ZEB1和ZEB2在子宫腺肌症患者中的表达及意义_朱虹.pdf

江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11摘要：目的探讨E-盒结合锌指蛋白（ZEB1/ZEB2)在子宫腺肌症中的表达及临床意义。方法选取2018年6月至2020年3月于南昌市第一医院就诊的35例行全子宫切除的子宫腺肌症患者的子宫内膜组织作为实验组，10例因宫颈上皮内瘤变行全子宫切除的内膜组织作为对照组，采用免疫组化法检测ZEB1、ZEB2在两组中的表达情况并分析其与患者的临床特征的相关性。结果 ZEB1在两组中的阳性表达率分别为74.29%（26/35）、30.00%（3/10）；ZEB2在两组中的阳性表达率分别为22.86%（8/35）、20.00%（2/10）。ZEB1在子宫腺肌症子宫内膜中阳性表达显著高于正常子宫内膜（P=0.027）；ZEB2在子宫腺肌症子宫内膜中的阳性表达高于正常子宫内膜，但差异无统计学意义。子宫腺肌症子宫内膜组织中ZEB1、ZEB2表达与患者的年龄、绝经状态、痛经、孕次、产次、月经周期、血清CA125水平均无明显相关性（P0.05）。结论 ZEB1在子宫腺肌症患者中高表达，提示其可能参与了子宫腺肌症的发生，其表达水平与患者的年龄、绝经状态、痛经、孕次、产次、月经周期、血清CA125水平无关。关键词：子宫腺肌症；ZEB1；ZEB2；免疫组织化学中图分类号：R711.71文献标识码：B文章编号：1006-2238(2022)11-1722-05DOI：10.3969/j.issn.1006-2238.2022.11.004Expression and Significance of ZEB1 and ZEB2 in Adenomyosis ZHU Hong1,WU Lv2,HUANG Wenqian2,et al.1.Departmentof Obestetrics and Gynecology,Nanchang First Hospital,330006,Nanchang,China；2.Jiangxi Medical College,Nanchang University330006,Nanchang,China.Abstract：Objective This study aimed to explore the expression and clinical significance of zinc finger E-box binding pro-tein(ZEB1and ZEB2)in adenomyosis.Methods Thirty-five patients with adenomyosis who underwent total hysterectomy in Nan-chang First Hospital from June 2018 to March 2020 were categorized into the experimental group,and 10 patients with cervicalintraepithelial neoplasia who underwent total hysterectomy were classified into the control group.Immunohistochemistry was used todetect the expression of ZEB1 and ZEB2 in the two groups and to analyze their correlation with the clinical characteristics of pa-tients.Results Immunohistochemical results revealed that the positive expression rates of ZEB1 in adenomyosis and normal en-dometrium were 74.29%(26/35)and 30.00%(3/10),respectively.The positive expression rates of ZEB2 in adenomyosis and nor-mal endometrium were 22.86%(8/35)and 20.00%(2/10),respectively.The positive expression rate of ZEB1 in adenomyosis wassignificantly higher than that in normal uterus,and the differences were statistically significant(P=0.027).The positive expressionrate of ZEB2 in adenomyosis was higher than that in normal uterus,but the difference was not statistically significant.The expres-sion of ZEB1 was not significantly correlated with age,dysmenorrhea,menopausal status,menstrual cycle,pregnancy,parity,andserum CA125 level(P0.05).Conclusion ZEB1 is highly expressed in adenomyosis and is thus involved in the development andprogression of adenomyosis.The expression of ZEB1 is not correlated with age,menopausal status,dysmenorrhea,menstrual cycle,pregnancy,parity,and serum CA125 level.Key words:Adenomyosis；ZEB1；ZEB2；ImmunohistochemistryZEB1 和 ZEB2 在子宫腺肌症患者中的表达及意义朱虹1，吴绿2，黄文倩2，邹霞1，李云凤2，高军1（1.南昌市第一医院妇产科；2.南昌大学第三临床医学院，南昌 330006）基金项目：南昌市科技局科技支撑项目，编号洪科字（2019）228 号；2021 年度江西省卫生健康委员会科技计划，编号 202120072；南昌市医疗卫生科技支撑项目重点项目，编号洪科字（2021）129 号第 1项；2021 年度江西省中医药科技计划一般项目，编号 2021B666通信作者：高军子宫腺肌症作为一种常见的妇科疾病，其特征是子宫肌层内存在间质和子宫内膜腺体，伴随着与子宫肌层相邻的结缔组织的增生和肥大，最常见的症状是进行性痛经、异常子宫出血、慢性盆腔疼痛和月经过多1，但其发病机制和病因目前还不清楚。子宫腺肌症是一种良性疾病，但其生物学行为类似于恶性肿瘤，如异常增殖、迁移和侵袭2。有研究表明子宫腺肌症的发生发展与上皮间质转化（EMT)密切相关3。EMT是指上皮细胞获得间质细胞的特性，失去上皮细胞的表型，以增强其侵袭及抗细胞凋亡能力的过程4-5。E-钙黏蛋白（E-cadherin）主要分布 实验研究 1722江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal，November 2022，Vol 57，No11于上皮细胞中，与维持上皮细胞的表型密切相关，是一种关键的细胞粘附分子，E-cadherin表达减少是EMT的一个重要标志6-7。E-cadherin的下调被几个转录因子抑制，包括ZEB1、ZEB2、SNAI1、SNAI2、Twist1、Twist2和E12/E478。其中，ZEB家族(ZEB1/ZEB2)为锌指转录因子代表，作为EMT的核心转录因子，与启动子中E-box相互结合，抑制E-cad-herin的表达，促进EMT的发生9。本研究中，我们通过免疫组化方法检测ZEB1、ZEB2在子宫腺肌症内膜及正常子宫内膜的表达差异，为子宫腺肌症的发病机制提供理论依据。1资料与方法1.1一般资料 收集2018年6月至2020年3月于南昌市第一医院妇科就诊的35例子宫腺肌症患者行全子宫切除的子宫内膜组织作为实验组，10例因宫颈上皮内瘤变行全子宫切除的内膜组织作为对照组。通过查询南昌市第一医院病历信息系统，收集子宫腺肌症患者的临床特征包括患者的年龄、痛经情况、绝经状态、孕次、产次、月经周期、血清CA125水平等内容。其中子宫腺肌症患者的年龄范围3655岁，平均年龄为（45.264.455岁）。1.2主要试剂 本试验采用HE染色和免疫组织化学方法检测；兔源ZEB1多克隆抗体、兔源ZEB2多克隆抗体购自美国Abcam公司；DAB显色试剂、免疫组化SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.3实验方法1.3.1 HE染色 组织经石蜡包埋，切片后，烤片，然后脱蜡，水化。将已放入蒸馏水后的切片放入苏木精(AR1180-1，博生德)水溶液中染色3 min，盐酸乙醇分化液分化15 s，稍水洗，Scott返蓝液(G1865，Solarbio)返蓝15 s，流水冲洗，伊红(AR11800-2，BOSTER)染色3 min，流水冲洗，脱水，透明，封片，镜检。1.3.2免疫组化 组织石蜡切片水化后使用柠檬酸缓冲液高压加热修复抗原。3%双氧水室温孵育10min，以去除内源性过氧化物酶封闭液。在玻片上滴加5%BSA，37 C封闭30 min。每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗：ZEB1（1200）、ZEB2（1500），放入湿盒中，4 C孵育过夜。之后滴加二抗工作液，37 C孵育30 min。DAB显色510 min；苏木精复染3 min，盐酸酒精分化，返蓝；自来水冲洗1 min，脱水、透明、封片、镜检。1.4结果判定 免疫组化结果判定指标为细胞浆细胞膜内棕黄色颗粒状着色即为阳性。判定标准采用半定量评分法。免疫组化标记结果结合细胞染色的百分比及染色强度进行判定。染色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞百分比：无阳性细胞为0分，l为1分，10为2分，50为3分，75。为4分。2项评分乘积4为阴性，4分为阳性。免疫组化结果由两位经验丰富的病理医生通过双盲法判定。1.5统计分析 所有数据均用SPSS19.0进行统计分析，组间采用卡方检验，ZEB1、ZEB2与患者的临床病理特征的相关性采用Pearson相关性分析，以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1 ZEB1、ZEB2蛋白在子宫腺肌症中的表达情况ZEB1在子宫腺肌症内膜和正常子宫内膜中的阳性表达率分别为74.29%（26/35）、30.00%（3/10）；ZEB2在子宫腺肌症内膜和正常子宫内膜中的阳性表达率分别为22.86%（8/35）、20.00%（2/10）见图12。ZEB1在子宫腺肌症子宫内膜中阳性表达显著高于正常子宫内膜（P=0.027）；而ZEB2在子宫腺肌症子宫内膜中的阳性表达与正常子宫内膜相比没有显著差异（P=0.848）见表12。2.2 ZEB1、ZEB2蛋白阳性表达与子宫腺肌症临床特征的相关因素分析 子宫腺肌症子宫内膜组织中ZEB1、ZEB2的表达与患者的年龄、痛经、月经周期、孕次、产次、血清CA125水平均无明显相关性（P0.05），见表34。图 1 子宫腺肌症和正常子宫内膜组织 HE 染色（HE200）3讨论子宫腺肌症是一种常见的妇科疾病，其发病机制和病理生理学尚不清楚。有研究表明上皮-间质转化(EMT)可能在子宫腺肌症的发展中起作用，导致子宫腺肌症上皮细胞的侵袭倾向增加7。EMT的1723江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jian