋振荡2 min，以10 000 r/min离心6 min；吸取上清液于15 mL具塞离心管中，加入50 mg PSA、150 mg C18、900 mg无水硫酸钠，涡旋2 min，以10 000 r/min离心6 min；取上清液于40 水浴中氮吹至近干，用1 mL乙腈溶液复溶，经0.22 m滤膜过滤后上机分析。1.3.2标准溶液配制准确称取10 mg噻霉酮标准品，用乙腈溶解并定容至100 mL容量瓶中，配制成100 g/mL标准储备液，于-18 冰箱保存。1.3.3液相色谱条件色谱柱Waters BEH C18柱（2.1 mm100 mm，1.7 m）；流动相A为0.1%甲酸水，流动相B为乙腈，流速0.25 mL/min；进样量10.0 L；柱温40。梯度洗脱程序：00.5 min，10%B；0.52.5 min，10%40%B；2.54 min，40%90%B；44.1 min，90%10%B；4.16 min，10%B。1.3.4质谱条件离子源采用电喷雾正离子模式（electron spray ionization，ESI+）；多重反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）；毛细管电压3 200 V；离子源温度300；脱溶剂温度250。表1噻霉酮质谱参数化合物母离子(m/z)子离子(m/z)锥孔电压/V碰撞能量/eV噻霉酮151.6108.5*3020133.53020注:*为定量离子。2结果与分析2.1质谱条件的优化采用注射泵将1.0 g/mL噻霉酮标准溶液注入离子源。在Q1 Mass模式下进行全扫描，分别考察在正离子（ESI+）和负离子（ESI-）2种模式下，噻霉酮各碎片离子的响应值。结果表明，噻霉酮在ESI+模式下M+H+的响应值较高，因此选择正离子扫描模式。进一步优化碎裂电压和碰撞能量等参数，使其达到最佳的离子化效率，确定的噻霉酮的质谱参数见